TGF-β/Smad信号通路及Smad4、p15在结直肠癌中的研究进展

结直肠癌是消化系统常见肿瘤之一,其发病率和病死率较高。转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad(small mothers against decapentaplegic)信号通路可调控肿瘤细胞的增殖、分化、浸润、迁移,与结直肠癌的发生发展过程相关。研究表明,Smad4和p15是TGF-β/Smad信号通路的关键效应因子,与肿瘤的侵袭、进展及预后密切相关。本文对TGF-β/Smad信号通路及Smad4、p15在结直肠癌中的最新研究进展进行综述。

FGF19/FGFR4信号通路在肝细胞癌中的研究进展

成纤维细胞生长因子19(FGF19)是成纤维细胞生长因子家族中的一员,通过与成纤维细胞生长因子受体4(FGFR4)结合,不仅参与胆汁酸、葡萄糖、脂质和能量代谢的调节,还与肝细胞癌的发生、发展和转移密切关系。研究发现,FGF19/FGFR4信号通路通过多种途径促进肝细胞癌细胞生存、增殖、侵袭与转移,阐明FGF19/FGFR4信号通路在肝细胞癌进程中的作用机制可为其靶向治疗提供依据。

miR-491-5p靶向FGFR4调节GSK3β/β-catenin信号通路对小儿肝母细胞瘤增殖和迁移的影响

目的探讨miR-491-5p靶向FGFR4调节GSK3β/β-catenin信号通路对小儿肝母细胞瘤增殖和迁移的影响。方法qRT-PCR检测小儿肝母细胞瘤组织、瘤旁正常组织、正常肝细胞LO2和肝母细胞瘤细胞HuH-6中miR-491-5p和FGFR4 mRNA的表达,Western blot检测FGFR4蛋白表达;荧光素酶活性分析实验检测miR-491-5p与FGFR4的靶向关系;mimic NC,miR-491-5p mimic、pcDNA3.1质粒和pcDNA3.1-FGFR4质粒分别转染HuH-6细胞,qRT-PCR与Western blot检测FGFR4的表达;CCK-8实验检测HuH-6细胞增殖能力的变化,细胞迁移实验分析HuH-6细胞迁移能力的变化;Western blot实验检测HuH-6细胞中GSK3β/β-catenin信号通路相关蛋白p-GSK3β、p-β-catenin和p-C-myc蛋白的表达。结果小儿肝母细胞瘤组织和肝母细胞瘤细胞HuH-6中miR-491-5p表达量降低,FGFR4表达量升高;荧光素酶活性分析实验表明miR-491-5p靶向调控FGFR4;qRT-PCR和Western blot实验表明miR-491-5p抑制FGFR4表达;CCK-8和细胞迁移实验表明,miR-491-5p mimic抑制肝母细胞瘤细胞HuH-6的增殖和迁移,而pcDNA3.1-FGFR4可逆转miR-491-5p mimic对HuH-6细胞增殖和迁移的抑制作用;Western blot实验显示,miR-491-5p mimic可抑制p-GSK3β、p-β-catenin和p-C-myc蛋白的表达,pcDNA3.1-FGFR4可逆转miR-491-5p mimic对p-GSK3β、p-β-catenin和p-C-myc蛋白的抑制作用。结论miR-491-5p负向调节FGFR4,抑制肝母细胞瘤细胞的增殖和迁移,可能与GSK3β/β-catenin信号通路失活相关。

经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸对膝骨性关节炎患者TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路及TGF-β_1水平的影响

目的:探讨经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸对膝骨性关节炎(KOA)患者TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路及转化生长因子β_1(TGF-β)1水平的影响。方法:将KOA患者98例(98膝)随机分为2组各49例,对照组给予嘎日迪-15味丸治疗,实验组在对照组基础上给予经筋微创松解疗法,疗程均为2个月;观察2组治疗效果,比较2组治疗前后膝关节WOMAC评分、关节液中前列腺素E_2(PGE)2、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、TGF-β_1水平、关节软骨中Toll样受体4 (TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、核因子κB (NF-κB)蛋白表达。结果:总有效率实验组为89.90%,对照组为71.43%,2组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。治疗后2组功能、关节疼痛、僵硬等评分均较治疗前降低(P <0.05),且实验组各项评分均低于对照组(P <0.05)。治疗后2组关节积液TGF-β_1、PGE_2、MMP-9水平均较治疗前降低(P <0.05),且实验组各项指标水平均低于对照组(P <0.05)。治疗后2组关节软骨MyD88、TLR4、NF-κB蛋白表达水平较治疗前降低,且实验组各项指标水平均低于对照组(P <0.05)。结论:经筋微创松解疗法联合嘎日迪-15味丸治疗KOA疗效显著,其作用机制可能与降低MyD88、TLR4、NF-κB蛋白表达及TGF-β_1、PGE_2、MMP-9水平有关。

miR-491-5p靶向FGFR4调节肝母细胞瘤细胞增殖和迁移

目的探讨miR-491-5p靶向调节FGFR4对肝母细胞瘤增殖和迁移的影响及可能的作用机制。方法采用qRT-PCR检测15例小儿肝母细胞瘤组织及其癌旁正常组织,正常肝细胞LO2和肝母细胞瘤细胞HuH-6中miR-491-5p和FGFR4mRNA的表达;Western blot检测FGFR4蛋白表达;TargetScan数据库预测miR-491-5p靶点;双荧光素酶报告基因实验检测miR-491-5p与FGFR4的靶向关系。将mimic NC、miR-491-5p mimic、pcDNA3.1和pcDNA3.1-FGFR4质粒分别转染至HuH-6细胞后,采用q RT-PCR与Western blot检测FGFR4的表达,CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移能力,Western blot检测GSK3β/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果小儿肝母细胞瘤组织和HuH-6细胞中miR-491-5p表达水平均低于癌旁正常组织及肝细胞LO2(P<0.05),而FGFR4表达水平高于癌旁正常组织及肝细胞LO2(P<0.05);TargetScan数据库预测显示miR-491-5p与FGFR4存在结合位点。与mimic NC组比较,过表达miR-491-5p可抑制FGFR4表达、HuH-6细胞增殖和迁移能力及p-GSK3β/GSK3β、p-β-catenin/β-catenin及p-C-myc/C-myc比值(均P<0.05)。与mimic+Pc组比较,过表达FGFR4可逆转过表达miR-491-5p对HuH-6细胞增殖、迁移及p-GSK3β/GSK3β、p-β-catenin/β-catenin和p-C-myc/C-myc比值的抑制作用(均P<0.05)。结论 miR-491-5p通过负向调控FGFR4抑制肝母细胞瘤细胞增殖和迁移,可能与GSK3β/β-catenin信号通路失活有关。

大柴胡汤加减对胆囊胆固醇结石湿热证小鼠FXR/FGF15/FGFR4信号通路的影响

目的:基于法尼酯衍生物X受体(FXR)/成纤维细胞生长因子15(FGF15)/成纤维细胞生长因子受体4(FGFR4)通路观察大柴胡汤加减对胆囊胆固醇结石(CS)湿热证模型小鼠的影响,以从方证对应的角度,探讨CS湿热证的分子生物学机制。方法:将48只6周龄小鼠随机分为空白组、模型组、大柴胡汤加减组(23.4 g·kg^(-1))和熊去氧胆酸组(0.12 g·kg^(-1)),每组12只;空白组作为对照,其他3组采用“内湿+外湿+高胆固醇致石饲料”的模式造模12周建立CS湿热证小鼠模型,大柴胡汤加减组和熊去氧胆酸组给予相应的药物灌胃,模型组和空白组给予等量的生理盐水灌胃,共干预4周。造模前后每组小鼠均要进行旷场行为学实验判断其活动度和精神状态,每周观察记录各组小鼠体质量、饮食量、皮毛、二便等一般情况变化以评判其湿热证候表现;干预结束后,取各组小鼠肝脏、胆囊组织进行苏木素-伊红(HE)染色,对血清中γ-谷氨酰基转移酶(GGT),碱性磷酸酶(ALP),总胆红素(TBIL)指标进行生化检测;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测胆汁中总胆固醇(TC),总胆汁酸(TBA)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠回肠FXR,FGF15,以及肝脏FGFR4,胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)mRNA与蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠胆囊增大,胆汁呈褐色浑浊状态,肉眼可见絮状沉淀;湿热证候表现明显;肝脏组织有明显的脂肪样变性,胆囊壁毛糙、增厚;血清肝功能指标ALP,GGT,TBIL水平均显著升高(P<0.01);胆汁内TC含量显著增多(P<0.01),TBA含量显著减少(P<0.01);回肠组织的FXR mRNA与蛋白表达均显著升高(P<0.01),FGF15 mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.05,P<0.01),肝脏FGFR4 mRNA和蛋白表达量均明显增多(P<0.05),CYP7A1 mRNA表达显著降低(P<0.01),蛋白表达量呈降低趋势但差异无统计学意义。与模型组比较,两用药组小鼠胆汁浑浊程度明显降低、其中大柴胡汤加减组小鼠胆汁更为澄澈;干预后大柴胡汤加减组小鼠湿热证候表现明显减轻;两用药组小鼠肝脏、胆囊病变程度均明显降低;两用药组小鼠血清肝功能指标ALP,GGT,TBIL含量均显著降低(P<0.01),其中就ALP,TBIL两指标的降低程度来看大柴胡汤加减组更为显著(P<0.01);两用药组小鼠胆汁内TC含量均显著减少,TBA含量均显著增多(P<0.01),大柴胡汤加减组变化趋势较熊去氧胆酸组更为显著(P<0.01);大柴胡汤加减组小鼠FXR mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),FGF15和FGFR4 mRNA表达明显降低(P<0.05),蛋白表达水平也有降低趋势,CYP7A1 mRNA表达明显增多(P<0.05),蛋白表达有所升高;熊去氧胆酸组小鼠FXR,FGF15,FGFR4 mRNA与蛋白表达均有降低趋势,其中FXR mRNA表达明显降低(P<0.05),CYP7A1 mRNA与蛋白表达均有所增加。结论:大柴胡汤加减可明显改善CS湿热证模型小鼠的结石情况、肝功能、胆汁成分、胆固醇-胆汁酸代谢异常及湿热证候表现,其机制可能与调控胆固醇-胆汁酸代谢通路的关键因子FXR,FGF15,FGFR4,CYP7A1 mRNA和蛋白表达水平有关。

人DLL1真核表达质粒的构建及过表达DLL1抑制人口腔鳞癌细胞SCC15的增殖

目的:构建人全长DLL1基因真核表达质粒及过表达DLL1对人口腔鳞癌细胞增殖的影响.方法:PCR扩增人全长DLL1基因,酶切和测序鉴定后克隆至真核表达载体pCMV-Tag4并构建真核重组质粒DLL1/pC MVTag4,瞬时转染HEK293T细胞并通过实时荧光定量PCR(Q-PCR)和Western blot鉴定DLL1的表达;进一步检测DLL1在SCC15等3株人口腔鳞癌细胞中的表达;DLL1/pCMV-Tag4瞬时转染SCC15细胞,Q-PCR和Western blot检测过表达及MTT检测DLL1过表达对细胞SCC15增殖的影响.结果:真核重组质粒DLL1/pCMV-Tag4在HEK293T细胞中成功表达;DLL1在口腔鳞癌细胞中的表达高于正常口腔细胞;DLL1/pCMV-Tag4在SCC15细胞中获得表达且过表达DLL1抑制SCC15细胞的增殖.结论:人全长DLL1分子在HEK293T及SCC15细胞中获得表达,过表达DLL1抑制口腔鳞癌细胞SCC15的增殖.

滋肾丸方调控胆汁酸代谢改善糖尿病脑病作用机制研究

目的考察滋肾丸方对糖尿病脑病小鼠胆汁酸代谢的影响, 探讨其改善糖尿病脑病的作用机制。方法选用雄性C57BL/6J小鼠, 采用高脂饲料喂养联合单次腹腔注射链脲佐菌素(120 mg/kg)复制T2DM小鼠模型, 在高血糖持续刺激8周后采用Morris水迷宫实验筛选糖尿病脑病模型小鼠, 并将造模成功小鼠按随机数字表法分为模型组和滋肾丸方组, 每组12只, 另设12只为对照组。滋肾丸方组小鼠灌胃滋肾丸方粗提取物9.36 g/kg, 对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水, 1次/d, 持续8周。采用Morris水迷宫实验检测小鼠认知功能, 采用甲酚紫染色检测海马区颗粒神经元数量, 采用液质联用技术检测血清及粪便胆汁酸含量, 采用荧光定量PCR实验检测肝脏胆汁酸合成酶胆固醇7α-羟化酶(CYP7a1)、甾醇-27-羟化酶(CYP27a1)、法尼醇X受体(FXR)、成纤维生长因子15(FGF15)、成纤维生长因子受体4(FGFR4), 回肠顶端钠依赖性胆汁酸转运蛋白(ABST)mRNA水平。结果与模型组比较, 滋肾丸方组小鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05或P<0.01), 首次到达平台时间减少(P<0.01), 穿越平台次数增加(P<0.01), 海马区神经细胞损伤减轻;滋肾丸方组小鼠血清及粪便总胆汁酸含量降低(P<0.05或P<0.01);肝脏中CYP7a1、CYP27a1 mRNA水平增加(P<0.01), FXR、FGF15 mRNA水平降低(P<0.01);回肠ABST mRNA水平降低(P<0.01)。结论滋肾丸方可能调控胆汁酸代谢, 抑制FRX-FGF15/FGFR4信号和ABST表达从而促进新胆汁酸合成和结合型胆汁酸重吸收, 进而发挥改善糖尿病脑病小鼠认知功能的作用。

成纤维细胞生长因子受体4的研究

成纤维细胞生长因子受体4(fibroblast growth factor receptor4,FGFR4)是成纤维细胞生长因子受体家族中较晚被发现的一类跨膜酪氨酸激酶受体,通过与成纤维细胞生长因子结合,启动PLC、Ras等多条信号转导途径将胞外信号传递到细胞内,主要参与胚胎发育、血管生成、创伤愈合、组织分化和修复等重要生理进程,对乳腺癌、肝癌等癌症的发生发展起着重要作用,并成为癌症前期极好的预测因子及治疗学中的有效靶点。本文主要概述了FGFR4的信号转导过程及病理学研究进展。