自发性高血压大鼠FXYD5基因的实验研究

目的探讨自发性高血压大鼠新的高血压相关基因。方法从自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertensive Rats,SHR)和正常血压大鼠(Wistar-Kyoto,WKY)阻力血管(肠系膜动脉第二、三级分支)和肾脏组织中提取总RNA,利用含10000个大鼠基因的芯片检测两组大鼠mRNA表达水平,找出差异表达的基因,并经RT-PCR和定量RT-PCR初步筛选出高血压新的相关基因。结果从基因芯片的检测结果发现在SHR组中19个基因表达下调,另外19个基因表达上调,其中涉及细胞周期,直接参与代谢的酶,细胞信号转导及核转录因子等基因。选择部分已知的、并可能有功能的代表基因用RT-PCR验证,结果发现FXYD5基因在SHR明显下调,定量RT-PCR验证示FXYD5基因的表达水平在SHR组比WKY组明显下调14.8倍(P<0.01)。结论从基因芯片的结果证明了SHR和WKY不同的遗传异质性。FXYD家族的FXYD5可能与高血压的形成有关,深入研究FXYD5基因及其功能为进一步了解高血压病的分子机制提供新的思路和线索。

RNA干扰血管平滑肌细胞高血压相关基因FXYD5表达及其功能研究

目的:通过RNA干扰(RNAi)技术特异性沉默大鼠胸主动脉平滑肌细胞(CRL-1444)高血压相关基因FXYD5的表达,探索该基因在高血压发病机制中的作用。方法:设计并合成4个针对大鼠FXYD5基因的特异性siRNA片段(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4),以含非特异性编码序列的siRNA-con为对照。将上述4个片段及阴性对照通过阳离子脂质体法转染进大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(CRL-1444)内,采用CCK-8法检测FXYD5基因特异性沉默后对平滑肌细胞增殖的影响,采用划痕法(Woundhealing法)检测FXYD5基因特异性沉默后对细胞迁移力的影响,采用超微量Na+-K+-ATPase测试盒检测FXYD5基因特异性沉默后对细胞膜Na+-K+-ATPase活性的影响。结果:荧光实时定量PCR结果显示siRNA-1使FXYD5的mRNA表达与空白对照组相比下降86.71%(P<0.01);siRNA-2使FXYD5的mRNA表达与空白对照组相比下降90.17%(P<0.01);siRNA-con对照组与空白对照组FXYD5的mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。CCK-8法检测结果显示siRNA-1、siRNA-2两组与对照组间细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。划痕法检测细胞迁移力结果显示siRNA-1和siRNA-2两组平滑肌细胞迁移力低于siRNA-con对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。Na+-K+-ATPas活性检测结果显示siRNA-1和siRNA-2两组平滑肌细胞Na+-K+-ATPas活性低于siRNA-con对照组(P<0.05)和空白对照组(P<0.01)。结论:RNAi技术能特异性沉默大鼠胸主动脉平滑肌细胞的FXYD5基因的表达水平;特异性沉默FXYD5基因表达后血管平滑肌细胞的增殖能力无明显变化,而细胞迁移力和细胞膜的Na+-K+-ATPase活性明显降低。

大鼠FXYD5基因的克隆及重组腺病毒载体的构建

目的:克隆大鼠离子通道相关蛋白(FXYD5)基因全长cDNA,构建携带FXYD5基因的重组腺病毒载体,为进一步研究其在自发性高血压大鼠(SHR)中的功能作准备。方法:采用cDNA末端快速扩增的方法获得全长cDNA,并插入到载体pGEM-T Easy中测序分析。将FXYD5基因cDNA克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中,随后在BJ5183细菌中与骨架载体AdEasy-1同源重组。筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确后,重组载体磷酸钙-DNA共沉淀法转染AD293细胞,获得携带FXYD5基因的重组腺病毒。结果:大鼠FXYD5基因全长cDNA被成功地克隆;FXYD5重组腺病毒载体被成功地构建。结论:运用细菌内同源重组的方法可以在大肠杆菌中快速高效地构建腺病毒载体;FXYD5重组腺病毒载体的成功构建为探讨FXYD5的生物学功能奠定了基础。

FXYD5(dysadherin)蛋白与肿瘤研究进展

癌症是导致死亡的首要原因之一,而浸润和转移是其引起死亡的主要途径[1]。对癌细胞浸润、转移机制的研究成为当今癌症防治最受关注的课题。离子转换调节器5（FXYD5）是一种存在于多种癌细胞及少量正常细胞表面的细胞膜糖蛋白,其过表达与肿瘤侵袭、转移及恶性预后密切相关。本文将对其结构分布、相关调控机制及在肿瘤中研究进展作一综述。

自发性高血压大鼠FXYD5基因表达的时空分布

目的:研究大鼠FXYD5(FXYD domain-containingion transport regulator5)基因表达在自发性高血压大鼠(SHR)及正常血压大鼠(Wistar-Kyoto,WKY)的时间与空间分布差异。方法:取4周、8周、13周及21周龄SHR的肾脏、肝脏、肠系膜二、三级动脉分支、大脑和心脏组织,以同周龄WKY作对照,采用Northern blotting方法分析FXYD5 mRNA表达丰度。结果:Northern blotting的结果显示:13周、21周龄SHR的肾脏组织FXYD5基因表达丰度较同周龄WKY低;在肺组织,除8周龄该基因的表达水平在SHR组略低于对照组外,其它周龄两组没有差别。结论:FXYD5基因在SHR中有着特异性的组织分布特点,并且在不同周龄的SHR,FXYD5基因在肾脏的表达水平不是恒定不变的,在时间上呈一钟形变化。提示FXYD5基因可能是一个高血压相关的基因,可能与高血压的发病有关。

Dysadherin蛋白的研究进展及其与胰腺癌的关系

Dysadherin是位于细胞膜的一种糖蛋白,能够促进癌症细胞的转移,属于FXYD(FXYD do-main containing ion transport regulator)家族成员。它主要表达于包括胰腺癌在内的各种不同类型的肿瘤细胞,仅在少数几种正常人体细胞表达。近年研究发现,dysadherin可能在胰腺癌细胞的入侵及转移发面发挥重要作用。本综述旨在阐述dysadherin蛋白的作用机制及其与胰腺癌的关系,并为胰腺癌的诊断及治疗提供新方向。