GROWTH DIFFERENTIATION FACTOR-5 STIMULATES THE GROWTH AND ANABOLIC METABOLISM OF ARTICULAR CHONDROCYTES

Objective To observe the effect of growth differentiation factor-5 (GDF-5) on the growth and anabolic metabolism of articular chondrocytes. Methods The articular chondrocytes isolated from rats were treated with various concentrations of rmGDF-5, and the growth of chondrocytes measured by MTT assay, the cellular cartilage matrices formation detected sulfated glycosaminoglycan by Alcian blue staining and type Ⅱcollagen by RT-PCR. Results After 7 days culture, MTT assay showed that GDF-5 enhanced the growth of chondrocytes in a dose-dependent manner, RT-PCR showed that GDF-5 clearly induced the synthesis of type Ⅱ collagen because of the col2a1 mRNA band more and more strong in a dose-dependent. Chondrocytes were cultured with GDF-5 for 14 days, the intensity of Alcian blue staining was greatly enhanced, especially, at a high concentration of 1000ng/mL, and GDF-5 enhanced the accumulation of the Alcian blue-stainable material in a concentration-dependent manner and in a does-dependent manner. Conclusion GDF-5 enhanced the growth of mature articular chondrocytes, and stimulated the cellular cartilage matrices formation in mono-layer culture.

脓毒症并发急性肾损伤患者血清HDAC4和KLF5的表达及其临床价值

目的探究脓毒症并发急性肾损伤(AKI)患者血清组蛋白去乙酰基转移酶4(HDAC4)和锌指蛋白转录因子5(KLF5)表达及临床价值。方法选取2020年9月—2022年9月本院收治的60例脓毒症并发AKI患者作为AKI组,选取同期北京市大兴区人民医院收治的75例脓毒症未发生AKI患者作为非AKI组。比较两组的临床资料、血清HDAC4和KLF5水平。ROC分析血清HDAC4和KLF5对脓毒症患者并发AKI的诊断价值。Logistic回归分析影响脓毒症患者并发AKI的因素。结果与非AKI组相比,AKI组患者血清HDAC4、KLF5、降钙素原(PCT)、肌酐(Cr)、序贯性器官衰竭(SOFA)、急性生理学及慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分较高,AKI组血小板计数(PLT)较低,差异有统计学意义(P<0.05)。随着AKI组患者分期升高,血清HDAC4和KLF5水平依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清HDAC4、KLF5可辅助诊断脓毒症患者是否并发AKI的曲线下面积(AUC)是0.800(95%CI:0.723~0.876)、0.810(95%CI:0.735~0.886);二者联合诊断的AUC为0.908(95%CI:0.856~0.961),均优于各自单独检测(Z=2.277、2.102,P<0.05)。Logistic回归分析显示,APACHEⅡ评分、SOFA评分、HDAC4、KLF5是影响脓毒症患者是否并发AKI的危险因素(P<0.05)。结论脓毒症并发AKI患者血清HDAC4、KLF5水平升高,且二者联合检测对脓毒症并发AKI的诊断效能较高,对评估脓毒症并发AKI有较好的临床诊断价值。

过氧化物酶体生物发生因子5(PEX5)缺失导致小鼠精子发生失败和不育

目的:过氧化物酶体生物发生因子5(PEX5)对雄性小鼠精子发生及生育功能的影响。方法:利用CRISPR/Cas9及LoxP/Cre技术构建睾丸特异性Pex5基因敲除(Pex5 cKO)小鼠模型,通过苏木精-伊红染色(HE)、免疫蛋白印迹(Western blot)和免疫荧光(IF)染色分析评估雄性小鼠的生殖器官及精子发生的情况。结果:Pex5 cKO雄性小鼠正常成熟交配窝仔数为0,与野生型(WT)雄性小鼠窝仔数(6.32±0.26)相比差异有统计学意义(t=21.46,P<0.0001),且HE染色结果发现,Pex5 cKO小鼠附睾中无精子发生。结论:PEX5在小鼠精子发生过程中发挥重要作用。

MS19通过抑制IRF5表达调控巨噬细胞极化减轻CTD-ILD肺部炎症的作用研究

目的 探讨MS19通过靶向干扰素调节因子5(IRF5)对结缔组织疾病相关肺间质病变(CTD-ILD)小鼠模型肺部炎症的治疗作用及其相关机制。方法 动物实验:构建CTD-ILD小鼠模型,予以MS19干预,研究MS19对CTD-ILD小鼠肺部炎症的影响。细胞实验:对RAW264.7细胞进行OE-IRF5转染,然后予以MS19干预,研究MS19对IRF5调控的巨噬细胞M1型极化及炎症反应的影响。结果 动物实验:CTD-ILD小鼠出现明显的肺部炎症,小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IRF5的表达增高、巨噬细胞M1型极化增加及促炎因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)的表达升高;而MS19干预后,CTD-ILD小鼠的肺部炎症减轻,BALF中IRF5表达降低、巨噬细胞M1型极化减少及促炎因子表达下降。细胞实验:脂多糖诱导巨噬细胞M1型极化、促炎因子表达增加;转染OE-IRF5后,巨噬细胞M1型极化增加、促炎因子表达增加;MS19干预后,巨噬细胞M1型极化减少、促炎因子表达减少。结论 MS19通过靶向抑制IRF5调控巨噬细胞极化及炎症反应,从而改善CTD-ILD的肺部炎症,为防治CTD-ILD提供潜在靶点和候选药物。

ST段抬高型心肌梗死患者血清转化生长因子11、补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白5的表达及临床意义

目的 探讨转化生长因子11(transforming growth factor 11,GDF11)、补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白5(complement C1q/tumor necrosis factor-related protein 5,CTRP5)在ST段抬高型心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction,STEMI)患者血清中的表达及诊断价值。方法 选取2019年3月到2021年2月石家庄市第三医院收治的60例STEMI患者为心肌梗死组,另选取同期健康体检者50名为对照组。检测两组受试者血清GDF11、CTRP5的表达水平。采用Pearson相关性分析对STEMI患者血清中GDF11和CTRP5表达水平及二者与高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、血糖(blood glucose,GLU)、白细胞计数(white blood cell count,WBC)、中性粒细胞计数(neutrophil count,NEUT)、单核细胞计数(monocyte count,MONO)及超敏C反应蛋白(hypersensitive C reactive protein,hs-CRP)、高敏心肌肌钙蛋白T(high-sensitivity cardiac troponin T,hs-cTnT)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzymes,CK-MB)浓度及预后不良事件的相关性进行分析。采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析血清中GDF11和CTRP5对STEMI患者的诊断价值。结果 心肌梗死组患者的血清GDF11(1.42±0.35 vs. 0.99±0.18,t=7.860,P<0.05)和CTRP5(1.49±0.43 vs. 1.01±0.22,t=7.148,P<0.05)表达水平高于对照组,差异有统计学意义。相关性分析结果显示,心肌梗死组血清GDF11和CTRP5表达水平呈正相关(r=0.550,P<0.05),GDF11和CTRP5表达水平与HDL-C呈负相关(r=-0.548,-0.592,P<0.05),与GLU(r=0.447,0.534,P<0.05)、WBC(r=0.653,0.502,P<0.05)、NEUT(r=0.562,0.578,P<0.05)、MONO(r=0.439,0.423,P<0.05)、hs-CRP(r=0.513,0.542,P<0.05)、hs-cTnT(r=0.513,0.524,P<0.05)、CK-MB(r=0.630,0.417,P<0.05)及预后不良事件(r=0.557,0.529,P<0.05)呈正相关。GDF11和CTRP5联合诊断STEMI的ROC曲线下面积大于GDF11、CTRP5单独诊断(Z=2.424、2.507,P<0.05)。结论 GDF11和CTRP5在STEMI患者血清中表达水平升高,两者联合对STEMI具有较高的诊断价值。

双膦酸盐修饰生长分化因子5促进MC3T3-E1细胞的成骨分化

背景:生长分化因子5作为骨形态发生蛋白的一员在软骨及骨组织修复领域表现出良好的应用潜力,增强生长分化因子5与骨组织的亲和力是提高蛋白使用效率的关键,因而开发具有骨靶向性的生长分化因子5蛋白具有重要意义。目的:利用双膦酸盐修饰生长分化因子5并探讨改性后蛋白对小鼠成骨前体细胞生长分化的影响。方法:采用化学交联法将生长分化因子5与帕米膦酸钠偶联,得到偶联帕米膦酸钠的生长分化因子5,采用傅里叶变换红外光谱、圆二色谱对其基团及结构进行表征,利用ELISA试剂盒测定生长分化因子5与磷酸钙的结合量以及生长分化因子5的体外释放量,用于表征其体外骨靶向性。将生长分化因子5(对照组)、偶联帕米膦酸钠的生长分化因子5(实验组)分别与成骨前体细胞MC3T3-E1共培养,以单独培养的细胞为空白对照,评价复合物对细胞增殖及分化等的影响。结果与结论:①红外光谱及圆二色谱结果表明,实验成功制备了双膦酸盐/生长分化因子5复合物且蛋白二级结构无显著变化;体外磷酸钙吸附结果表明,偶联帕米膦酸钠后,生长分化因子5与磷酸钙的吸附率增加了约1倍;在半胱氨酸存在条件下,偶联帕米膦酸钠的生长分化因子5的蛋白可释放出来;②CCK-8实验结果显示,实验组培养4,7 d的吸光度值高于对照组、空白对照组(P<0.0001);培养7 d后,实验组碱性磷酸酶表达明显高于对照组、空白对照组(P<0.0001);培养13 d后,实验组钙结节含量明显高于对照组、空白对照组(P<0.0001);qRT-PCR结果检测结果显示,培养7 d后,实验组碱性磷酸酶、骨钙素及Runx2的mRNA表达高于对照组、空白对照组(P<0.01,P<0.001,P<0.0001);③结果表明,双膦酸盐修饰有利于增强生长分化因子5与磷酸钙的结合能力,同时有利于增强其生物活性。

生长分化因子5与代谢性疾病

生长分化因子5(growth/differentiation factor-5,GDF-5)属于转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)家族,在骨、软骨、心脏、大脑、肾脏、骨骼肌和肌腱、肝脏以及脂肪等多个器官组织中表达。GDF-5与其受体BMPR-I/BMPR-II结合,激活Smad1/5/8、PI3K/Akt、p38-MAPK等信号,发挥促进细胞增殖分化、减少氧化应激损伤、细胞凋亡和组织纤维化等生物学功能。目前针对GDF-5的研究多聚焦在骨、软骨与肌腱的生长和修复等方面,而在其他器官中的生物学作用鲜有报道。因此,本文通过梳理和总结近年来GDF-5与代谢性疾病的研究进展,为GDF-5在改善代谢性疾病防治提供新的见解和理论依据。

生长分化因子5诱导兔骨髓间充质干细胞的软骨分化

背景:生长分化因子5属于转化生长因子超家族成员之一,也是关节发育的最早标志之一,对软骨修复具有重要作用。目的:探讨生长分化因子5诱导骨髓间充质干细胞向软骨分化的作用机制。方法:分离培养兔骨髓间充质干细胞,CCK-8法检测不同质量浓度生长分化因子5对骨髓间充质干细胞增殖活性的影响,RT-PCR检测不同质量浓度生长分化因子5诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化相关基因的表达;为进一步探讨生长分化因子5诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化的作用机制,加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV-939和激活剂Laduviglusib诱导培养14 d,RT-PCR和Western blot检测软骨相关基因和Wnt/β-catenin信号通路中相关蛋白的表达。结果与结论:①CCK-8结果表明生长分化因子5对骨髓间充质干细胞增殖没有明显影响;②生长分化因子5促进了软骨相关基因Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、Sox9的表达,其中以50 ng/mL组软骨相关基因上调明显;③加入Wnt/β-catenin信号通路激活剂Laduviglusib之后,Sox9、β-catenin和Ⅱ型胶原表达上调(P<0.05),加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV939之后,Sox9、β-catenin和Ⅱ型胶原表达下调(P<0.05);④综上,生长分化因子5诱导骨髓间充质干细胞向软骨分化可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

脑源性神经营养因子和神经营养因子-5在女性生殖内分泌领域的研究进展

脑源性神经营养因子(BDNF)和神经营养因子-5(NT-5)属于神经营养因子家族,是一类由神经支配的靶组织分泌的分泌型多肽,两者通过作用于相同的受体发挥作用。BDNF和NT-5在卵巢表达广泛,发挥着促进卵泡组装和发育、卵母细胞成熟、排卵、调节颗粒细胞和膜细胞类固醇激素分泌等多种生理作用。不孕症是由多种病因导致的一种生育障碍状态,不孕症患者卵巢局部的BDNF和NT-5存在异常分泌情况。因此,了解BDNF和NT-5在女性生殖内分泌领域的研究进展,可能为不孕症治疗提供新方向,为辅助生殖结局的预测提供新指标。

2型糖尿病患者血清C1q肿瘤坏死因子相关蛋白5、脂联素水平与颈动脉粥样硬化关系研究

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清C1q肿瘤坏死因子相关蛋白5(CTRP5)、脂联素(APN)水平与颈动脉粥样硬化(CAS)的关系。方法:选择T2DM患者96例为观察组,选择体检健康者108例为对照组。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清CTRP5、APN水平。根据超声检查将T2DM患者分为CAS组和无CAS组,并比较两组一般资料及血清生化指标。分析T2DM患者发生CAS的影响因素,并进行相关性分析。结果:观察组血清CTRP5水平高于对照组,APN水平低于对照组(均P<0.05)。T2DM患者中,40例出现CAS,56例无CAS。CAS组患者年龄、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、CTRP5水平较无CAS组升高,APN水平较无CAS组下降(均P<0.05)。HbA1c、TG、LDL-C、CTRP5为CAS发生的独立危险因素,APN是CAS的独立保护因素(均P<0.05)。血清CTRP5与HbA1c、TG、LDL-C水平呈正相关,血清APN与HbA1c、TG、LDL-C水平呈负相关(均P<0.05)。结论:T2DM患者发生CAS后CTRP5水平升高,APN水平下降,CTRP5为CAS发生的独立危险因素,APN为CAS发生的独立保护因素。

老年鼻咽癌癌组织中Kruppel样因子5及Kruppel样因子9表达与患者复发的相关性

目的探讨老年鼻咽癌癌组织中Kruppel样因子5(KLF5)、Kruppel样因子9(KLF9)表达与患者复发间的关系。方法回顾性分析2016年5月至2018年5月湖南省脑科医院收治的263例老年鼻咽癌患者的临床资料,患者治疗后均行5年院外随访,观察患者是否出现复发。通过Western blotting技术检测老年鼻咽癌患者癌组织中KLF5、KLF9相对蛋白表达量,比较复发患者与非复发患者的基础资料信息[性别、年龄、国际抗癌联盟(UICC)分期、病理类型、疗程延长时间、放疗剂量、是否放疗联合化疗、是否鼻腔受侵、是否口咽受侵、是否颅底骨质受侵、是否颅内受损、是否颅神经损伤]及KLF5、KLF9差异。通过多因素logistic逐步回归分析老年鼻咽癌患者复发的危险因素。采用SPSS 22.0软件进行数据分析。根据数据类型,组间比较分别采用t检验及χ^(2)检验。结果263例老年鼻咽癌患者治疗结束后行5年院外随访,复发患者共27例(10.27%)。与非复发组患者相比,复发组患者UICC分期Ⅲ~Ⅳ期、未行放疗联合化疗、颅底骨质受侵、颅神经损伤占比较高,差异有统计学意义(均P<0.05)。与非复发组患者相比,复发组患者KLF5、KLF9相对蛋白表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。对KLF5、KLF9进行受试者工作特征(ROC)曲线分析,其对老年鼻咽癌患者复发有较好的预测价值,且联合预测价值更高,曲线下面积分别为0.800、0.790、0.894,且均有P<0.05。多因素logistic回归分析显示,UICC分期Ⅲ~Ⅳ期(OR=3.420,95%CI 1.715~6.820)、未行放疗联合化疗(OR=1.434,95%CI 1.106~1.859)、颅底骨质受侵(OR=2.790,95%CI 1.337~5.822)、颅神经损伤(OR=1.249,95%CI 1.026~1.520)、KLF5<2.495(OR=4.453,95%CI 1.469~13.498)、KLF9<0.305(OR=2.719,95%CI 1.604~4.609)是老年鼻咽癌患者复发的危险因素。结论老年鼻咽癌患者癌组织内KLF5、KLF9表达下降,且KLF5、KLF9表达为患者复发的影响因素。

瞬时受体电位通道5对间歇性低氧致心肌焦亡的影响

目的探讨瞬时受体电位通道5(TRPC5)对间歇性低氧致心肌焦亡的影响。方法TRPC5^(-/-)大鼠及SD大鼠各12只,两种大鼠分别随机分为慢性间歇性低氧组(CIH组)和常氧组(Control组),即WT-Control组、WT-CIH组、TRPC5^(-/-)-Control组、TRPC5^(-/-)-CIH组,每组6只。通过Masson染色观察大鼠心肌纤维化情况,ELISA检测血清炎症因子水平,Western blot检测TRPC5及焦亡相关蛋白相对表达水平。结果Masson染色显示,TRPC5^(-/-)-CIH组胶原容积分数高于TRPC5^(-/-)-Control组,低于WT-CIH组。ELISA结果显示,TRPC5^(-/-)-CIH组血清IL-1、IL-6、TGF-β水平高于TRPC5^(-/-)-Control组,低于WT-CIH组。Western Blot结果显示,TRPC5^(-/-)-CIH组焦亡相关蛋白Caspase-1、NLRP3、GSDMD、GSDMD-N相对表达量高于TRPC5^(-/-)-Control组、低于WT-CIH组。结论TRPC5缺乏减轻间歇性低氧导致的心肌焦亡,并改善心肌纤维化。

IGFBP5增龄性表达促进胸腺上皮细胞线粒体自噬和凋亡

目的 探讨在胸腺上皮细胞中随年龄增长而上调表达的胰岛素样生长因子结合蛋白5(Insulin Like Growth Factor Binding Protein 5,IGFBP5)在胸腺衰退中的作用和机制。方法 使用基因差异表达分析方法从已发表人胸腺基质细胞单细胞数据集(GSE147520)中筛选出随年龄增长表达上调程度最高的基因IGFBP5;Mfuzz趋势分析筛选出与IGFBP5具有相同表达趋势的基因;富集分析注释与IGFBP5共趋势基因集;使用蛋白序列比对工具研究IGFBP5蛋白氨基酸序列的人鼠同源性;使用NIH基因数据库研究IGFBP5在人鼠器官组织中表达模式;免疫组化研究IGFBP5在不同年龄C57/BL6小鼠胸腺中的表达模式;构建IGFBP5过表达胸腺上皮细胞系;透射电镜观察IGFBP5过表达胸腺上皮细胞系中线粒体的形态变化;免疫蛋白印记(Western Blot, WB)对线粒体及全细胞组分线粒体自噬标志物微管相关蛋白1B(Microtubule Associated Protein 1 Light Chain 3 Beta, LC3B)、PTEN诱导激酶1(Pten Induced Kinase 1, PINK1)、Parkin泛素蛋白连接酶(Parkin Rbr E3 Ubiquitin Protein Ligase, Parkin)、BCL2互作蛋白3(BCL2 Interacting Protein 3, BNIP3),细胞凋亡标记物活化型胱天蛋白酶3 (Cleaved-Caspase3)表达水平进行检测;细胞双重免疫荧光对线粒体标志物与线粒体探针(MitoTracker)胞内定位进行检测;使用流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)对细胞系凋亡水平进行检测。结果 IGFBP5是人胸腺上皮细胞中随年龄增长表达上调程度最大的基因,与其具有共同表达模式的基因集显著富集在线粒体相关通路上。人与小鼠IGFBP5蛋白序列高度保守,其在人、小鼠多器官组织中表达模式相近,且IGFBP5在人、小鼠胸腺中均呈现中等表达水平;此外,IGFBP5在人和小鼠胸腺上皮中随年龄增长表达升高;在IGFBP5过表达小鼠胸腺上皮细胞系中,透射电镜结果表明线粒体自噬体增多,WB结果表明线粒体组分和细胞组分LC3B、PINK1、Parkin蛋白表达水平上调,BNIP3无明显差异;细胞双重免疫荧光结果表明LC3B、PINK1、Parkin蛋白胞质表达增多且与线粒体共定位;WB表明IGFBP5过表达鼠胸腺上皮细胞系中细胞凋亡标志物Cleaved-Caspase3水平升高;FCM表明IGFBP5过表达细胞系凋亡细胞比例增加。结论 人、小鼠胸腺上皮细胞中随年龄增长而表达升高的IGFBP5促进线粒体自噬和细胞凋亡,从而导致胸腺上皮细胞减少和胸腺功能衰退,因此,IGFBP5可成为干预胸腺衰老、重构人体免疫力的潜在靶标。

生长分化因子5诱导间充质干细胞多向分化的作用与问题

背景:生长分化因子5属于转化生长因子β超家族成员和骨形态发生蛋白家族成员之一,在关节软骨损伤修复、骨再生、改善椎间盘退行性变、肌腱愈合和神经发育等方面发挥重要作用。目的:综述生长分化因子5诱导软骨细胞、髓核样细胞、肌腱细胞分化以及诱导骨形成和神经发育方面的研究进展。方法:在中国知网、万方数据库,以“生长分化因子5,关节软骨,骨,髓核样细胞,肌腱,神经再生”为检索词;在PubMed数据库以“growth differentiation factor 5,articular cartilage,bone,nucleus pulposus cells,tendon,nerve regeneration”为检索词进行检索。根据纳入与排除标准,排除与主题内容不相关的文献,纳入与生长分化因子5相关的69篇文献。结果与结论:①生长分化因子5可诱导间充质干细胞成软骨和成骨分化,但是生长分化因子5诱导成软骨或成骨分化的浓度分界仍然不清楚;②生长分化因子5可诱导间充质干细胞向髓核细胞分化,可能对治疗椎间盘退行性变有一定作用;③生长分化因子5能够诱导间充质干细胞向肌腱细胞分化,对肌腱损伤修复及预防术后肌腱粘连发挥重要作用;④生长分化因子5可诱导神经发育,促进神经再生。

复发性口腔溃疡患儿血清IRF5、sTREM-1变化及对复发的预测价值

目的探讨复发性口腔溃疡患儿血清干扰素调节因子5(IRF5)、可溶性髓样细胞触发受体1(sTREM-1)水平变化及其对复发的预测价值。方法选取石家庄市妇幼保健院于2021年7月至2022年12月收治的146例复发性口腔溃疡患儿为观察组,并根据3个月内是否复发分为复发组(n=45)和未复发组(n=101)。另选取同期138例健康志愿者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测血清IRF5 mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清sTREM-1、白细胞介素(IL)-6和IL-10表达水平,Pearson分析法分析复发性口腔溃疡患儿血清IRF5和sTREM-1水平与IL-6和IL-10水平的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清IRF5和sTREM-1水平对复发性口腔溃疡患儿复发的预测价值。结果与对照组比较,观察组血清IRF5水平明显降低(P<0.05),sTREM-1、IL-6和IL-10水平明显升高(P<0.05);Pearson分析结果显示,复发性口腔溃疡患儿血清IRF5与IL-6、IL-10水平呈负相关(r=-0.531、-0.462,P<0.05),血清sTREM-1水平与IL-6、IL-10水平呈正相关(r=0.435、0.480,P<0.05);与未复发组比较,复发组患儿血清IRF5水平明显降低(P<0.05),sTREM-1水平明显升高(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清IRF5水平单独预测复发性口腔溃疡患儿复发的曲线下面积(AUC)为0.823,最佳cut-off值为0.85,灵敏度和特异度分别为75.56%、84.16%;血清sTREM-1水平单独预测复发性口腔溃疡患儿复发的AUC为0.833,灵敏度和特异度分别为68.89%、88.12%,最佳cut-off值为84.08 pg/mL;二者联合预测复发性口腔溃疡患儿复发的灵敏度和特异度分别为88.89%、82.18%,AUC为0.915,显著高于IRF5单独预测的AUC(Z=2.455,P=0.014)和sTREM-1单独预测的AUC(Z=2.790,P=0.005)。结论复发性口腔溃疡患儿血清IRF5水平较低、sTREM-1水平较高,二者联合对复发性口腔溃疡患儿再复发具有较高的预测价值。

SOX5对大鼠成骨细胞增殖及核因子-κB信号通路的影响

目的:探究Y-box蛋白5(SOX5)对大鼠成骨细胞(OB)增殖及核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:取新生24 h SPF级SD乳鼠,应用酶消化法分离大鼠颅骨OB。形态学观察和ALP染色鉴定成骨细胞;取生长良好的第4代OB,分为空白对照组、pcDNA3.1组、pcDNA-SOX5组、si-NC组、siRNA-SOX5组。转染48 h后qRT-PCR检测细胞中SOX5 mRNA的表达;MTT法检测细胞增殖活力;ALP活性检测试剂盒测量ALP活性;茜素红染色观察钙结节的形成情况;Western blotting检测OB分化及NF-κB信号通路相关蛋白Runt相关转录因子2(Runx2)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、NF-κB p65及其磷酸化蛋白、KB抑制蛋白激酶α(IκBα)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果:与空白对照组相比,pcDNA-SOX5组大鼠OB中SOX5 mRNA水平、p-NF-κB p65/NF-κB p65、TNF-α蛋白表达显著升高(P<0.05),OB增殖活力、ALP活性、钙化结节数量和面积、Runx2、CollagenⅠ、IκBα表达显著降低(P<0.05);siRNA-SOX5组大鼠OB中SOX5 mRNA水平、p-NF-κB p65/NF-κB p65、TNF-α蛋白表达明显降低(P<0.05),OB增殖活力、ALP活性、钙化结节数量和面积、Runx2、CollagenⅠ、IκBα表达明显升高(P<0.05)。结论:SOX5具有调控OB增殖、分化的作用,其作用机制可能与调控NF-κB信号通路有关。

TRAF5通过调控IL-17A/NF-κB信号通路减轻氧-糖剥夺/再灌注引起的心肌细胞炎症和细胞凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子5(tumor necrosis factor receptor-associated factor 5,TRAF5)对氧-葡萄糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)引起的心肌细胞炎症和细胞凋亡的影响及相关分子机制。方法 体外培养大鼠心肌细胞系H9c2细胞,构建OGD/R诱导的H9c2细胞模型,以脂质体转染法将TRAF5过表达质粒(pcDNA-TRAF5)和空载质粒(pcDNA-NC)转染至OGD/R诱导的H9c2细胞。采用实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测细胞中TRAF5基因表达,CCK-8法测定细胞活力,试剂盒法检测细胞中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)和炎性因子水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中相关蛋白表达。结果 与对照组比较,OGD/R组H9c2细胞中TRAF5 mRNA和蛋白表达量降低,细胞活力降低,细胞中LDH、cTnT、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)浓度升高,细胞凋亡率升高,细胞中B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达量降低,Bcl-2相关蛋白(B-cell-lymphoma-2 related protein,Bax)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved cysteine aspartate proteolytic enzyme-3,cleaved caspase-3)、白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)蛋白表达量及磷酸化核转录因子-κB(phosphorylated nuclear factor-κB,p-NF-κB)/NF-κB比值升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与OGD/R组比较,OGD/R+pcDNA-TRAF5组H9c2细胞中TRAF5 mRNA和蛋白表达量升高,细胞活力升高,细胞中LDH、c TnT、TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1浓度降低,细胞凋亡率降低,细胞中Bcl-2蛋白表达量升高,Bax、cleaved caspase-3、IL-17A蛋白表达量及p-NF-κB/NF-κB比值降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TRAF5可减轻OGD/R引起的心肌细胞炎症和细胞凋亡,其作用机制可能与调控IL-17A/NF-κB信号通路有关。

芪冬活血饮通过干扰素调节因子5抑制肺组织M1巨噬细胞募集治疗急性肺损伤的作用机制研究

目的探讨芪冬活血饮通过干扰素调节因子5(IRF5)抑制肺组织M1巨噬细胞募集治疗急性肺损伤(ALI)的作用机制。方法24只C57BL/6小鼠随机分成四组,即空白组、模型组、芪冬活血饮低剂量(1 g/mL)和高剂量(2 g/mL)组,每组6只。采用脂多糖(LPS)制备ALI模型,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理学改变;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺泡灌洗液炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素(IL-6)]水平;采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色检测肺组织细胞凋亡情况;采用流式细胞术检测肺组织M1型巨噬细胞水平,采用蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3剪切体(cleaved caspase3)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、BCL2相关X蛋白(Bax)表达;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肺组织IRF5 mRNA表达;采用免疫荧光法检测IRF5蛋白在肺组织中的原位表达。结果与空白组比较,模型组小鼠肺组织肺泡结构破坏,肺间质水肿增厚,炎性细胞浸润,红细胞渗出,肺组织细胞凋亡显著增加,肺泡灌洗液炎症因子水平显著提高[IL-6:(964.87±85.12)pg/mL比(83.24±8.19)pg/mL,P<0.01;IL-1β:(127.64±10.98)pg/mL比(10.37±2.98)pg/mL,P<0.01;TNF-α:(148.74±13.98)pg/mL比(12.19±2.01)pg/mL,P<0.01],cleaved caspase3、Bax蛋白表达显著增加,Bcl-2蛋白水平降低;M1型巨噬细胞数量显著增加,肺组织IRF5 mRNA表达增加[(3.67±0.34)比(0.98±0.09),P<0.01],IRF5蛋白表达水平显著提高;与模型组比较,芪冬活血饮低、高剂量组小鼠肺组织病理状态明显改善,肺组织细胞凋亡水平显著降低,cleaved caspase3、Bax蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白水平增加,炎症因子水平显著降低[IL-6:(817.56±63.49)pg/mL、(529.45±45.67)pg/mL比(964.87±85.12)pg/mL,P<0.05或P<0.01;IL-1β:(83.84±7.69)pg/mL、(64.28±7.06)pg/mL比(127.64±10.98)pg/mL,P均<0.01;TNF-α:(117.22±12.30)pg/mL、(72.69±8.44)pg/mL比(148.74±13.98)pg/mL,P<0.05或P<0.01],肺组织M1型巨噬细胞数量均显著降低,肺组织IRF5 mRNA表达显著下调[(2.59±0.27)、(1.67±0.19)比(3.67±0.34),P<0.05或P<0.01],IRF5蛋白表达显著下调。结论芪冬活血饮可抑制ALI肺组织M1型巨噬细胞募集,减轻炎症反应,其机制可能与抑制IRF5有关。

IRF5、MUC1水平与IBS患者肠道菌群、胃肠症状严重程度的相关性分析

目的探究血清干扰素调节因子5(IRF5)、黏蛋白1(MUC1)水平与肠易激综合征(IBS)患者肠道菌群、胃肠症状严重程度的相关性,为IBS临床研究提供新的生物学指标。方法选取2022年1月至2023年1月期间本院收治的IBS患者120例,根据IBS诊断标准分为IBS-C组64例与IBS-D组56例。选择同期本院健康体检者60例为对照组。采用Pearson相关性分析探究血清中IRF5、MUC1水平与肠道菌群的相关性;Spearman相关性分析评估血清IRF5、MUC1表达水平与肠易激综合征症状严重程度量表(IBS-SSS)评分的关系。结果IBS-D组患者血清IRF5表达水平、普氏菌、双歧杆菌数量明显低于IBS-C组和对照组,IBS-C组明显低于对照组;IBS-D组患者MUC1表达水平、肠球菌、大肠杆菌数量明显高于IBS-C组和对照组,IBS-C组明显高于对照组(P<0.05)。与IBS-C组相比,IBS-D组IBS-SSS评分明显升高(P<0.05)。结论IBS患者血清IRF5呈低表达,MUC1呈高表达,二者血清水平与肠道菌群及胃肠症状严重程度具有一定相关性。

AlkB同源蛋白5去除前mRNA加工因子6的mRNA甲基化修饰调控肝细胞癌的细胞增殖

目的探讨AlkB同源蛋白5(AlkBhomolog5,ALKBH5)在肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的细胞增殖中的作用。方法通过癌症基因组图谱数据库分析ALKBH5和前mRNA加工因子6(pre-mRNA processing factor 6,PRPF6)在HCC组织中的表达水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测ALKBH5和PRPF6在HCC细胞系(Huh7和Hep3B)中的mRNA和蛋白表达水平。荧光原位杂交确定ALKBH5和PRPF6在HCC细胞系(Huh7和Hep3B)中的亚细胞定位。在免疫沉淀复合物中检测PRPF6的N6-甲基腺苷甲基化水平。通过过表达和敲低基因表达的方法,将Huh7细胞和Hep3B细胞分别进行转染,分组为sh-NC组(阴性对照转染细胞)、sh-ALKBH5实验组(ALKBH5干扰序列转染细胞)、sh-ALKBH5+ex-PRPF6实验组(ALKBH5干扰序列转染+PRPF6 pcDNA 3.1过表达质粒转染细胞),并采用CCK-8和染色增殖试验检测各组细胞的增殖情况。裸鼠异种移植瘤实验验证ALKBH5和PRPF6在体内的生物学功能。蛋白质印迹法检测各组细胞中AKT/mTOR通路相关蛋白的表达水平。结果HCC细胞中ALKBH5的表达上调,可以去除PRPF6的甲基化修饰。体外和体内实验结果显示,ALKBH5可通过调节PRPF6的表达参与HCC细胞的恶性增殖。此外,敲低ALKBH5会抑制丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine-threonine kinase,AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的磷酸化,而PRPF6的过表达则有助于AKT和mTOR的磷酸化。结论ALKBH5能促进HCC细胞的增殖,相关机制是通过ALKBH5/PRPF6/AKT/mTOR轴实现的。