大肠癌相关抗体Fab段噬菌体呈现库的表达和活性鉴定

目的利用阳性重组菌XL1-Blue-Pcomb3 表达出人源性大肠癌Fab段噬菌体原始库,固相化人大肠癌组织及细胞的相关抗原后对其进行筛选,鉴定筛选后的抗体库与人大肠癌有无特异性的结合活性。方法PCR鉴定XL1-Blue- Pcomb3重链Fd段和资链的插入率,表达出人大肠癌Fab段原始库。然后提取3例用于构建原始抗体库的致敏大肠癌组织抗原,13例非致敏大肠癌组织抗原及3种体外培养的大肠癌细胞株LoVo、HT-29、LS-174T的抗原,利用3组混合抗原分别对原始抗体库进行3轮筛选,将筛选后的3个三级库等体积混和后通过ELISA及免疫组化鉴定其与人大肠癌组织及细胞是否具有特异性的结合活性,取胃癌、食管癌及正常肠粘膜组织和胃癌、肝癌细胞进行对照研究。结果Fd片段及资链的插入率分别为40%和70%,Fd片段及资链均插入质粒Pcomb3的重组率为28%,Fab段基因库库容为2.1×106,3组大肠癌混合抗原分别对原始库进行3轮筛选后,抗体库均得到了不同程度的富集,ELISA及免疫组化显示富集后的抗体库对人大肠癌组织及体外培养的大肠癌细胞均有较特异性的结合活性。结论利用噬菌体抗体库技术筛选到了人大肠癌相关Fab段抗体群,且筛选后的抗体群与人大肠癌抗原有较特异性的结合活性。

TNF-α单抗Fab段基因的克隆及其在大肠杆菌的表达

目的进行ＴＮＦ－α单抗Ｆａｂ段基因的克隆并在大肠杆菌中表达。方法用逆转录－聚合酶链反应技术（ＲＴ－ＰＣＲ）从分泌抗人ＴＮＦ－α的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆重链Ｆｄ段和κ链基因；并用ＥＬＩＳＡ和免疫印迹分析证明表达的Ｆａｂ段特异结合ＴＮＦ－α。结果从分泌抗人ＴＮＦ－α的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆出了重链Ｆｄ段和κ基因。经ＤＮＡ序列测定表明，ＶＨ、Ｄ、ＪＨ分别属于ＶＨ３Ｄ、ＤＳＰ２和ＪＨ４；Ｖκ和Ｊκ分别属于Ｖκ１和Ｊκ１。将该Ｆｄ和κ链ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＣｏｍｂ３Ｈ中，在大肠杆菌中获得了表达。结论ＥＬＩＳＡ和免疫印迹分析表明，表达的Ｆａｂ段可特异地和ＴＮＦ－α结合。