FZD5在小鼠前列腺癌骨转移中的作用机制研究

目的:探讨FZD5基因在前列腺癌骨转移中的作用机制,寻找前列腺癌骨转移的新的治疗方法。方法:检测前列腺癌PC3细胞内FZD5基因表达水平。将siRNA转染入PC3细胞后使FZD5基因沉默,继而观察PC3细胞迁移、增殖的变化。在此基础上通过小鼠胫骨注射建立前列腺癌骨转移模型,之后每周在胫骨腔内注射对照siRNA或FZD5基因沉默siRNA,于0、1和3周拍X平片观察肿瘤骨破坏,在3周后取材,行HE染色观察肿瘤骨破坏情况。结果:将FZD5基因沉默siRNA转染入前列腺癌PC3细胞后,细胞内FZD5基因表达量下降约70%。基因沉默组细胞增殖显著低于对照组(P<0.05)。FZD5基因沉默48 h后,细胞迁移能力较对照组下降了30%(P<0.05)。小鼠模型胫骨腔内注射对照siRNA或沉默siRNA 3周时,对照组和实验组均可见溶骨性破坏,但FZD5基因沉默组破坏相对较少,仍可见部分残留骨小梁。结论:通过抑制FZD5基因,可减少前列腺癌细胞的迁移和增殖,可能辅助减少前列腺癌患者的骨转移及骨破坏,从而提高患者的生存率及生活质量。其从分子生物学的角度为前列腺癌的发病机制以及治疗方法提供了新的思路。

Wnt11及其受体Fzd5在肌萎缩脊髓侧索硬化症转基因鼠脊髓内的表达变化

目的检测Wnt11及其受体Fzd5在成年肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)转基因模型鼠脊髓内的表达变化,探讨Wnt11及其受体Fzd5在ALS发病中的作用。方法选取ALS转基因鼠和同窝野生型鼠各30只,分别于鼠龄95 d、108d、122 d取材,部分鼠经4%多聚甲醛心脏灌注固定、分离脊髓、冰冻切片,应用免疫荧光技术,检测脊髓中Wnt11及其受体Fzd5的表达变化;部分鼠取出脊髓、匀浆,应用RT-PCR技术检测不同时间点Wnt11及其受体Fzd5 mRNA的表达变化。结果免疫荧光结果显示,与同窝野生型鼠比较,95 d、108 d和122 d龄ALS转基因鼠脊髓中Wnt11阳性细胞明显增多。免疫荧光双标结果显示,Wnt11标记的阳性细胞与GFAP和β-tubulinⅢ共表达,ALS转基因鼠Wnt11/GFAP双阳性细胞增多。与同窝野生型鼠比较,ALS转基因鼠Wnt11 mRNA水平在95 d、108 d和122 d均升高。Wnt11受体Fzd5表达情况与Wnt11一致。结论 Wnt11和Fzd5在ALS转基因鼠脊髓中表达增多,表明Wnt11及其受体Fzd5表达升高与肌萎缩脊髓侧索硬化症密切相关。

Wnt7a及其受体Fzd5在大肠癌中的表达及意义

目的探讨Wnt7a及其受体Frizzled(Fzd) 5在大肠癌中的表达及关系,揭示大肠癌发生发展的可能机制。方法收集大肠癌标本80例,以癌旁正常组织作为对照。qRT-PCR技术检测Wnt7a及其受体Fzd5在大肠癌及癌旁正常组织中mRNA水平的变化。Western印迹方法检测Wnt7a及其受体Fzd5在蛋白水平的变化,免疫组化检测Wnt7a及其受体Fzd5的表达变化及分布特点,同时观察Wnt7a及其受体Fzd5与大肠癌临床病理参数的关系。结果与癌旁正常组织比较,大肠癌组织中Wnt7a及其受体Fzd5在mRNA及蛋白水平均明显增高(P<0. 05);免疫组化及Western印迹结果显示,Wnt7a及其受体Fzd5均在细胞质表达,且大肠癌组织的表达强度明显高于癌旁正常组织(P<0. 05)。相关性分析表明,Wnt7a与受体Fzd5的表达均与大肠癌的体积、Duke分级及是否伴有淋巴结转移具有明显的相关性(P<0. 05),且Wnt7a与受体Fzd5两者之间呈正相关。结论 Wnt7a可能通过与受体Fzd5的结合激活Wnt信号,参与了大肠癌的发生与发展。

FZD5在山羊妊娠早期的表达及激素调控

实验旨在研究雌性山羊早期妊娠和发情周期中 Frizzled-5(FZD5)蛋白在子宫中的表达,以及类固醇激素对 FZD5 的表达调控。选取发情周期、早期妊娠及雌激素(50 μg/mL)与孕酮(50 ng/mL)处理山羊的子宫组织,采用免疫组织化学染色、荧光定量 PCR和 Western blot检测 FZD5在山羊子宫中的表达规律。结果表明:FZD5 蛋白在山羊妊娠早期的子宫腔上皮和腺上皮中表达;FZD5 mRNA 和蛋白在胚胎与子宫的黏附前(D6)和黏附中(D16)表达较高,在黏附后(D19)和胎盘形成早期(D25)呈下降趋势;孕酮处理导致FZD5表达降低,表明山羊子宫中孕酮下调 FZD5的表达。研究提示FZD5可能在山羊胚胎着床过程中发挥作用。

miR-99a对帕金森模型细胞活力及ROS水平的影响

目的:分析miR-99a对帕金森病细胞模型作用。方法:采用Western blotting以及Real-time PCR方法,对miR-99a以及其靶基因FZD5表达水平进行研究。采用CCK-8方法,检测细胞存活力。结果:过表达miR-99a,可将MPP+抑制PC12细胞存活作用明显缓解,该作用是通过调控miR-99a/FZD5轴完成的。结论:miR-99a在帕金森病细胞模型中,可对MPP+导致的PC12细胞存活抑制作用明显缓解,是通过靶向及下调FZD5实现的。

miR-99a对帕金森病细胞模型作用研究

目的:探讨miR-99a对帕金森病细胞模型的体外作用。方法:利用MPP+诱导的PC12细胞模型,采用Real-time PCR和Western blotting方法研究miR-99a及其靶基因FZD5的表达水平,采用CCK-8方法检测细胞的存活能力。结果:MPP+显著抑制PC12细胞存活,并下调miR-99a的表达。过表达miR-99a可以显著缓解MPP+对PC12细胞存活的抑制作用。MPP+通过调控miR-99a/FZD5轴抑制PC12细胞的存活。结论:在帕金森病细胞模型中,miR-99a具有缓解MPP+引起的PC12细胞存活抑制的作用,而该作用是通过靶向并下调FZD5来实现的。

白三烯受体拮抗剂对脊髓损伤大鼠氧化应激及细胞凋亡的影响及可能机制

目的探讨白三烯受体拮抗剂对脊髓损伤大鼠氧化应激及细胞凋亡的影响,探究Wnt5a/FZD2信号通路对氧化应激及细胞凋亡的调节机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脊髓损伤模型组(SCI组)和白三烯受体拮抗剂组(MK组),参照Allen’s方法建立脊髓损伤的大鼠模型。对大鼠运动功能进行BBB评分;HE染色观察脊髓损伤病理变化;免疫荧光法检测活性氧ROS的表达;ELISA方法检测血清中SOD、MDA、NSE的含量;TUNEL方法检测细胞凋亡情况;Western blot方法检测Wnt5a、FZD2、β-catenin、cyclinD1的表达水平。结果白三烯受体拮抗剂减轻SCI大鼠病理损伤,抑制ROS的释放,抑制MDA、NSE的分泌,促进SOD的释放,下调Wnt5a、FZD2的表达,上调β-catenin、cyclinD1的表达。结论白三烯受体拮抗剂抑制SCI大鼠氧化应激改善细胞凋亡,其机制与调控Wnt5a/FZD2信号通路有关。