人FL在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化和生物学活性测定

建立人FL(humanflt3ligand ,hFL)在大肠杆菌中的高效表达系统 ,分离纯化重组hFL为其功能和应用研究打下基础。根据大肠杆菌偏爱密码子人工合成hFL基因膜外区DNA片段 ,由PCR方法获得的hFL基因膜外区DNA片段 ,经测序证明序列正确。构建表达载体pET30a Trx hFL并转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,hFL融合蛋白的表达占菌体总蛋白的 6 0 %以上 ,并以包涵体形式存在。融合蛋白经离子交换层析、分子筛层析纯化 ,并用FXa切割 ,切割效率 >80 %。切割产物经亲和层析纯化。纯化产物进行Westernblot鉴定。纯化的rhFL(recombinanthFL)与GM CSF及TNFα联合作用 ,具有良好的刺激DC增殖活性 ,其增殖能力是GM CSF +TNFα的 2 5倍左右。本文以大肠杆菌为宿主 ,成功地表达了融合蛋白Trx hFL。经纯化的rhFL在体外与GM CSF及TNFα联合使用能有效地刺激人DC的增殖。