半定量检测胆管癌组织中人fxyd6基因的表达

目的研究人fxyd6基因在正常胆管与胆管癌组织中的表达,检测该基因在胆管癌组织切片中的亚细胞表达定位。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测人fxyd6基因在正常胆管和胆管癌新鲜组织中的表达;采用原位RT-PCR(IS-RT-PCR)方法原位检测该基因在胆管癌石蜡组织切片中的亚细胞表达定位,并应用多媒体图像分析软件进行半定量分析。结果人fxyd6基因在正常胆管和胆管癌组织中存在差异性表达;原位RT-PCR检测表明人fxyd6基因定位于胆管癌上皮细胞胞浆内,在肿瘤细胞中的表达明显高于在正常胆管细胞中的表达(P<0.05)。结论人fxyd6基因在胆管癌的转化、演进过程中可能起重要作用。

RT-PCR法检测人fxyd6基因在胆道良恶性肿瘤中的表达

目的观察研究人fxyd6基因在正常胆道、先天性胆管囊肿及胆管癌中的差异性表达。方法设计两对特异性引物,采用RT-PCR方法检测该基因在正常胆管、胆管囊肿及胆管癌新鲜组织中的表达;应用多媒体图象分析软件进行半量分析并比较它们之间的差异性表达。结果fxyd6基因在正常胆管、胆管囊肿、胆管癌中均存在表达;图象半定量平均IOD值分析结果显示fxyd6基因的表达量在正常胆管与高分化胆管癌之间存在明显差异(P<0.05),胆管囊肿与高分胆管癌之间存在明显差异(P<0.05),后者表达量增加;fxyd6基因的表达量与胆管癌分化程度差异不显著(P>0.05)。结论人fxyd6基因在胆管癌肿瘤细胞的演进转化过程中可能起重要作用。

胆管癌相关FXYD6基因功能区在大肠埃希菌表达的初步研究

目的对胆管癌相关基因FXYD6基因的功能区进行克隆和表达,以便进一步展开该基因功能研究。方法借助生物信息学方法分析FXYD6基因,设计FXYD6基因信号肽剪切后功能区蛋白体外表达序列,并将其克隆到pBV220表达载体上,继而以大肠埃希菌为表达系统,使功能区蛋白(不含信号肽)获得体外表达。结果该基因主要功能位点位于18～95 aa。PCR扩增出剪切掉信号肽序列的功能区序列(即包含18～95 aa的肽链段),并成功构建pBV220/FXYD6-ex基因功能区重组表达质粒克隆,其在大肠埃希菌DH5α中表达量最高,表达产物主要以包涵体形式存在。结论获得胆管癌相关FXYD6基因融合蛋白表达产物,为后续研究打下基础。

FXYD6基因遗传多态性在精神分裂症患者核心家系中的传递不平衡检验

目的探讨FXYD6基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNP）和精神分裂症（schizophrenia）之间的相关性。方法采用等位基因特异性PCR的方法对FXYD6基因6个SNPs（rs10790212、rs11544201、rs555577、rs1815774、rs4938446和rs497768）位点的基因型在101个三口之家中进行传递不平衡检验（transmission disequilibrium test，TDT）。结果遗传标记rs10790212和rs11544201显示了显著的传递不平衡（P〈0．05），而单倍型分析的结果表明单倍型rs10790212-rs11544201与精神分裂症显著性关联（P〈0．05）。结论FXYD6基因与中国汉族人群精神分裂症遗传易感性相关，有必要进一步开展对FXYD6基因的功能学研究。

胆管癌相关基因FXYD6的克隆及功能区定位

目的从人组织cDNA文库克隆胆管癌相关基因FXYD6并进行功能区定位分析。方法利用人胎肝、脑及脾cDNA文库,通过Goldkey软件进行引物设计,从组织cDNA文库获得FXYD6全长和转录编码区序列,对其进行克隆与纯化;对FXYD6基因重组克隆进行测序鉴定;并应用GenBank核酸数据库及Goldkey软件对其功能区进行定位分析。结果在胎肝和脑cDNA文库中,扩增出FXYD6特异条带,但在脾cDNA文库未见扩增产物。将PCR扩增产物与pGEM-T载体连接,进行转化后确认回收组、阳性对照组均可见单菌落生长。选取阳性克隆进行菌落收获和质粒提取,并行测序分析,该序列包含已测序FXYD6基因大片段和可能的编码区序列。通过序列分析,得到最可能编码区序列为+1相位编码区序列,进一步分析得到该基因产物作为膜蛋白的可能功能区分布。结论 FXYD6基因克隆、纯化及功能区定位的成功为进一步研究该基因的功能奠定了基础。