RNA干扰技术抑制草莓FaEtr2基因表达的研究

采用RNA干扰技术抑制草莓乙烯受体基因表达,以延缓草莓成熟软化进程。以测序质粒为模板,PCR扩增草莓FaEtr2基因片段。双酶切正、反义PCR产物及表达载体,将酶切产物定向连接到pBI121载体上,构建成该基因的shRNA(Short hairpin RNA)表达载体,由此转录的mRNA因两端序列反向互补而成发夹式RNA,可应用于RNA干扰的研究。将构建好的载体转化根癌农杆菌LBA4404,用基因工程菌菌液浸染千代田草莓组培苗叶片,用卡那霉素筛选抗性植株。PCR检测和GUS组织化学染色检测到4个株系的转基因植株。

草莓乙烯受体FaEtr2基因植物表达载体构建

为通过转基因技术改善草莓的贮运性能,以全明星草莓为试材,克隆了与草莓成熟有关的FaEtr2基因的2个片段,并构建了该基因的反义和正义植物表达载体。根据已克隆的草莓乙烯受体FaEtr2基因序列及表达载体pBI221上的酶切位点设计2对带限制性内切酶位点的特异性引物,以测序质粒为模板,PCR扩增到2个全明星草莓FaEtr2基因片段。两片段经双酶切消化后分别以正、反两个方向插入到植物表达载体pBI221的35 S启动子和NOS终止子之间,分别构建成All Star-FaEtr2基因的正、反义植物表达载体。