过表达Fad24对猪DFAT细胞在Dex成脂诱导条件下对胞内受体及辅助分子表达的影响

旨在探讨过表达Fad24对猪去分化脂肪细胞(DFAT)在成脂诱导条件下对胞内地塞米松(Dex)受体GR及其高亲和性辅助分子Hsp90和FKBPs表达的影响。用过表达载体pcDNA-Fad24和空载体pcDNA瞬时转染猪DFAT细胞,并在高浓度Dex(1μmol/L)成脂诱导液中诱导成脂分化,然后根据形态学观察检测诱导分化情况,用Real-time PCR和Western blot技术检测对GR及Hsp90和FKBPs表达的影响。结果显示,pcDNA空载体组在诱导5 d时可诱导出成脂细胞,而pcDNA-Fad24过表达组完全抑制成脂分化,细胞积聚形成多个小结节,诱导7 d后形成典型的成骨样结节,茜素红染色证实结节表面有矿化物质沉积。Real-time PCR检测证实,过表达组GRαmRNA的表达量在成脂诱导48 h显著上调(P<0.01),而GRβmRNA的表达量在成脂诱导12 h显著上调(P<0.01);GR的高亲和性辅助分子Hsp90 mRNA的表达量在成脂诱导48 h显著上调(P<0.01);FKBP 51 mRNA的表达量在成脂诱导24 h显著上调(P<0.01),而FKBP 52 mRNA的表达量在成脂诱导48 h显著上调(P<0.01)。Western blot检测证实,上述各因子的蛋白质表达谱与mRNA表达谱基本一致。过表达Fad24对猪DFAT细胞由成脂分化向成骨分化转化作用,与成脂诱导48 h时调控GRα及其Hsp90和FKBP 52表达的上调,以及GRβ和FKBP 51表达下调相关。

过表达Fad24使猪DFAT细胞在成脂诱导条件下转向成骨分化

旨在探索过表达Fad24基因对猪DFAT细胞诱导成脂分化的影响。根据猪Fad24基因序列设计引物,克隆猪Fad24基因的全长CDS区片段,构建猪Fad24过表达载体,通过测序比对碱基和氨基酸序列,通过脂质体瞬时转染技术,将过表达Fad24载体转染猪DFAT细胞,从mRNA水平验证了Fad24基因在猪DFAT细胞中的过表达水平,然后将过表达Fad24的猪DFAT细胞在体外诱导成脂分化,从形态学、Fad24、成脂和成骨分化核心转录因子表达水平上进行了检测。结果表明,猪Fad24过表达载体碱基序列一致性高达99.8%,氨基酸序列一致性高达100%;过表达Fad24的猪DFAT细胞Fad24的表达量高出正常猪DFAT细胞表达量约45倍;成脂分化诱导5 d时,与对照组的正常分化比较,过表达Fad24的猪DFAT细胞成脂分化完全被抑制,相反强力转向成骨分化,细胞积聚成许多小结节,诱导7 d时已形成典型的成骨样大结节,表面可见细胞分泌物;经茜素红染色鉴定,证实细胞分泌物中含有矿化物质沉淀;经Real-time PCR检测,证实过表达Fad24试验组显著下调成脂分化核心转录因子PPARγ2、SREBP-1c(P<0.05)和显著上调成骨分化核心转录因子Runx2的表达(P<0.01)。结果提示,过表达Fad24通过调控成脂和成骨核心转录因子,完全抑制猪DFAT细胞成脂分化,并强力促进向成骨分化转化。

C/EBPs对前脂肪细胞分化调节基因fad24的转录调控作用

Fad24在小鼠脂肪细胞的早期分化过程中发挥着重要作用,是启动前脂肪细胞进入有丝分裂克隆扩增(MCE)的关键基因。已有研究发现CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBPs)对于MCE是必需的,但其分子调控机制尚不明确。我们猜测。

FAD24对小鼠成肌细胞增殖和分化的调节作用

Fad24是一个与小鼠前脂肪细胞的增殖和早期分化密切相关的基因,而表达模式和基因缺陷动物模型显示其可能与骨骼肌的形成也有关联,因此对控制机体的肌肉脂肪比例有重要意义,但其在成肌分化过程的具体作用机制目前尚不明确。本研究旨在系统分析fad24对小鼠成肌细胞增殖和分化的调节作用,为深入了解fad24基因在成肌分化中的生物学功能提供数据。