小鼠单克隆IgM抗体Fabμ片段的制备及其初步应用

在37℃和4℃下用胰蛋白酶消化小鼠单克隆IgM 4h和24h。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实,37℃下制备的小片段分子量(Mr)近50000(Fab),但免疫活性较低;4℃下制备的小片段Mr为80000～110000(Fabμ),免疫活性与原IgM基本一致。选用在4℃下经胰酶消化IgM 24h制备的Fabμ与辣根过氧化物酶连接,其结合物用于双抗体夹心酶联免疫吸附试验,取得了满意的结果。

小鼠单克隆抗体IgM Fabμ片段的制备

本文介绍了小鼠单克隆抗体IgM小分子活性片段的制备方法。在37℃和4℃下用胰蛋白酶消化IgM 4和24小时,其小片段用碘代乙酰胺烷基化,用Sephacryl S-200柱层析纯化。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证实:在37℃用胰酶裂解IgM,小片段分子量近50000(Fab),但其免疫活性较低:在4℃胰酶裂解IgM,小片段分子量为80 000～110 000(Fabμ),免疫活性与原IgM基本一致。我们用Fab μ片段与辣根过氧化物酶连接,其结合物用于双抗体夹心酶联免疫吸附试验,取得了满意的结果。

人源VEGF单克隆抗体Fabμ和Fc5μ片段的制备

用胰蛋白酶将Mr为900 k的人源VEGFIgM单抗切成Fabμ和五聚的Fc片段(Fc5μ)。用Sephacryl S-200对分离纯化两片段,用间接ELISA法测定IgM抗体及Fabμ片段的抗原结合活性。结果表明:按酶∶IgM为1∶30加入胰蛋白酶,63℃酶切30 min,可使IgM水解完全。用Sephacryl S-200纯化后,片段纯度≥90%。经ELISA间接法测定Fabμ的抗原结合活性后发现,虽与完整的五聚体IgM相比亲和力有所下降,但仍有较好的抗原结合活性,相对亲和力为4.29×108。