SPH3127调节炎症和FXYD1对高血压血管内皮损伤的保护机制

目的 探讨SPH3127的降压效果和保护血管内皮的机制。方法 雄性SD大鼠80只分为假手术组、模型组、SPH3127高剂量组(20 mg/kg)、SPH3127低剂量组(10 mg/kg)。测量收缩压(SBP),检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、炎症损伤情况。人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为对照组,AngⅡ(1μmol/mL)组,SPH3127(10 nmol/mL)组,检测增殖迁移能力,e NOS和FXYD1的mRNA表达水平。结果 SPH3127干预组血压降低,血管内膜完整性升高,IL-6、TNF-α表达降低、eNOS升高,高剂量组较明显(P <0.05);HUVECs的增殖迁移能力上升,FXYD1、eNOS mRNA表达水平升高(P <0.05)。结论 SPH3127降低大鼠血压;通过抑制炎症,促进FXYD1表达,对血管内皮起到一定的保护作用。

含FXYD域离子运输调控因子3对人胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨含FXYD域离子运输调控因子3(FXYD3)对人胰腺癌细胞增殖和迁移的影响。方法使用免疫组化法、组织病理学和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测21例正常胰腺组织、18例慢性胰腺炎组织和50例胰腺癌组织中FXYD3的表达。分析不同病理特征的胰腺癌中FXYD3的表达水平差异。采用CCK-8法和单克隆实验法检测FXYD3过表达对胰腺癌细胞增殖的影响;采用Transwell法检测FXYD3过表达对胰腺癌细胞侵袭的影响。结果FXYD3阳性细胞在正常胰腺组织、慢性胰腺炎组织和胰腺癌组织样本中的比率分别为0、22.2%和26.0%,FXYD3阳性细胞在慢性胰腺炎组织和胰腺癌组织中的比率较正常胰腺组织中升高,差异有统计学意义(P=0.007、0.037)。FXYD3阳性表达与分期、病理分级、淋巴结转移情况以及肿瘤部位无相关性(P>0.05)。CCK-8法结果显示,FXYD3转染的细胞从第3天开始显示出更强的增殖能力,差异有统计学意义(P<0.01)。平板克隆实验显示,FXYD3过表达的T3M4细胞克隆数目更多,差异有统计学意义(P<0.01)。Transwell法结果显示,FXYD3过表达的T3M4细胞迁移数目较对照组上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胰腺癌组织中FXYD3显著上调,这主要是由于癌细胞自身表达水平的增高,表明FXYD3促进胰腺癌细胞的增殖。

泛癌中FXYD3预后和免疫浸润分析

FXYD3作为一种跨膜蛋白,具有离子通道或离子通道调节的作用。目前已有相关研究提示FXYD3与某些肿瘤关系密切。在这项研究中,我们旨在探索FXYD3在泛癌中的作用,从加州大学圣克鲁兹西纳分校(UCSC)和癌症基因组图谱(TCGA)下载数据,分别对TCGA_GTEx、TCGA和TCGA配对样本中FXYD3的表达进行研究。随后,我们对TCGA数据库中肿瘤进行Kaplan-Meier分析,并对FXYD3影响预后的肿瘤进行临床相关性分析和单因素Cox回归分析。我们构建并评估膀胱尿路上皮癌(BLCA)、头颈鳞状细胞癌(HNSC)和肾透明细胞癌(KIRC)的列线图模型,以证明FXYD3在肿瘤中预测患者预后的价值。此外,我们证实FXYD3与免疫细胞浸润也有关系。通过功能富集分析,我们探索FXYD3相关基因参与的生物学功能及潜在信号通路。我们的研究发现FXYD3在多种肿瘤中存在差异表达,并与多种肿瘤的临床结局及免疫微环境相关,可能通过P53信号通路及免疫相关通路影响肿瘤的发生发展。总之,我们认为FXYD3可以作为潜在的预后生物标志物和有效的癌症免疫治疗靶点。

基于数据库挖掘分析肝细胞癌中含离子转运调控因子1的FXYD结构域的表达及临床意义

目的探讨含离子转运调控因子1的FXYD结构域(FXYD1)在肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义。方法应用GEPIA、TIMER和UALCAN数据库分析FXYD1在HCC中的表达水平,应用Kaplan-Meier Plotter数据库分析FXYD1 mRNA表达水平与HCC患者预后的关系,通过cBioPortal数据库分析FXYD1在HCC患者中的突变情况及与患者预后的关系,应用String数据库构建FXYD1的蛋白质相互作用网络,应用Metascape数据库进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果FXYD1在大多数肿瘤(包括HCC)中低表达。FXYD1 mRNA高表达组HCC患者的中位总生存期(OS)和中位无病生存期(DFS)均长于FXYD1 mRNA低表达组患者。约6%的HCC患者发生FXYD1基因突变,FXYD1突变组患者的中位OS和中位DFS均短于FXYD1未突变组患者。应用String数据库共获得了10个与FXYD1相互作用的蛋白质,这些蛋白质主要富集在细胞钾离子稳态、钠钾交换ATP酶复合物、激酶结合和环磷酸腺苷(cAMP)信号通路等。FXYD1的表达水平与多种免疫细胞(B细胞、中性粒细胞和树突状细胞)的浸润呈负相关。结论FXYD1在HCC中低表达,且与HCC患者的预后有关,有望成为HCC诊断和治疗的生物标志物。

青海湖裸鲤FXYD基因家族鉴定、分子进化及表达

青海湖裸鲤是唯一一种适应青海湖高盐碱水环境的鲤科鱼类。苯丙氨酸-X-酪氨酸-天冬氨酸(FXYD)家族是一类小分子单跨膜蛋白,具有调节离子通道作用,在多种生物的盐度胁迫和盐度适应中发挥重要作用。笔者基于青海湖裸鲤全基因组数据,利用生物信息学方法,鉴定到16个青海湖裸鲤FXYD(gpFXYD)基因,通过多重序列比对和系统进化分析,16个gpFXYD基因成员分属于5个亚型。共线性分析表明,青海湖裸鲤FXYD基因家族中12个成员起源于全基因组复制,且与斑马鱼FXYD基因存在共线性,推测全基因组复制导致了青海湖裸鲤FXYD基因的加倍。分子进化分析显示,gpFXYD1b/1c和gpFXYD5c/5d基因的进化选择压力(Ka/Ks)>1,表明其在进化过程中受到了正选择,可能发生了适应性进化。不同亚家族在青海湖裸鲤多种组织表达中,gpFXYD1s基因在青海湖裸鲤的心脏和脑组织特异性表达,而gpFXYD7s基因在青海湖裸鲤的脑组织中特异表达,分析gpFXYD基因不同亚型可能在不同组织中发挥功能。组织表达中,gpFXYD5s、gpFXYD6s、gpFXYD11s基因在青海湖裸鲤肾脏和鳃组织中出现显著表达变化,表明gpFXYD5s、gpFXYD6s以及gpFXYD11s可能与青海湖裸鲤在高盐度条件下的离子运输和渗透压调节密切相关。试验结果可为解析青海湖裸鲤盐度适应奠定基础,同时也可为水产动物耐盐分子育种提供参考和借鉴。

hFXYD6反义核酸对胆管癌细胞体外增殖和侵袭能力的影响

目的:研究hFXYD6基因反义核酸对人胆管癌QBC939细胞体外增殖和侵袭能力的影响.方法:构建hFXYD6基因反义核酸真核表达载体pcDNA3.1(-)/hFXYD6(-)并转染人胆管癌QBC939细胞,同时设pcDNA3.1(-)空载体对照组和空白对照组.SYBR GreenⅠ荧光定量RT- PCR和免疫组化分别检测hFXYD6 mRNA及蛋白表达;MTT、平板克隆形成实验检测细胞体外增殖活性:流式细胞仪检测细胞周期;Transwell侵袭小室模型检测细胞体外侵袭能力.结果:与空白组和空载组比较,反义组细胞hFXYD6 mRNA及蛋白表达量降低;细胞群体倍增时间增加(46.8 h vs 34.5 h,35.3 h),细胞克隆形成率降低(24.3%±5.3% vs 61.0%±8.5%,58.0%±5.6%,P<0.001);细胞周期中G1期细胞比例明显升高(66.4%±2.9% vs 33.5%±2.3%,39.4%±3.7%,P<0.001),S期比例明显减少(18.6%±1.6% vs 36.2%±2.1%,34.1%±1.6%,P<0.001);Transwell侵袭小室中24 h穿膜细胞数无显著改变.空白组和空载组细胞间均无明显差异.结论:hFXYD6反义核酸抑制人胆管癌QBC939细胞体外增殖能力,但对其侵袭能力无明显作用.

自发性高血压大鼠FXYD5基因的实验研究

目的探讨自发性高血压大鼠新的高血压相关基因。方法从自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertensive Rats,SHR)和正常血压大鼠(Wistar-Kyoto,WKY)阻力血管(肠系膜动脉第二、三级分支)和肾脏组织中提取总RNA,利用含10000个大鼠基因的芯片检测两组大鼠mRNA表达水平,找出差异表达的基因,并经RT-PCR和定量RT-PCR初步筛选出高血压新的相关基因。结果从基因芯片的检测结果发现在SHR组中19个基因表达下调,另外19个基因表达上调,其中涉及细胞周期,直接参与代谢的酶,细胞信号转导及核转录因子等基因。选择部分已知的、并可能有功能的代表基因用RT-PCR验证,结果发现FXYD5基因在SHR明显下调,定量RT-PCR验证示FXYD5基因的表达水平在SHR组比WKY组明显下调14.8倍(P<0.01)。结论从基因芯片的结果证明了SHR和WKY不同的遗传异质性。FXYD家族的FXYD5可能与高血压的形成有关,深入研究FXYD5基因及其功能为进一步了解高血压病的分子机制提供新的思路和线索。

半定量检测胆管癌组织中人fxyd6基因的表达

目的研究人fxyd6基因在正常胆管与胆管癌组织中的表达,检测该基因在胆管癌组织切片中的亚细胞表达定位。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测人fxyd6基因在正常胆管和胆管癌新鲜组织中的表达;采用原位RT-PCR(IS-RT-PCR)方法原位检测该基因在胆管癌石蜡组织切片中的亚细胞表达定位,并应用多媒体图像分析软件进行半定量分析。结果人fxyd6基因在正常胆管和胆管癌组织中存在差异性表达;原位RT-PCR检测表明人fxyd6基因定位于胆管癌上皮细胞胞浆内,在肿瘤细胞中的表达明显高于在正常胆管细胞中的表达(P<0.05)。结论人fxyd6基因在胆管癌的转化、演进过程中可能起重要作用。

FXYD6 shRNA表达载体的构建及其在体外对胰腺癌细胞增殖的影响

目的:构建FXYD6短发夹RNA(shRNA)表达载体,体外评价其对胰腺癌细胞sw1990的增殖与FXYD6蛋白表达的抑制效果。方法:基于microRNA mir-30天然结构,设计表达4对FXYD6shRNA的互补DNA序列,克隆入pCGM30质粒载体,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,PCR法筛选阳性克隆,经酶切和基因测序鉴定;利用LipofectAMINE2000将pCGM30-FXYD6shRNA转染至胰腺癌细胞sw1990,MTT法检测转染后胰腺癌细胞增殖的变化,Western blot检测胰腺癌细胞中FXYD6蛋白表达水平的变化。结果:设计合成了4对表达FXYD6shRNA的互补DNA序列,构建了4个表达FXYD6shRNA的重组质粒;基因测序证实shRNA编码序列与设计的片段完全一致,酶切鉴定证实载体构建成功;体外实验表明,转染胰腺癌细胞sw1990的增殖能力和FXYD6蛋白表达水平明显降低(P<0.05),FXYD6蛋白表达水平随时间延长逐渐降低(P<0.01),但细胞增殖能力无明显变化(P>0.05)。结论:构建了4个表达FXYD6shRNA的重组质粒载体,可有效抑制FXYD6的表达;抑制胰腺癌细胞sw1990中FXYD6的表达可以抑制细胞的增殖,提示FXYD6可能是一个具有潜在临床应用价值的基因治疗靶点。

FXYD5在高血压病动脉粥样硬化中调控机制的研究进展

FXYD基因蛋白是指一类有离子通道或离子通道调节作用的小分子单跨膜蛋白,和钠钾泵(也称Na+-K+-ATP酶,钠钾转运体)的结构功能密切相关[1]。高血压病(primary hypertension,PH)是以动脉血压持续升高为主要表现,影响全球近1/3人口的健康,由多种因素导致,具有高度遗传异质性的复杂疾病[2],是脑卒中、冠心病、慢性肾脏疾病。

FXYD6过表达对肝细胞癌SMMC7721细胞5-Fu化疗敏感性的影响

目的观察FXYD离子转运调节因子6(FXYD6)过表达对肝细胞癌SMMC7721细胞5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗敏感性的影响。方法将肝细胞癌SMMC7721细胞分为过表达组和对照组,分别转染pcDNA3.1/FXYD6和pcD-NA3.1/Vector真核质粒,培养48 h筛选SMMC7721抗性克隆。取两组转染后的抗性克隆细胞,分别加入终浓度为0、12.5、25、50、100μg/mL的5-Fu作用24、36、48 h,采用MTT法检测细胞增殖抑制率。取两组转染后的细胞,加入终浓度为25μg/L的5-Fu作用48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果随着5-Fu浓度增加和作用时间延长,两组细胞增殖抑制率均呈升高趋势。5-Fu浓度为12.5μg/mL时,两组作用24、36、48 h的细胞增殖抑制率比较均无明显差异(P均>0.05);5-Fu浓度为25、50、100μg/mL时,过表达组作用24、36、48 h的细胞增殖抑制率均明显低于对照组同时间点(P均<0.01)。观察组细胞凋亡率为35.62%±3.98%,对照组为46.19%±6.60%,两组比较P<0.01。结论 FXYD6蛋白过表达可降低肝细胞癌SMMC7721细胞对5-Fu的化疗敏感性。

FXYD6蛋白在鼻咽癌组织中的表达

目的探讨FXYD6蛋白表达与鼻咽癌(NPC)患者临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学技术检测128例鼻咽癌组织中FXYD6蛋白的表达情况。结果 FXYD6蛋白在鼻咽癌组织中的表达率为84.3%(108/128),其蛋白在正常组中的阳性表达率为5.0%(4/80),两者差异有统计学意义(P<0.01)。FXYD6蛋白在有颈部淋巴结转移组中的表达率为94.2%(65/69),高于无颈部淋巴结转移组72.8%(43/59),两组比较差异有统计学意义(P<0.0 1)。FXYD 6蛋白的表达与NPC的病理组织学分型,临床分期无明显关系(P>0.05)。结论 FXYD6蛋白高表达与NPC颈部淋巴结转移相关,提示FXYD6表达的上调可作为NPC患者预测淋巴结转移的参考指标。

FXYD蛋白与Na,K-ATP酶

Na,K-ATP酶最初被描述为一种能量转换的离子泵。近期研究显示Na,K-ATP酶有更多的生物学功能,特别是它参与一些信号转导通路,导致了一些生长相关基因表达的改变,最终影响细胞生长。FXYD蛋白家族成员是小分子膜蛋白,因其都有FXYD氨基酸序列而得名,7个家族成员具有与Na,K-ATP酶相关的组织或同功酶特异性,可调节其运输特性。

RT-PCR法检测人fxyd6基因在胆道良恶性肿瘤中的表达

目的观察研究人fxyd6基因在正常胆道、先天性胆管囊肿及胆管癌中的差异性表达。方法设计两对特异性引物,采用RT-PCR方法检测该基因在正常胆管、胆管囊肿及胆管癌新鲜组织中的表达;应用多媒体图象分析软件进行半量分析并比较它们之间的差异性表达。结果fxyd6基因在正常胆管、胆管囊肿、胆管癌中均存在表达;图象半定量平均IOD值分析结果显示fxyd6基因的表达量在正常胆管与高分化胆管癌之间存在明显差异(P<0.05),胆管囊肿与高分胆管癌之间存在明显差异(P<0.05),后者表达量增加;fxyd6基因的表达量与胆管癌分化程度差异不显著(P>0.05)。结论人fxyd6基因在胆管癌肿瘤细胞的演进转化过程中可能起重要作用。

FXYD3在宫颈鳞癌患者组织中的表达及与临床病理参数的关系

目的检测FXYD3在宫颈鳞癌患者组织中的表达,并分析其与患者临床病理参数的关系。方法分别通过GEPIA数据库及癌症基因组图谱(TCGA)门户网站UALCAN分析FXYD3在正常宫颈组织及宫颈鳞癌组织样本中的表达情况,使用cBioPortal在线软件预测分析FXYD3共表达基因,并通过ImageGP在线软件进行信号通路富集分析;STRING网站进行FXYD3蛋白互作共表达分析。收集2015年9月至2018年1月郑州市妇幼保健院就诊的65例宫颈鳞癌组织标本及50例因子宫肌瘤手术切除的正常宫颈组织标本,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组FXYD3 mRNA的表达水平;免疫组化染色法检测FXYD3蛋白的表达水平,并分析其与宫颈鳞癌患者临床病理参数及预后的关系。结果数据库、qRT-PCR及免疫组化分析结果显示,宫颈鳞癌组织中FXYD3的表达水平[8.921(8.287,9.400)、10.244(9.569,10.749)、1.68±0.32、63.08%]均显著高于正常宫颈组织[0.995(0.346,5.837)、3.269(2.720,7.820)、1.00、28.00%],差异有统计学意义(Z分别为0.205、-6.107,t=15.011,χ^(2)=13.935;P均<0.05);FXYD3的表达与宫颈鳞癌组织类型、临床分期及淋巴结转移有关(χ^(2)分别为7.934,8.737,11.274,P均<0.05),FXYD3蛋白阳性表达患者的平均生存时间(OS)显著低于阴性表达患者(38.12个月vs 53.56个月,χ^(2)=5.485,P=0.019)。通过STRING网站在线绘制FXYD3蛋白互作网络图,并根据相关性评分分析证实相关性较强的前5个蛋白质分别为ATP1B1、ATP1B2、ATP1B3、ATP1A1、ATP1A2。通过cBioPortal数据库预测与FXYD3共表达基因417个;Enrichr网站通路富集分析结果显示,FXYD3共表达基因富集到的主要通路包括T细胞受体、B细胞受体、白细胞介素-17、趋化因子信号通路,氧化应激信号通路,非小细胞肺癌、膀胱癌等癌症信号通路,蛋白质水解、核黄素代谢、核酸合成代谢等信号通路。结论宫颈鳞癌组织中FXYD3的表达升高,且与患者组织类型、临床分期、淋巴结转移及预后有关,对宫颈鳞癌发生和预后有一定的监测价值。

FXYD3的研究进展

FXYD家族是新近发现的一类小分子单跨膜蛋白,具有离子通道或离子通道调节作用,并与Na,K-ATPase的结构功能密切相关。FXYD3是这个家族成员之一,目前对它的研究主要集中在人体正常组织及部分肿瘤中的表达水平上。FXYD3基因与蛋白的生物学特性、生理功能及调节的研究,对于阐述其在肿瘤中的作用机制具有十分重要的意义。

FXYD3蛋白在胃腺癌中的表达及意义

目的探讨FXYD3(Mat-8)蛋白在胃腺癌中的表达及其临床病理意义。方法采用免疫组织化学的方法检测29例正常胃黏膜和51例胃腺癌组织中FXYD3蛋白的表达。结果FXYD3蛋白在胃腺癌中的阳性表达率为66.67%(34/51),明显高于正常胃黏膜组织中的27.59%(8/29),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。FXYD3蛋白的表达与患者性别、年龄及肿瘤大小、大体形态、组织学分级和淋巴结转移情况均无相关性(P>0.05)。结论FXYD3蛋白在胃腺癌中的表达上调,可能只是胃腺癌发生阶段的一个早期事件,与肿瘤的浸润转移可能关系不大。

大鼠FXYD5基因的克隆及重组腺病毒载体的构建

目的:克隆大鼠离子通道相关蛋白(FXYD5)基因全长cDNA,构建携带FXYD5基因的重组腺病毒载体,为进一步研究其在自发性高血压大鼠(SHR)中的功能作准备。方法:采用cDNA末端快速扩增的方法获得全长cDNA,并插入到载体pGEM-T Easy中测序分析。将FXYD5基因cDNA克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中,随后在BJ5183细菌中与骨架载体AdEasy-1同源重组。筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确后,重组载体磷酸钙-DNA共沉淀法转染AD293细胞,获得携带FXYD5基因的重组腺病毒。结果:大鼠FXYD5基因全长cDNA被成功地克隆;FXYD5重组腺病毒载体被成功地构建。结论:运用细菌内同源重组的方法可以在大肠杆菌中快速高效地构建腺病毒载体;FXYD5重组腺病毒载体的成功构建为探讨FXYD5的生物学功能奠定了基础。

胆管癌相关FXYD6基因功能区在大肠埃希菌表达的初步研究

目的对胆管癌相关基因FXYD6基因的功能区进行克隆和表达,以便进一步展开该基因功能研究。方法借助生物信息学方法分析FXYD6基因,设计FXYD6基因信号肽剪切后功能区蛋白体外表达序列,并将其克隆到pBV220表达载体上,继而以大肠埃希菌为表达系统,使功能区蛋白(不含信号肽)获得体外表达。结果该基因主要功能位点位于18～95 aa。PCR扩增出剪切掉信号肽序列的功能区序列(即包含18～95 aa的肽链段),并成功构建pBV220/FXYD6-ex基因功能区重组表达质粒克隆,其在大肠埃希菌DH5α中表达量最高,表达产物主要以包涵体形式存在。结论获得胆管癌相关FXYD6基因融合蛋白表达产物,为后续研究打下基础。