人参、五灵脂同方配伍功用初探

人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神益智之功效,广泛用于治疗劳伤虚损、反胃吐食、虚咳喘促、小儿慢惊、崩漏等一切气血津液不足之证。五灵脂具有活血止痛、化瘀止血之功效,主要用于治疗心腹血气诸痛、闭经、产后瘀血作痛等病证。人参、五灵脂为十九畏中临床应用较多的一对配伍,一补一通,补中寓通,补而不滞,通而不伤正,治疗病证之病机主要是病久气虚,痰瘀交结,浊气壅塞,宿食不化所致的气虚血瘀之虚实夹杂之证,多用于胸痹心痛、妇科疾病、脾胃疾病、肺系疾病、癥瘕积聚、鼓胀及中风等疾病。

UPLC指纹图谱结合化学模式识别评价不同产地五灵脂药材质量

目的:建立五灵脂药材的超高效液相色谱法(UPLC)指纹图谱,结合化学模式识别法评价不同产地五灵脂药材质量。方法:采用UPLC建立指纹图谱,色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3(150 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),检测波长为265 nm,流速为0.25 mL·min^(-1),柱温为30℃,进样量为1.0μL。结合相似度评价、聚类热图分析及正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)综合评价不同产地五灵脂药材质量。结果:建立的五灵脂药材UPLC指纹图谱共标定14个共有峰,指认出其中6个成分,分别为原儿茶酸、4-羟基苯甲酸、苯甲酸、槲皮苷、穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮;22批五灵脂药材相似度为0.870~0.998;聚类热图分析将22批五灵脂药材分为两类,陕西省商洛市所产五灵脂可与其他产区样品完全区分;OPLS-DA共筛选出7个质量差异标志性成分。结论:建立的五灵脂药材UPLC指纹图谱及其化学模式识别方法稳定可行,可为五灵脂药材质量研究提供参考。

人参与五灵脂配伍对实验动物毒性的影响

小鼠急性毒性试验表明，人参、五灵脂配伍，口服不具毒性，腹腔注射呈毒性增加趋势；大鼠亚急性毒性试验显示，两者配伍对白细胞总数及分类、血小板计数、血红蛋白含量、血清谷丙转氨酶活力、尿素氮等均无明显影响。

人参、五灵脂合用在药效及有效成分方面的研究

抗应激试验表明，人参、五灵脂合用时作用弱于单用人参，呈相畏效应；但两药合用，对非特异性免疫功能的影响，无明显相畏。定量分析可见，两药混煎后人参总皂甙粗品及Ｒｇ＿１煎出率明显增高。结果提示：人参畏五灵脂理论具有局限性。

HPLC法同时测定中药五灵脂中3种成分的含量

目的建立同时测定五灵脂中原儿茶酸、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮含量的方法,为五灵脂的质量控制和开发利用提供依据。方法采用HPLC法,色谱柱：Diamonsil ODS C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相：乙腈（A）-体积分数为0.5%的冰醋酸溶液（B）,梯度洗脱程序：0-15 min：85%-65%（B）、15-35 min：65%-40%（B）、35-40 min：40%-25%（B）、40-60 min：25%-10%（B）、60-65 min：10%-0%（B）,流速：0.8 mL.min-1,检测波长：265 nm,柱温：室温。结果原儿茶酸、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮其质量分别在0.0496-0.4960（r=0.9998）、0.1260-1.2600（r=0.9999）和0.0985-0.9850μg（r=0.9996）内与其峰面积呈良好线性关系,平均回收率分别为100.4%、99.7%和101.2%,RSD分别为2.3%、2.1%和2.0%。结论所建立的方法可用于五灵脂的质量控制。

蒲黄-五灵脂配伍前后化学成分溶出变化的定量分析

目的评价蒲黄-五灵脂配伍前后有机酸、黄酮类成分的溶出变化,以探讨药对配伍的科学性与合理性。方法采用HPLC-PDA方法同时分析测定样品中没食子酸、原儿茶酸、香草酸、对香豆酸、香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的量,采用Diamonsil C18色谱柱,梯度洗脱的方法进行分析测定。结果蒲黄、五灵脂配伍后香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷溶出增加,均高于蒲黄、五灵脂单煎液和单煎混合液;没食子酸、原儿茶酸、香草酸、对香豆酸4个有机酸成分经配伍后溶出量低于单煎液,但高于单煎混合液。结论本实验建立了同时测定蒲黄-五灵脂中有机酸和黄酮类成分的HPLC-PDA方法,为揭示其效应物质基础提供科学依据与参考。

加速溶剂萃取分离-液相色谱法测定五灵脂药材中3种成分的含量

取五灵脂药材(1.0g)与海沙3.0g混匀,置于加速溶剂萃取(ASE)仪中,加入萃取溶剂[乙醇-水(75+25)]静态萃取循环3次,每次10min,萃取温度为100℃,压力为15 MPa。萃取液蒸缩至3mL,加C2H5OH-H2O(75+25)至5.0mL,过滤后供液相色谱分析。在色谱分离中,以Diamosil ODS C18色谱柱为固定相,用(A)甲醇和(B)乙酸(0.5+99.5)溶液以不同比例的混合液作为流动相进行梯度淋洗。在波长360nm处进行检测。药材中的芦丁、山奈酚和穗花杉双黄酮的质量浓度与相应的峰面积之间呈线性关系,3种组分的检出限(3S/N)在0.3~0.6mg·kg-1之间。在3个浓度水平条件下用标准加入法进行回收试验,测得回收率在80.0%~95.0%之间,测定值的相对标准偏差(n=5)在3.2%~9.6%之间。

中药材五灵脂特异性PCR鉴别方法的研究

目的建立快速检测五灵脂中药材动物源性成分的特异性PCR法。方法从NCBI数据库下载复齿鼯鼠及相关混伪品的16S rDNA序列,通过比对获得特异性DNA片段,设计特异引物,从复齿鼯鼠的干燥粪便中提取DNA,优化PCR扩增条件,通过特异性、灵敏度实验验证,建立特异性PCR检测体系。结果 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后扩增出一条340 bp左右条带,而其他样品在相同条件下无扩增条带,该引物的灵敏度可达4.43ng/μl。对15种市售药材的检测结果证明该方法简便可行。结论此PCR法可快速鉴别五灵脂,不受材料和干燥程度的影响,具有操作简便、快速、特异性高的优点。

鸡粪便中氧氟沙星残留检测微生物法的建立

以金黄色葡萄球菌为工作菌, 用杯碟法测定氧氟沙星（OFL）在畜禽粪便中的残留。结果表明：鸡粪便中氧氟沙星的最低检测限为0.156μg/g,标准曲线的工作范围为0.156~5.00μg/g，工作曲线的日内变异系数在2.4%~3.3%、日间变异系数为3.7%~5.2%，回收率分别为79.49%~87.92%。因此,建立的方法可以满足鸡粪尿混合物中氧氟沙星的残留检测要求。

鳖甲五灵脂等12味中药炮制前后细菌含量的变化

比较了鳖甲、五灵脂等１２味中药炮制前后所带污染菌的数量与种类，包括杂菌（兼性厌氧菌、厌氧菌），大肠杆菌及霉菌等。结果表明，中药经净选炮制后，不仅能使药物达到所需成品性状，治疗上的要求，且具有明显的降菌作用。

五灵脂萃取物对实验性胃溃疡及胃酸分泌的作用

五灵脂（简称ＷＬＺ）经加工后萃取出４个部分：ＷＬＺ－Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ，用Ｓｈａｙ模型和利血平模型研究五灵脂保护胃粘膜作用的有效成分及其作用机制。实验结果：ＷＬＺ－Ｂ组的胃液量、胃酸酸度和总分泌量均少于空白对照组（Ｐ＜０．０１），而且存在量效关系；两种模型ＷＬＺ－Ｂ组的粘膜损伤指数均小于空白对照组（Ｐ＜０．０１）。表明ＷＬＺ－Ｂ具有抑制胃酸分泌，保护胃粘膜，预防实验性胃溃疡的作用。

五灵脂炮制前后指纹图谱及含量测定比较

目的:建立五灵脂及其炮制品指纹图谱,并对主要指标成分穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮进行定量测定。方法:采用HPLC色谱法,Agilent extend-C18柱(4. 6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0. 1%甲酸,梯度洗脱,柱温30℃,检测波长335 nm,建立五灵脂及其炮制品指纹图谱,采用指纹相似度软件进行分析,并对2个主要色谱峰进行含量分析。结果:醋五灵脂、酒五灵脂、清炒五灵脂与五灵脂生品指纹图谱和含量测定结果基本一致,炭炒五灵脂较五灵脂生品新增2个峰,且穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮含量相对减少。结论:所建立的指纹图谱精密度、重复性、稳定性良好,含量测定方法准确率达到要求,对五灵脂及其炮制品的质量评价和炮制原理研究有提供依据。

论动物排泄物药材的取舍

目的:动物排泄物药材从古时至今,在品种数量上已大大缩减,本文从"数量减少"和"质优则取"方面探讨取舍之道。方法:笔者查阅中国知网与万方搜索"动物排泄物"等文献,发现近十年来仍沿用和研究的仅为:五灵脂、虫茶、黑冰片、蚕砂、夜明砂五种。结果:现将其研究及临床应用的文献加以归纳与分析。结论:要将此类药材全部淘汰,还是要保护、继续发扬这具有中国特色的药材,笔者建议此类药材应遵循"取其精华,去其糟粕"的原则对待。

蒙古国进口五灵脂传播有害疫病的风险分析

为了确保生物安全,避免有害生物传播,本研究对蒙古国进口五灵脂可能传播的有害疫病进行了风险分析。结合五灵脂原动物复齿鼯鼠可能携带的病原及该病原是否对人有感染性,该病原在蒙古国存在的可能性,该病原由五灵脂传带的可能性,以及该病原的理化特性和流行病学特性等因素,并考虑实际运输中可能造成疫病传播的可能性,最终确定五灵脂传带可能性较大,需要检疫或重点加强处理的病毒病4种、细菌病4种、立克次体病1种、寄生虫病1种,并制定了风险管理措施。

加速溶剂萃取–液相色谱法测定五灵脂药材中原儿茶酸的含量

建立了五灵脂中原儿茶酸含量的测定方法。利用加速溶剂萃取仪（ASE），以75％乙醇水溶液提取样品中的待测物，用Diamosil C18（4．61mm×250mm，5．0μm）色谱柱在梯度洗脱条件下分离待测物，外标法定量。原儿茶酸的线性范围为0．1—10．0mg／L，相关系数r=0．9998。方法的回收率为83％～107％，测定结果的相对标准偏差为4．6％～10．5％，方法的定量限为1．0mg／kg。该方法操作简便、快速，提取效率高，适用于检测和分析五灵脂中原儿茶酸的含量。

经典名方中五灵脂的本草考证

通过查阅历代本草方书等文献,对古代五灵脂药材的名称、基原、产地、采收加工及炮制的历史沿革进行了系统的本草考证,为包含本药材的经典名方开发提供依据。古代五灵脂的主流来源为复齿鼯鼠Trogopterus xanthipes Milne-Edwards的干燥粪便,历代以山西、河北为主产区,可生用或炒用。清代以来五灵脂多以醋炒,并延续至今形成醋五灵脂的炮制规格。建议经典名方“身痛逐淤汤”中五灵脂药材按照1990年版《中华人民共和国药典》中“醋五灵脂”的规范进行炮制加工。

不同产地五灵脂质量研究

目的建立五灵脂药材的质量控制方法,比较不同产地12批五灵脂药材的质量。方法按2015年版《中国药典(四部)》通则方法测定五灵脂药材中水分及浸出物含量,采用薄层色谱法定性鉴别五灵脂中的穗花杉双黄酮,采用高效液相色谱法测定不同产地五灵脂药材中穗花杉双黄酮的含量。结果市售不同产地12批五灵脂药材水分含量为5. 11%~10. 83%;醇溶性浸出物含量为8. 13%~11. 20%;五灵脂中穗花杉双黄酮的薄层色谱图斑点清晰、分离较好、方法简便;穗花杉双黄酮含量为0. 035%~0. 050%。结论该方法操作简便高效,快速稳定,可用于五灵脂药材的质量控制。测定穗花杉双黄酮的含量有利于五灵脂药材的质量控制,可为其进一步的开发利用提供理论依据。

不同产地五灵脂质量评价研究

目的:基于HPLC指纹图谱和穗花杉双黄酮的含量测定结果,对不同产地五灵脂药材质量进行评价。方法:采用HPLC建立五灵脂指纹图谱和穗花杉双黄酮含量测定方法,并运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统和统计软件进行结果分析。结果:不同产地的五灵脂指纹图谱和穗花杉双黄酮含量有其专属性,其中陕西、山西、安徽、河北四产地的指纹图谱相似度高,且穗花杉双黄酮含量>0.020%。结论:不同产地的五灵脂质量存在较大差异,可能与其复齿鼯鼠食物来源有关,需控制鼯鼠食物来源,保证市场上五灵脂质量稳定性。

五灵脂研究进展的CiteSpace知识图谱分析

[目的]探索五灵脂相关研究领域近25年的发展状况、研究热点。[方法]本文以1996-2020年中国知网(CNKI)和Web of Science两大数据检索平台收录的五灵脂领域相关文献为对象,开展计量学分析,运用CiteSpace 5.7.R2软件对文献的作者、研究机构以及关键词进行分析。[结果]最终纳入中文文献1089篇,英文文献19篇。中文发文最高的作者是上海中医药大学附属曙光医院的蒋健,英文发文最高的作者南京中医药大学的段金廒;中国中医科学院针灸医院是五灵脂研究的重要机构,但各个科研机构间合作较少;关键词分析显示五灵脂的研究内容主要集中在临床应用、经方应用。“名医经验”“生蒲黄”“慢性盆腔炎”是突现强度最高的3个关键词。[结论]图谱直观地展示了五灵脂药材的研究趋势,五灵脂的临床应用、复方配伍和名医经验是当前研究的热点,对未来有关五灵脂的研究选题具有参考价值。

五灵脂的质量标准研究

目的建立五灵脂的3种药用成分薄层色谱鉴别(TLC)和含量测定方法。方法采用TLC法定性鉴别五灵脂中的槲皮素、山柰素和穗花杉双黄酮;采用HPLC法测定五灵脂中槲皮素、山柰素和穗花杉双黄酮的含量。结果五灵脂中槲皮素、山柰素和穗花杉双黄酮的TLC图斑点清晰、重复性好、专属性强、分离较好、方法简便。药材中槲皮素、山柰素和穗花杉双黄酮的线性范围分别为0.11~1.08(r1=0.9998),0.38~4.78(r2=0.9996)和0.45~4.46μg(r3=0.9998),平均加样回收率分别为99.01%,99.13%和98.73%,RSD值分别为0.65%,0.34%和0.48%;3个指标测定的精密度、重复性、稳定性和准确度实验RSD值均低于2.00%。结论该方法简便、快捷,结果准确、可靠,可作为该药材的质量控制标准。