基于数据库挖掘分析肝细胞癌中含离子转运调控因子1的FXYD结构域的表达及临床意义

目的探讨含离子转运调控因子1的FXYD结构域(FXYD1)在肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义。方法应用GEPIA、TIMER和UALCAN数据库分析FXYD1在HCC中的表达水平,应用Kaplan-Meier Plotter数据库分析FXYD1 mRNA表达水平与HCC患者预后的关系,通过cBioPortal数据库分析FXYD1在HCC患者中的突变情况及与患者预后的关系,应用String数据库构建FXYD1的蛋白质相互作用网络,应用Metascape数据库进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果FXYD1在大多数肿瘤(包括HCC)中低表达。FXYD1 mRNA高表达组HCC患者的中位总生存期(OS)和中位无病生存期(DFS)均长于FXYD1 mRNA低表达组患者。约6%的HCC患者发生FXYD1基因突变,FXYD1突变组患者的中位OS和中位DFS均短于FXYD1未突变组患者。应用String数据库共获得了10个与FXYD1相互作用的蛋白质,这些蛋白质主要富集在细胞钾离子稳态、钠钾交换ATP酶复合物、激酶结合和环磷酸腺苷(cAMP)信号通路等。FXYD1的表达水平与多种免疫细胞(B细胞、中性粒细胞和树突状细胞)的浸润呈负相关。结论FXYD1在HCC中低表达,且与HCC患者的预后有关,有望成为HCC诊断和治疗的生物标志物。

FXYD6 shRNA表达载体的构建及其在体外对胰腺癌细胞增殖的影响

目的:构建FXYD6短发夹RNA(shRNA)表达载体,体外评价其对胰腺癌细胞sw1990的增殖与FXYD6蛋白表达的抑制效果。方法:基于microRNA mir-30天然结构,设计表达4对FXYD6shRNA的互补DNA序列,克隆入pCGM30质粒载体,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,PCR法筛选阳性克隆,经酶切和基因测序鉴定;利用LipofectAMINE2000将pCGM30-FXYD6shRNA转染至胰腺癌细胞sw1990,MTT法检测转染后胰腺癌细胞增殖的变化,Western blot检测胰腺癌细胞中FXYD6蛋白表达水平的变化。结果:设计合成了4对表达FXYD6shRNA的互补DNA序列,构建了4个表达FXYD6shRNA的重组质粒;基因测序证实shRNA编码序列与设计的片段完全一致,酶切鉴定证实载体构建成功;体外实验表明,转染胰腺癌细胞sw1990的增殖能力和FXYD6蛋白表达水平明显降低(P<0.05),FXYD6蛋白表达水平随时间延长逐渐降低(P<0.01),但细胞增殖能力无明显变化(P>0.05)。结论:构建了4个表达FXYD6shRNA的重组质粒载体,可有效抑制FXYD6的表达;抑制胰腺癌细胞sw1990中FXYD6的表达可以抑制细胞的增殖,提示FXYD6可能是一个具有潜在临床应用价值的基因治疗靶点。