WNK2通过抑制ERK1/2/ROS/SHP2信号通路延缓肝细胞癌的增殖和侵袭

目的探讨WNK2对肝细胞癌(hepatocellocellua carcinoma,HCC)中ERK1/2/ROS/SHP2信号通路的影响,并探讨其在HCC细胞增殖和迁移中的作用。方法将WNK2-mimic和sh-RNA WNK2以及相应的阴性对照转染HepG2细胞,采用BALB/c裸鼠皮下成瘤实验检测WNK2对肝细胞癌增殖能力的影响;采用Western Blot检测瘤组织中WNK2、p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达;使用SHP2抑制剂PHPS1进行处理之后,采用Western Blot检测HepG2细胞中WNK2、p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达;使用细胞划痕实验和Transwell检测HepG2细胞的迁移能力和侵袭能力;采用单克隆增殖实验和CCK-8检测HepG2细胞的增殖能力。结果与sh-NC组相比,sh-RNA WNK2组裸鼠的瘤体体积显著增大(P<0.01);而与NC-mimic组相比,WNK2-mimic组裸鼠的瘤体体积显著减小(P<0.01);Western Blot结果显示,与sh-NC组相比,sh-RNA WNK2组WNK2的表达显著降低(P<0.01),p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著升高(P<0.01);而与NC-mimic组相比,WNK2-mimic组WNK2的表达显著升高(P<0.01),p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著降低(P<0.01);在体外实验当中,相对于sh-NC组,sh-RNA WNK2组中WNK2的表达显著降低(P<0.01),p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著升高(P<0.01);相对于sh-NC+PHPS1组,sh-RNA WNK2+PHPS1组中WNK2的表达显著降低(P<0.01),而p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达则被逆转并且与sh-NC+PHPS1组不具有显著性差异(P>0.05);细胞划痕实验和Transwell结果显示,相对于sh-NC组,sh-RNA WNK2组HepG2细胞的迁移和侵袭能力显著升高(P<0.01);sh-NC+PHPS1组和sh-RNA WNK2+PHPS1组HepG2细胞的迁移和侵袭能力显著降低并且不具有显著性差异(P>0.05);单克隆增殖实验结果显示,相对于sh-NC组,sh-RNA WNK2组HepG2细胞的增殖能力显著升高(P<0.01),而sh-NC+PHPS1组和sh-RNA WNK2+PHPS1组HepG2细胞的增殖能力显著降低并且不具有显著性差异(P>0.05)。结论WNK2可以抑制ERK1/2/ROS/SHP2信号通路,从而抑制ERK1/2/AKT信号通路,延缓HCC的增殖和迁移。

LHPP通过调控NOX2/SHP2通路活性抑制结直肠癌的增殖、侵袭和转移

目的探讨组氨酸磷酸酶(LHPP)通过氧化应激通路对结直肠癌增殖、侵袭和迁移的影响,并初步阐明其作用机制。方法使用Liposome3000进行细胞转染操作。将质粒OE-NC、OE-LHPP和寡核苷酸片段si-NC、si-LHPP分别转染进SW480细胞中,通过Western Blot检测LHPP、NOX2、p-SHP2的蛋白表达量;将质粒OE-NC、OE-LHPP组转染进SW480细胞中并同时使用NCA刺激,通过Western Blot检测NOX2、p-SHP2、p-PI3K、p-ERK1/2、MMP-9、Cyclin D1的蛋白表达量;将质粒OE-NC、OE-LHPP转染进SW480和SW620细胞中,并同时使用NAC刺激,通过划痕实验检测细胞的迁移距离,Transwell实验检测通过孔的细胞数量,克隆形成实验检测细胞的增殖能力。结果SW480细胞中OE-LHPP组LHPP和NOX2蛋白表达水平明显高于OE-NC组(P<0.05),但p-SHP2蛋白表达水平明显低于OE-NC组(P<0.01);SW480细胞中si-Si-LHPP组LHPP和NOX2蛋白表达水平明显低于OE-NC组(P<0.01),但p-SHP2蛋白表达水平明显高于si-NC组。与OE-NC组相比,SW480细胞中OE-LHPP的NOX2蛋白表达水平明显升高(P<0.01),但p-SHP2、p-PI3K、p-ERK1/2、MMP-9、Cyclin D1蛋白表达水平明显降低(P<0.01),SW480和SW680细胞迁移距离缩短、穿过孔的细胞数量减少和细胞克隆形成数量减少;加入NAC干预后,消除了SW480和SW680细胞中OE-NC组和OE-LHPP组在NOX2、p-SHP2、p-PI3K、p-ERK1/2、MMP-9、Cyclin D1的差异,也消除了细胞划痕、细胞侵袭和细胞增殖的差异。结论LHPP通过促进氧化应激抑制SHP2、PI3K和ERK通路活性进而抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移的影响进而缓解结直肠癌的进展。

胆汁酸和MAPK信号通路对HepG2细胞中PPARα转录表达的调控作用

目的探究胆汁酸(bile acids,BAs)和MAPK信号通路对HepG2细胞中人类过氧化物酶体增殖物激活受体α(human peroxisome proliferation activated receptorα,hPPARα)转录表达的调控作用。方法PCR扩增hPPARα基因启动子片段P1(-764~+228 bp)、P2(-2090~-744 bp)、P2-1(-744~-1287 bp)、P2-2(-1548~-1265 bp)、P2-3(-2090~-1540 bp),将扩增得到的片段分别插入荧光素酶报告基因质粒(pGL4-luc2P-Hygro)的启动子上游。将包含hPPARα基因启动子片段的荧光素酶报告基因质粒转染HepG2细胞,分别用U0126(ERK1/2信号通路选择性小分子抑制剂)、SP600125(JNK1/2信号通路选择性小分子抑制剂)、石胆酸(lithodeoxycholic acid,LCA)、脱氧胆酸(deoxycholic acid,DCA)、鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)、甘氨脱氧胆酸(glycodeoxycholic acid,GDCA)、熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)进行处理,每次处理均以DMSO处理组作为对照,通过双荧光素酶报告基因试验分别检测ERK1/2、JNK1/2信号通路以及胆汁酸对hPPARα启动子片段的调控作用。另外,在HepG2细胞中共转染荧光素酶报告基因质粒与人类法尼酯X受体(human farnesoid X receptor,hFXR)过表达质粒,用GW4064激活过表达的hFXR,通过双荧光素酶报告基因试验检测胆汁酸的生理受体hFXR对hPPARα启动子片段的调控作用。利用数据库预测片段中相关转录因子的结合位点,通过重组PCR定点突变以及双荧光素酶报告基因试验验证所预测位点的作用。结果与DMSO对照组相比,U0126组P1、P2片段的转录活性无显著变化;SP600125组P2片段的转录活性被显著抑制(P<0.05)。进一步研究表明,SP600125对P2-1、P2-2、P2-3片段的转录活性均有抑制作用(P<0.01)。在P2-1片段中预测得到两个c-Jun结合位点,其中位点1突变减弱了SP600125的抑制作用(P<0.0001),而位点2突变没有影响SP600125的抑制作用。在5种胆汁酸的处理中,与DMSO对照相比,LCA处理显著抑制P2片段的转录活性(P<0.05),而CDCA、DCA、GDCA、UDCA处理没有影响P2片段的转录活性。在HepG2细胞中过表达hFXR,GW4064激活显著诱导P1、P2片段的转录活性(P<0.01),将P2片段中预测得到的FXR反应元件(FXR response element,FXRE)进行重组PCR定点突变后,hFXR的诱导作用显著减弱(P<0.05)。结论胆汁酸和MAPK信号通路在HepG2细胞中调控hPPARα的转录表达,其中JNK1/2信号通路通过hPPARα启动子中c-Jun结合位点调控其转录表达;hFXR通过hPPARα启动子中FXRE诱导其转录表达;LCA抑制hPPARα的转录表达。

基于FXR/FGF15信号通路的益气活血通络方对2型糖尿病小鼠糖脂代谢的影响

目的通过实验观察FXR/FGF15信号通路变化,揭示益气活血通络方对2型糖尿病小鼠糖脂代谢影响的研究。方法 2型糖尿病模型小鼠造模采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射,将成模后的60只小鼠随机分为模型组、空白组、益气活血通络方高剂量组、益气活血通络方低剂量组、二甲双胍组各 12 只。观察益气活血通络方对糖尿病小鼠随机血糖、糖化血红蛋白、血脂、胆汁酸代谢、FXR和 FGF15 的影响。结果益气活血通络方与模型组比较可明显降低DM小鼠血糖含量,并通过调节 FXR和FGF15 表达水平,抑制DM的发生发展。结论益气活血通络方对DM小鼠糖脂代谢起到一定的调节作用,其机制可能与益气活血通络方对FXR/FGF15信号通路作用相关。

miR-186通过Shp2和PI3K/Akt/mTOR信号通路对肺腺癌细胞的抑制作用

目的探讨miR-186过表达对肺腺癌细胞生长的影响及其是否与调节Shp2和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。方法将人肺腺癌细胞A549分为Con-mimic组、miR-186-mimic组和Con组,采用CCK8细胞增殖实验检测miR-186对细胞增殖的影响;采用划痕实验检测miR-186对细胞转移的影响;采用Transwell细胞侵袭实验检测miR-186对细胞侵袭能力的影响;采用RT-PCR和Western Blot检测miR-186对Shp2基因mRNA和蛋白水平的影响;采用Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达水平。结果相较Con-mimic组和Con组,miR-186-mimic组的细胞集落形成率即增殖率均极显著下调(P<0.01);相较Con-mimic组和Con组,miR-186-mimic组的细胞转移能力均极显著受限(P<0.01);相较Con-mimic组和Con组,miR-186-mimic组的细胞侵袭能力均极显著受限(P<0.01)。相较Con-mimic组和Con组,miR-186-mimic组的Shp2的mRNA和蛋白表达水平均极显著下调(P<0.01);相较Con-mimic组和Con组,miR-186-mimic组的PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平均显著下调(P<0.05)。结论miR-186可以通过下调Shp2基因表达和激活PI3K/Akt/mTOR信号通路从而实现对肺腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。

SHP2与乳腺癌侵袭转移相关性的研究进展

含Src同源区2蛋白质酪氨酸磷酸酶(Src homology 2 domain containing protein tyrosine phosphatases,SHP2)是一种跨膜型蛋白酪氨酸磷酸酶,通过调节细胞内蛋白质的酪氨酸磷酸化水平,在细胞信号转导通路及控制细胞活性中发挥重要的作用。其活化状态与乳腺癌发生发展过程中的Ras/ERK,PI3K/Akt/mTOR等信号通路、激素水平、侵袭转移、肿瘤干细胞的生物学行为等密切相关。SHP2基因的敲除或抑制SHP2蛋白表达,可不同程度阻断与乳腺癌侵袭、转移相关的信号通路,从而抑制肿瘤生长,甚至不可逆地使肿瘤丧失重新获得干细胞特性的能力。因此,SHP2很可能为抗肿瘤药物的研发提供一个新的靶点。本文就SHP2与乳腺癌侵袭转移的相关研究进展进行综述。

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2在肺癌中的研究进展

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2是一种广泛分布于机体细胞的磷酸酶,与蛋白激酶共同调控靶蛋白磷酸化水平,对细胞增殖、分化、凋亡、侵袭、转移、耐药性等方面发挥重要调控作用。SHP2促进多种癌症的肿瘤进展,SHP2活性降低抑制肿瘤细胞的生长,是癌症治疗的潜在目标。鉴于SHP2在肺癌中的表达减低或敲除可抑制和延缓肿瘤进展,SHP2有望成为肺癌治疗的新靶点。本文就SHP2在肺癌中的表达、相关信号通路及耐药性的相关研究进行综述。

SHP2促进癌症发生发展与其抑制剂开发进展

SHP2(PTPN11基因编码的非受体型酪氨酸磷酸酶)通过调控生长因子/细胞因子受体调节信号转导过程从而维持细胞的增殖、分化、凋亡和存活。条件性敲入小鼠模型验证了PTPN11基因激活突变主要通过调节RTK信号通路如RASMAPK,PI3K-AKT,JAK-STAT来促进血液恶性肿瘤与实体肿瘤的发生。目前SHP2已经成为公认的恶性肿瘤治疗靶点,通过新型SHP2变构抑制剂阻断肿瘤生长具有临床应用前景。然而SHP2变构抑制剂单独或联合用药在针对特定肿瘤治疗过程中存在耐药性、非特异性和副作用等限制,更加有效的SHP2抑制剂的开发或联合用药策略的优化已成为关键问题。全文对SHP2在调控生长因子/细胞因子相关信号通路中发挥的作用及其激活突变导致恶性肿瘤发生的分子机制进行了总结,在此基础上综述了近年来SHP2抑制剂的开发和其用于治疗恶性肿瘤的临床进展。

葛根芩连汤含药血清对游离脂肪酸诱导的HepG2细胞脂肪堆积模型FXR通路相关信号因子的影响

目的利用体外游离脂肪酸(Free Fat Acid,FFA)诱导的HepG2细胞脂肪堆积模型,分析葛根芩连汤含药血清对FXR通路相关信号因子的影响。方法用1mmol/L FFA诱导HepG2细胞建立脂肪堆积模型,给予不同浓度的葛根芩连汤和吡格列酮含药血清进行干预。采用TG试剂盒法检测HepG2细胞脂肪变性状况。WB法检测HepG2细胞内FXR蛋白表达水平。qRT-PCR法检测各组HepG2细胞内FXR、CYP7A1、SHP、FGFR4和TGR5 mRNA表达程度。结果葛根芩连汤中剂量组、低剂量组的TG含量比模型组显著降低(P<0.01,P<0.05)。WB实验表明,与模型组相比,葛根芩连汤中剂量组与吡格列酮组FXR蛋白表达量显著增加(P<0.01,P<0.05)。qRT-PCR实验表明,与模型组相比,葛根芩连汤高、中、低剂量组FXR、SHP、FGFR4和TGR5 mRNA表达水平均显著升高(P<0.01),CYP7A1 mRNA表达水平均显著降低(P<0.01,P<0.05)。吡格列酮组内FXR、SHP、FGFR4和TGR5 mRNA表达水平显著升高(P<0.01,P<0.05),CYP7A1 mRNA表达水平显著降低(P<0.01)。结论葛根芩连汤能够减轻FFA诱导的HepG2细胞脂肪变性,其机制可能与FXR信号通路有关。

接头蛋白Gab1的结构及功能研究进展

Gab1蛋白属于接头蛋白Gab家族,该家族蛋白因能与生长因子受体结合蛋白2(Grb2)相结合而得名。作为接头蛋白,Gab1蛋白能被多种受体酪氨酸激酶或非受体酪氨酸激酶激活,接受胞外多种生长因子、细胞因子和一些T/B细胞抗原受体的刺激,介导PI3K/Akt和Ras/MAPK等多条信号转导途径,具有促进细胞生长、迁移、调节免疫等多种生物学功能,与糖尿病、肿瘤、心血管疾病等的发生发展密切相关。

基于“土壅木郁”理论探讨益糖康调控FXR对T2DM大鼠肝糖原合成的影响

目的:基于“土壅木郁”理论观察益糖康对2型糖尿病(T2DM)大鼠FXR以及肝糖原合成的影响及作用机制。方法:96只Wistar大鼠,随机选取16只作为正常对照组,其余的80只采用高糖高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ),构建T2DM大鼠胰岛素抵抗(IR)模型。按照随机数表法将造模成功大鼠分为模型对照组,益糖康高、中、低剂量组以及鹅去氧胆酸(CDCA)组,分别进行不同干预措施,连续8周。在干预前和干预后第2、4、6、8周检测空腹血糖(FPG)值。对肝脏组织进行PAS染色,观察肝糖原合成情况,运用免疫荧光法检测FXR、GSK-3β的表达情况。应用Western Blot和RT-qPCR法检测FXR、IRS1、PI3K、AKT、GSK-3β、GS相关蛋白和基因表达情况。结果:80只Wistar大鼠的建模成功率为91.25%。干预第2、4、6、8周后,与模型对照组比较,益糖康高、中、低剂量组及CDCA组FBG均显著下降(P<0.05,P<0.01)。与模型对照组比较,CDCA组及益糖康高、中、低剂量组PAS染色颜色均有不同程度变浅,其中CDCA组和益糖康高剂量组改变更加显著(P<0.01)。与模型对照组比较,益糖康高、中剂量组及CDCA组FXR、IRS1、PI3K、AKT、GS蛋白和基因均显著升高(P<0.01,P<0.05),GSK-3β蛋白和基因显著降低(P<0.01);与益糖康低剂量组比较,益糖康高剂量组和CDCA组GSK-3β蛋白和基因水平显著下降(P<0.01),其余蛋白和基因均显著升高(P<0.01,P<0.05)。结论:“土壅木郁”为T2DM关键病机,益糖康能够降低T2DM大鼠血糖,促进肝糖原合成,其作用机制与上调FXR的表达以激活PI3K/AKT/GSK-3β信号通路密切相关。

Nature：诺华发现可以杀死癌细胞的“分子胶水”

磷酸酶是一类在许多细胞信号传导通路中发挥重要作用的蛋白质，但科学家们很难找到有效的小分子化合物去抑制它们的功能，并且研发相应药物。最近，诺华生物医学研究院（NIBR）的科研人员设计了一种非常新颖的方式来限制其中一个磷酸酶——SHP2。他们发现了几种化合物可以“沉默”，

丙泊酚联合贝那普利对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌损伤的保护作用及机制

目的探究丙泊酚联合贝那普利对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌损伤的保护作用及机制。方法将40只SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、心肌缺血再灌注损伤组(MIRI)、丙泊酚组(Propofol)、贝那普利组(Benazepril)和丙泊酚联合贝那普利组(Propofol+Benazepril),每组8只。HE染色观察大鼠心肌病理损伤;ELISA方法检测大鼠血清心肌损伤标志物cTnl和CK-MB水平;TUNEL方法检测大鼠心肌细胞凋亡水平;ROS荧光探针检测大鼠心肌ROS水平;Western blot检测大鼠心肌凋亡相关蛋白CytC、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平及FXR和SHP蛋白表达水平;qRT-PCR方法检测大鼠心肌FXR和SHP mRNA表达水平。结果丙泊酚联合贝那普利改善心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤,降低心肌损伤标志物水平,抑制心肌细胞凋亡并降低心肌细胞凋亡相关蛋白表达水平,降低心肌ROS水平并抑制心肌FXR和SHP mRNA和蛋白表达。结论丙泊酚联合贝那普利降低心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌ROS水平,抑制心肌细胞凋亡,改善心肌损伤,这可能与其抑制FXR/SHP信号通路有关。