HPLC法测定荞麦不同种不同部位槲皮素和山柰酚的含量

目的:采用HPLC法测定荞麦不同种不同部位槲皮素和山柰酚的含量。方法:色谱柱:DIKMA diamonsil(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B),梯度洗脱;检测波长:260 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:25℃。结果:苦荞不同部位槲皮素含量为:种子(6.12 mg/g)>叶(1.47 mg/g)>茎(0.34 mg/g),根中未检测到;山柰酚只在种子(0.42 mg/g)和西荞1号叶(0.09 mg/g)中检测到;甜荞根(0.12 mg/g)、茎(0.17 mg/g)、叶(0.32 mg/g)和种子(0.12 mg/g)中均检测到较低含量的槲皮素,未检测到山柰酚;苦荞根、茎和叶中的槲皮素和山柰酚总含量和平均含量都高于甜荞;同一产地不同栽培品种苦荞中槲皮素和山柰酚含量差异不大,甜荞未检测到。结论:该方法方便快速,结果准确,可为荞麦及其产品的质量评价提供依据。

苦荞麦中芦丁的正交提取工艺及HPLC检测研究

采用芦丁的最大吸收波长510nm为指标,以索氏回流法进行正交试验;对提取物进行高效液相色谱法检测,结果表明:其最佳工艺参数为乙醇浓度60%vol,乙醇体积150mL,回流时间1.5h,超声时间40min,此条件下芦丁提取率0.95%。

99份苦荞主要农艺性状评价与筛选

为了对苦荞的主要农艺性状进行综合评价,筛选优质苦荞品种,以99份苦荞(国外51份、国内48份)为试验材料,通过变异分析、相关分析和综合得分F值等方法对99份苦荞的11个农艺性状进行分析。结果表明:苦荞11个农艺性状间存在较大变异,变异系数均大于0.1;单株粒重、单株粒数、千粒重和株高与籽粒产量呈极显著正相关;主成分分析显示,前4个主成分的累计贡献率为73.234%,第一主成分中负有最高荷载的为单株粒数和单株粒重;聚类分析将99份苦荞分为6个类群,其中类群Ⅳ的18份品种性状优良,可作为核心种质资源。苦荞选育时应重点考虑单株粒数和单株粒重2个性状指标。综合聚类分析和综合得分F值筛选出23份高产优质苦荞,其中12份为国外引进品种。

UPLC-QQQ-MS/MS指纹图谱结合一测多评法的不同品种苦荞麦质量评价

目的建立18个品种苦荞麦Fagopyrum tataricum指纹图谱,并以芦丁为内标物,采用一测多评法(quantitative analysis of multi-components by single-marker,QAMS)同时检测苦荞麦中葫芦巴碱、表儿茶素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰酚和大黄素含量,以期对不同产地苦荞麦进行质量控制。方法采用超高效液相-三重四级杆液质联用技术(UPLC-QQQ-MS/MS),首次以一级全扫(Full-MS)和多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)2种采集模式相结合的方式建立UPLC-QQQ-MS/MS指纹图谱共有模式,采用夹角余弦法进行相似度评价。以ThermoFisher Accucore^(TM)C_(18)色谱柱(100 mm×3.0 mm,2.6μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,体积流量0.3 mL/min,柱温30℃,梯度洗脱。以芦丁作为内标物,建立苦荞中其他6种指标成分的相对校正因子(fs/x),从而计算各待测成分的量,并将QAMS计算值与外标法(external standard method,ESM)实测值进行比较,以验证QAMS的准确性和方法适宜性。运用聚类分析、主成分分析、加权分析等化学计量学分析手段建立苦荞麦综合质量优劣评价方法。结果建立了苦荞麦的UPLC-QQQ-MS/MS指纹图谱,在Full-MS扫描模式下标定了15个共有峰,各品种间相似度在0.399~0.973;同时以MRM扫描模式结合对照品对其中芦丁等7种指标成分进行了峰指认。以芦丁为内标物,与葫芦巴碱、表儿茶素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰酚和大黄素6种有效成分的建立的fs/x重现性良好,分别为0.283、1.338、0.654、1.162、8.509、0.709。且采用QAMS测定的18个品种苦荞麦中7种指标成分含量与ESM的实测值之间无显著性差异(P>0.05)。化学计量学分析结果表明,芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷和山柰酚是影响苦荞麦质量的主要潜在标志物,质量排序相对靠前的苦荞麦产区主要集中在海拔高、光照强、昼夜温差大的中国西南地区,而指纹图谱相似度差异较明显的荞杂2号、综甜2号和通荞1号排在后3位。结论所建立的指纹图谱结合QAMS简便可行,结果准确,化学计量学分析方法全面客观,可为苦荞麦品质评价和质量控制提供参考和依据。

苦荞麦中总黄酮和芦丁的含量测定方法的研究

本文通过对苦荞麦中总黄酮的比色测定方法和芦丁的HPLC的方法研究,初步确定了对苦荞麦的质量控制的标准,从而确定了一种简单、快捷、准确的分析方法。

苦荞麦的化学成分

目的研究苦荞麦的化学成分。方法利用硅胶S、ephadex LH-20等柱色谱方法分离化学成分,根据理化性质和波谱数据分析鉴定化合物的结构。结果从苦荞麦种子中初步分离得到5个化合物,分别鉴定为乌苏酸(ursolic acid,1)、7-羟基香豆素(7-hydroxycoumarin,2)、大黄素(emodin,3)、尿嘧啶(uracil,4)、原儿茶酸(protocatechuic acid,5)。结论化合物2为首次从荞麦属植物中分离得到,化合物1、5为首次从苦荞麦中分离得到。

苦荞麸皮黄酮抗氧化及抗肿瘤活性

以西南地区的两种苦荞麸皮为实验材料(重庆酉阳苦荞麸皮(T1);四川西昌苦荞麸皮(T2)),通过氧化自由基吸收能力实验(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)测定苦荞麸皮黄酮的化学抗氧化能力,采用人肝癌细胞HepG2为细胞模型,研究苦荞麸皮黄酮的细胞抗氧化活性(cellular antioxidant activity,CAA)及对HepG2细胞抗增殖活性。结果表明:T1和T2苦荞麸皮黄酮的ORAC值分别为(57.0±3.5)、(73.6±6.3)?mol TE/g。T1和T2苦荞麸皮黄酮的细胞抗氧化值分别为(44.4±5.2)、(52.5±2.7)?mol QE/100 g(PBS清洗);(32.9±3.2)、(30.9±2.2)?mol QE/100 g(不经PBS清洗)。在对HepG2细胞体外抗增殖活性研究实验中,通过与对照组细胞相比,发现当苦荞麸皮黄酮的质量浓度为21.9 mg/mL时,T1和T2苦荞麸皮黄酮对HepG2细胞增殖的抑制率分别约为51%和82%(P<0.01),二者相应的EC50值分别为(23.0±0.5)mg/mL和(13.7±0.1)mg/mL。因此,苦荞麸皮黄酮具有一定的体外细胞抗氧化和抗增殖的能力,可将苦荞麸皮作为此类功能性食品开发的原料资源。

四川省凉山州北部栽培苦荞麦的遗传多样性研究

用等位酶电泳技术测定了四川省凉山彝族自治州北部越西和甘洛2县的苦荞麦［Fagopyrum tataricum (L.) Gaertn.］17个栽培居群的遗传多样性和分化，结合农业生物学性状进行了分析。对7个酶系统的15个位点的检测表明，苦荞麦居群内的遗传多样性水平高于该州南部的苦荞麦和其他地区甜荞麦，每个位点的等位基因平均数为1.9，多态位点比率为52.1%，平均实际杂合度和预期杂合度分别为0.190和0.262， FST值为0.199，居群间存在着较明显的遗传分化，接近野生植物的平均水平。对苦荞麦种质资源保护提出了以下策略：“有翅荞”2个居群的多态位点比率P为60.0%，它们的实际杂合度均高于预期杂合度，分别为Ho＝0.260和Ho＝0.301，是遗传多样性最丰富的居群，应重点保护。此外，遗传多样性较高的2个“小米荞”居群和遗传位置独特的“秋苦荞”、“额曲苦荞”和“革洛苦荞”的3个居群也应加强保护。

盐胁迫下五个苦荞麦品种的耐盐性比较

以5个不同苦荞麦[Fagopyrum tataricum(L.)Gaertn.]品种为试验材料,在100 mmol/L Na Cl胁迫下测定荞麦种子发芽率、幼苗根系活力、叶片质膜透性和Na+含量等指标,对5个苦荞麦品种种子萌发期和幼苗期的耐盐性进行了比较。结果表明,Na Cl胁迫下川荞1号种子发芽率和幼苗根系活力最高,幼苗叶片质膜透性和Na+含量最低;而川荞2号正好相反。说明在种子萌发期和幼苗期川荞1号的耐盐性最强,川荞2号对盐胁迫最敏感。

苦荞叶总黄酮提取纯化工艺研究

[目的]合理开发利用苦荞麦生物资源,延伸苦荞产业链,提高其经济效益;探索适合苦荞叶黄酮工业化生产的工艺方法。[方法]以盛花期的苦荞叶为原料,采用超声波辅助法提取总黄酮,并通过大孔树脂吸附法进行纯化,对提取、纯化工艺进行了优化。[结果]总黄酮最佳提取工艺为:以60%的乙醇为提取剂,提取温度为72℃,料液比为1∶32g·mL^(-1),超声波处理时间为31min,超声波功率为101 W,此工艺条件下苦荞叶总黄酮得率为10.2523%;AB-8树脂对苦荞叶总黄酮纯化效果最好,最佳纯化工艺为:上样液pH为5,浓度为1.50g·L^(-1),流速为1.00mL·min^(-1),上样量为33mL·g^(-1)树脂,洗脱液为75%乙醇,洗脱液pH为5,流速为1.50mL·min^(-1),洗脱液用量为10mL·g^(-1)树脂,测得苦荞叶黄酮的回收率为77.01%,黄酮纯度为90.6%,是纯化前的3.02倍。[结论]苦荞叶中总黄酮的含量高,且易纯化;该提取、纯化工艺可满足工业化生产高效益、低成本、简单易操作的需求,为其工业化生产提供理论依据。

不同海拔高度对苦荞子粒营养成分的影响

分析了5个苦荞[Fagopyrum tataricum（L.）Gaertn]品种在湖北省五峰县2个不同海拔高度生态试验点的子粒黄酮、氨基酸和多酚含量变化,旨在为摸索苦荞高效栽培模式,并为选育生态弱响应苦荞新品种奠定基础。结果表明,高海拔种植可提高苦荞黄酮、氨基酸与多酚的含量;相同海拔种植条件下,品种间的黄酮、氨基酸和多酚含量也存在显著性差异,西农9909在2个生态试验点的子粒黄酮含量分别极显著（P〈0.01）和显著（P〈0.05）高于其他品种;与海拔1 400 m种植相比,海拔780 m种植条件下品种间3种营养成分下降幅度均呈现不同程度的变化,其中黄酮含量各品种下降幅度较小,为2.86%~10.53%,多酚含量下降幅度为4.74%~28.57%,氨基酸含量下降幅度最大,为9.52%~77.59%;不同品种对海拔高度变化的敏感性也不同,在供试的5个品种中,SNKQ-1对生态环境因子变化钝感,而云荞2号对生态环境因子变化敏感。

烯效唑浸种对不同水分条件下苦荞生长的影响

以"黑丰一号"苦荞[Fagopyrum tataricum(L.)Gaertn]为试验材料,采用不同浓度(0、40、80和120mg/kg)烯效唑浸种,探讨不同水分条件(正常供水、中度干旱和重度干旱)下烯效唑浸种对苦荞生长的抗旱效应。结果表明,烯效唑浸种降低了苗高,提高了苦荞的茎粗、叶面积、最大根长和根冠比;同时还提高了叶片相对含水量、脯氨酸含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白质含量和根系活力。烯效唑处理降低了丙二醛(MDA)含量,从而降低了膜脂过氧化程度,提高了保护酶活性。采用80 mg/kg烯效唑浸种,在正常供水、中度干旱胁迫及重度干旱胁迫条件下,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性较对照均有不同程度的提高;苦荞株穗数、株粒数、百粒重较对照均有不同程度的提高。由此可见,80 mg/kg的烯效唑浸种可以提高苦荞的抗旱能力。

苦荞水提液清除活性氧作用研究

用NBT光化还原法、Fenton反应法和钼酸铵显色分光光度法对苦荞[Fagopyrum tataricum(L.)Gaertn]叶和茎水提液清除羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(·O2-)和过氧化氢(H2O2)的作用进行了研究。结果表明,苦荞叶和茎水提液具有较强的清除自由基能力,而且随水提液浓度增加其清除能力增强。其中叶的清除能力显著高于茎。

全谱直读电感耦合等离子体原子发射光谱测定苦荞麦矿物元素

采用HNO3/H2O2湿法微波消解制样,采用全谱直读电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-OES),分析测定了苦荞麦中的矿物元素,共检出P、S、K、Mg、Ca、Si、Al、Fe、Na、Zn、Mn、B、Cu、Se、Ti、Cr、Ba、Sr等18种矿物元素。分析结果的RSD值在0.45%～9.09%之间,其中15种元素在5%以内。苦荞麦中所含P、S、K、Mg、Ca、Na等常量元素的质量分数分别为0.21%、0.21%、0.17%、0.098%、0.019%、0.0017%;微量元素Fe、Zn、Cu、Se、Cr、Si、Mn、B、Ti、Ba、Sr、Al等的含量(mg.kg-1)分别为37.4、16.5、3.67、1.38、0.44、121.6、6.90、4.88、0.63、0.22、0.12、49.9。

苦荞麸皮多酚抑制人结肠癌细胞Caco-2增殖活性研究

研究了产自重庆酉阳的苦荞(Fagopyrum tartaricum L.Gaerth,FG1)麸皮和四川西昌的苦荞(Fagopyyrum tartaricum L.Gaerth,FG2)麸皮中酚类化合物的含量、抗氧化和抗增殖活性。结果表明:FG1和FG2 2种苦荞麸皮总酚含量分别为(26.40±0.41)和(27.00±0.72)mg GAE/g DW,且游离态是其酚类化合物的主要存在形式(约占其总酚含量的93%);2种苦荞麸皮酚提取物均表现出一定的抗氧化性,并且FG2的抗氧化能力强于FG1(P<0.05),FG1和FG2的DPPH自由基清除能力总IC50值分别为(39.56±2.76)和(24.69±0.33)μg·mL^(-1);还原力总EC_(50)值分别为(97.92±1.4)和(73.18±4.32)μg·mL^(-1);在抗增殖试验中,与对照组相比,FG1和FG2游离酚提取物均能明显抑制人结肠癌细胞Caco-2增殖(P<0.05)。然而,在不产生细胞毒性的浓度范围内,其结合酚提取物却表现出极弱的抗增殖作用。

施肥量对九江苦荞产量和品质的影响

以贵州省主栽苦荞[Fagopyrum tataricum(L.)Gaertn.]品种九江苦荞为试验对象,研究了施肥量(以当地常规施肥量为对照)对苦荞主茎分枝等植物学性状以及子粒产量和品质的影响。结果表明,0.5水平处理(对照施肥量的1/2)的产量显著高于其他肥料处理,对照的蛋白质和黄酮含量显著高于0.5水平和1.5水平(对照施肥量的1.5倍)的肥料处理。

苦荞麦化学成分的药理学作用研究

苦荞麦属蓼科双子叶植物,经济价值和营养价值较高.苦荞麦含有丰富的黄酮类、甾体类、酚类、有机酸类、蛋白质、氨基酸、淀粉以及微量矿质元素等化学成分,对其在降血糖血脂、抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳缺血、镇痛抗炎、祛痰、维护血管等药理学作用和苦荞麦资源发展利用方面进行了综述.

微量元素锌肥对苦荞芽中锌及黄酮含量的影响

采用不同浓度锌肥喷施,促进苦荞[Fagopyrum tataricum(L.)Gaertn]种子萌发,测定苦荞芽中锌、总黄酮、芦丁和槲皮素的含量。结果表明,喷施锌肥可以极显著增加苦荞芽中锌含量,也可以增加总黄酮、芦丁和槲皮素的含量,喷施锌肥浓度为1.00 mg/L时,苦荞芽中总黄酮、芦丁和槲皮素的含量最高。

苦荞麦总黄酮含量测定方法研究

目的:建立苦荞麦总黄酮含量测定方法。方法:应用L9(34)正交试验设计优选苦荞麦总黄酮的最佳提取工艺条件。采用紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量。结果:优选所得的苦荞麦总黄酮最佳提取工艺条件为:加100倍量甲醇,加热回流2次,每次提取2 h。苦荞麦总黄酮平均含量为4.03%,RSD为0.98%(n=5);平均回收率为100.98%,RSD为2.15%(n=5)。结论:优选所得提取工艺条件稳定可行。用紫外-可见分光光度法测定苦荞总黄酮含量,稳定性好、合理、可行。

苦荞BAC文库的构建及BAC末端序列分析

目的:为了深入挖掘苦荞的基因组信息,筛选与苦荞品质相关的功能基因。方法:以苦荞品种"晋荞麦2号"为材料,参考Peterson等方法通过提取高分子量核DNA,经酶切、连接和转化构建苦荞基因组BAC文库;随机挑选48个BAC克隆进行序列末端测序。结果:该文库包括30 000个克隆,插入片段平均大小约为123 kb,空载率小于1%,覆盖苦荞基因组6.9倍。共得到89条BAC末端序列,通过序列比对分析发现,7条(8%)有比对结果。其中,有末端序列与rpoTm2、Trrap、MDR1等已知基因相似,这些基因与DNA锚定,物质跨膜运输和磷酸转移酶活性等功能有关。分析还发现末端序列40G19-F可能是苦荞基因组的重复序列。结论:苦荞BAC文库构建为今后苦荞基因的克隆及全基因组测序奠定了基础。