华支睾吸虫感染FVB小鼠的试验研究

为了观察华支睾吸虫感染FVB小鼠肝脏组织病理变化,将12只健康雌性FVB小鼠随机分成2组,分别为正常组与感染组,每组6只。感染组小鼠经口灌饲45个华支睾吸虫囊蚴。于感染后25d用NaOH消化法检测粪便虫卵阳性率,感染后第112天收集肝脏组织,进行HE染色及Masson染色观察肝脏病理变化情况;收集外周血,ELISA检测血清中华支睾吸虫特异性IgG抗体。虫卵检查结果显示,感染组小鼠在感染后25d检查到虫卵,肉眼观察小鼠肝小叶边缘有白色结节样病变,肝脏表面有白色透明水泡。感染组小鼠血清中华支睾吸虫特异性IgG水平显著高于正常组(P<0.01)。HE染色观察小鼠肝脏组织,见到虫体,炎症细胞浸润严重,纤维化明显并伴有点状坏死。肝细胞肿胀,肝窦狭窄,胆管扩张增生显著,胆管上皮细胞水肿、坏死,部分胆管上皮细胞胞浆均质红染。Masson染色显示肝脏组织尤其是虫体周围出现大面积纤维化。试验结果表明,华支睾吸虫感染FVB小鼠肝脏病变严重,因此可利用该品系小鼠建立华支睾吸虫感染模型,为深入研究华支睾吸虫的致病机制奠定基础。

FVB小鼠的不同日龄的体重动态变化

目的 通过对FVB小鼠的不同日龄的体重动态变化的观察,找出其生长发育的特点,为进一步的研究提供基础资料.方法 对不同日龄、不同代数、不同胎次的体重,进行统计学处理和分析.结果 FVB小鼠第一、二、三代之间不同日龄体重比较中,21日龄第二代与第一代比较有显著性差异（P＜0.01）;第一胎和第二胎平均体重比较中,FVB小鼠0日龄第二胎与第一胎比较有显著性差异（P＜0.01）.结论 FVB小鼠的不同日龄的体重变化,与其它小鼠的品种基本相似,符合生长发育一般规律.

高压氧对FVB小鼠高架十字迷宫行为的影响

目的探讨高压氧对FVB小鼠的高架十字迷宫行为的影响。方法 9只高压氧组30日龄FVB小鼠进行两个疗程共21天高压氧干预,13只对照组四周龄FVB小鼠,不作任何处理,正常饲养。21天后对两组小鼠分别进行高架十字迷宫实验,观察高压氧对小鼠的高架十字迷宫行为的影响。结果较对照组小鼠,高压氧组小鼠闭臂进入次数及进臂总次数显著增加(31.67±7.92,19.00±7.54;47.33±9.63,34.10±11.27,P<0.05);开臂的路程、在开臂路程占总路程百分比、开臂停留时间及开臂停留时间占各臂总停留时间百分比都显著减少(472.89±380.12,1549.89±947.39;12.78±10.68,36.06±17.01;39.88±28.23,97.00±57.62;19.79±14.18,43.72±18.99,P<0.05);而在闭臂的路程、在闭臂路程占总路程百分比、闭臂停留时间及闭臂停留时间占总停留时间百分比都显著增加(3412.29±837.77,2568.35±631.36;87.22±10.68,63.94±17.01;164.48±33.96,118.13±48.98;80.21±14.18,56.28±18.99,P<0.05);开臂进入次数、开臂进入次数占总进臂次数百分比、闭臂进入次数占总进臂次数百分比、开臂与闭臂的总路程两者无明显差异(15.67±7.70,15.10±6.76;32.57±13.86,43.25±12.30;67.43±13.85,56.75±12.30;3885.18±680.04,4118.23±903.22,P>0.05)。结论高压氧能改变FVB小鼠的高架十字迷宫行为的表型,使小鼠活力增强、对环境的认知能力及焦虑程度增强。

先天性晚发白内障FVB小鼠突变基因定位及筛选

目的以自发突变导致的先天性晚发白内障小鼠为模型,进行遗传方式鉴定和白内障相关基因定位分析。方法首先通过显微镜观察组织切片鉴定白内障病理状态,其次通过构建家系确定先天性晚发白内障在FVB小鼠中的遗传方式,其次利用多重PCR靶向测序进行100只F2代小鼠的全基因组SNP扫描定位,最后利用全外显子测序筛选出候选突变基因。结果组织切片表明自发突变引起为典型白内障性状,全基因组扫描定位显示11号染色体上的rs4228772 SNP位点与白内障表型连锁程度最高;全外显子测序结果进一步表明11号染色体上有三个基因产生了自发突变,分别是Sfi1,Obscn和Ptrh2。结论本研究使用全基因组SNP扫描连锁分析与外显子测序相结合的策略,可在已知参考基因组的物种中快速定位基因突变,结果确定了11号染色体上的三个突变基因为先天性晚发型白内障的候选基因,并以显性方式遗传。该策略亦可应用于其它遗传背景清晰的模式哺乳动物的基因功能研究。

高压氧对FVB小鼠旷场行为的影响

目的探讨高压氧对FVB小鼠旷场行为的影响。方法对9只4周龄高压氧组FVB小鼠进行2个疗程共21天高压氧干预;对13只4周龄对照组FVB小鼠不做任何处理,正常饲养。21天后对2组小鼠进行旷场实验,观察高压氧对FVB小鼠旷场行为的影响。结果高压氧组小鼠在中央区停留时间(3.73±3.69,17.97±6.82,t=-5.564,P=0.000)和运动路程较对照组小鼠减少(189.65±199.32,525.67±244.22,t=-3.298,P=0.040),在外周区停留时间增加(296.07±3.69,281.79±6.79,t=5.597,P=0.000);进入中央区、外周区次数及穿越各区总次数都减少(3.11±3.10,8.20±4.80,t=-2.770,P=0.014;3.11±3.10,9.10±4.79,t=-3.264,P=0.005;6.22±6.20,17.30±9.59,t=-3.018,P=0.008);2组小鼠总路程和平均速度无差异(8766.57±3362.90,8320.47±1692.47,t=0.359,P=0.726;73.05±28.02,69.34±14.10,t=0.359,P=0.726)。结论高压氧改变FVB小鼠的旷场行为的表型,使小鼠趋避性增加,对环境的认知能力及焦虑程度增强,探索性下降。

FVB和EIIa-Cre小鼠胚胎冷冻保存研究

为探索FVB和EIIa-Cre小鼠的最佳超排及胚胎冷冻方法,对4～6周龄FVB和EIIa-Cre小鼠进行超数排卵效果比较。结果表明,FVB和EIIa-Cre的超排数量分别为每鼠平均33.71枚和24.23枚,发育至2-细胞期的数量分别为30.43枚和17.08枚,EIIa-Cre的胚胎数明显少于FVB。FVB和EIIa-Cre的胚胎复苏率、妊娠率和产仔率均存在较大差异,分别为77.7%和63.0%、80.0%和57.1%、13.6%和8.2%,FVB小鼠均高于EIIa-Cre小鼠。

华支睾吸虫感染FVB小鼠不同组织CD4^+T细胞TLR4表达变化

目的观察华支睾吸虫感染小鼠不同组织CD4^+T细胞TLR4的表达变化。方法建立华支睾吸虫感染小鼠模型,分别在感染2、4、8周剖杀小鼠,收集外周血、肝脏和脾脏组织并分离其单核细胞,运用流式细胞术检测CD4^+T细胞TLR4表达水平变化。结果小鼠感染华支睾吸虫2周后,外周血、肝脏、脾脏CD4^+T细胞TLR4表达水平显著高于正常对照组(t值分别为5.87,6.59,4.46,P<0.05),感染4周时肝脏和外周血TLR4表达量达到了峰值,随后下降,但到8周时其表达量仍高于正常对照组(t值分别为8.93,17.17,P<0.05);脾脏细胞TLR4表达量随着感染时间的延长其表达量逐渐升高,到8周时TLR4表达量高于4周TLR4表达量(t=5.83,P<0.05)。结论 FVB小鼠感染华支睾吸虫后CD4^+T细胞TLR4表达水平升高,且随着感染的持续,不同组织TLR4表达水平不同,提示高表达的TLR4在宿主抵抗华支睾吸虫感染及致病中发挥一定作用。

雄性Fmr1基因敲除小鼠血液生理生化指标及性激素水平的比较研究

目的比较雄性Fmr1基因敲除小鼠和FVB小鼠血液生理生化值和血清性激素水平,探讨Fmr1基因对动物生长发育和生殖生理等方面的影响。方法分别测定血液生理指标、血清生化指标、血清电解质和血清E2、LH、FSH、T和PRL的含量,并进行统计学处理和分析。结果雄性Fmr1基因敲除小鼠与FVB小鼠比较,血液生理指标中MCV和PCT有显著差异(P<0.05),而RBC、HCT、HGB、MCH和WBC等无显著差异(P>0.05);血清生化指标中除TBIL[、IP3+][、Mg2+](P<0.05)和ALP、BUN(P<0.01)外,TPROT、GLB、A/G、BUN、CREAT、[K+]、[Na+]等项均无显著差异(P>0.05)。性激素水平E2、LH值差异无显著性(P>0.05),FSH、T、PRL差异极显著(P<0.01)。结论Fmr1基因可影响动物的某些生理生化及激素水平。

乳腺癌小鼠模型常用品系在药物研究中的应用

近几年,国内外学者建立了一系列乳腺癌小鼠模型用于乳腺癌的发病机制、侵袭转移、药物治疗效应等研究,常用的乳腺癌小鼠模型有自发、诱导、移植或转基因等几种,这些乳腺癌小鼠模型在一定程度上模拟了乳腺癌在体内发生、侵袭、转移等过程,可为乳腺癌的研究提供基础。本文就乳腺癌小鼠模型常用品系以及在乳腺癌药物治疗研究中应用作简要概述。

利用CRISPR/Cas9技术构建Mex3c基因缺陷小鼠模型

目的利用CRISPR/Cas9技术敲除FVB小鼠Mex3c基因,为进行相关研究提供Mex3c基因缺陷小鼠模型。方法利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,针对性设计Mex3c基因1~2外显子sgRNA,将小鼠mex3c基因的sgRNA和Cas9 mRNA共注射到受精卵中,产生目标基因敲除子代,待小鼠出生3周后剪鼠尾提取DNA并进行PCR鉴定,所获F0代杂合小鼠继续与野生型小鼠合笼繁殖获取F1、F2代小鼠,剪取组织提取DNA鉴定分离杂合体小鼠。结果获得了6只Mex3c基因杂合突变的F0代小鼠,F1代共20只雌性杂合小鼠,F2代24只雌性杂合小鼠,能够稳定遗传Mex3c缺陷基因。基因组测序结果显示获得正确敲除的杂合子。结论成功获得Mex3c基因缺陷的FVB小鼠,为研究不同能量代谢条件下的子代鼠胚神经管发生发育提供了重要工具。

MiR-31转基因小鼠的构建及其在组织器官的表达

目的构建稳定过表达的miR-31转基因小鼠,检测其主要组织器官中miR-31的表达变化情况并对在体miR-31过表达的应用提供合格的工具鼠。方法使用Gateway cloning技术构建miR-31过表达载体,使用DNA显微注射技术将构建好的载体注入受精卵内,随后转移至假孕母鼠内,待其自然生产。将新生小鼠提取尾部DNA,PCR及琼脂糖凝胶电泳鉴定miR-31过表达阳性小鼠,筛选阳性小鼠并饲养繁殖。另取阳性小鼠,提取主要组织器官的miRNA并使用RT-PCR检测其miR-31的表达量。同时对比阳性小鼠和野生型小鼠神经系统中Nestin的表达和神经干细胞的数量。结果成功构建了miR-31过表达转基因小鼠,并在屏障环境下饲养繁殖至14代以上。各主要组织器官miR-31的表达均升高且稳定表达。阳性小鼠Nestin的表达和神经干细胞数量均高于野生型小鼠。结论通过使用Gateway cloning技术成功构建了miR-31过表达转基因小鼠,且在各代小鼠中miR-31的表达稳定,神经系统内的神经干细胞数量多于野生型小鼠,可为进一步研究miR-31过表达后在体内的功能和神经系统疾病的治疗提供良好的工具小鼠。

急性早幼粒细胞白血病小鼠动物模型建立的研究现状

急性早幼粒细胞白血病(Acute promyelocytic leukemia,APL)是造血组织的一类恶性疾病。动物模型是探讨人类相关疾病的重要工具。研究表明,APL小鼠模型可以通过转基因、逆转录病毒介导和白血病细胞移植的方法建立,且该三种方法建立的模型均可再移植。这些模型的建立为了解APL发病机制和疗效研究奠定了基础。判断模型是否成功建立,可以通过血常规、血涂片和骨髓涂片检查、免疫学、分子生物学及病理学的相关检查完成。成功建立APL动物模型,可为研究人类APL发生、发展和评价药物疗效提供重要的实验基础及理论依据,从而有助于人们进一步了解APL。

重组人纽表位肽12生物学活性测定方法的研究

目的:建立适用于重组人纽表位肽12体外质量控制的生物学活性测定方法,用于该制品的生物学活性评价。方法:采用小鼠,比较不同品系、给药浓度、给药周期等条件下应用ELISA方法检测出的小鼠相应抗体水平,确定最佳实验条件,以建立相应的体外活性测定方法。结果:FVB/N转neu基因小鼠(TgN MMTVneu 202 Mul,Jackson Lab.,USA)对重组人纽表位肽12的反应存在量——效关系,并确定了最佳测定条件和给药剂量,用抗体阳转百分率作为评价指标,样品测定重复性较好,CV％值为6.7％(n=4),结果可靠。结论:已建立的FVB/N转neu基因小鼠测定重组人纽表位肽12生物学活性的方法可用于重组人纽表位肽12生物学活性的常规评价。

RAD18基因在小鼠胚胎中的表达分析

为了研究RAD18基因在小鼠胚胎发育过程中的表达模式,试验以体外培养的FVB小鼠胚胎为材料,采用定量RT-PCR及免疫荧光技术分析RAD18基因在小鼠胚胎中的表达水平。qRT-PCR结果表明,RAD18基因在小鼠植入前各时期胚胎中均有表达,其中与1-细胞期胚胎相比,其在2-细胞、8-细胞期胚胎中表达水平较高(P<0.01),在桑葚期和囊胚期胚胎中表达量显著下降(P<0.01)。免疫荧光方法检测结果表明RAD18蛋白在在小鼠植入前各时期胚胎中均有表达。说明RAD18基因在小鼠植入前胚胎中均有表达,推测其与小鼠胚胎的早期发育密切相关。