翻白草水提液对大鼠胰岛细胞脂毒性损伤的保护作用

目的探讨翻白草水提液对大鼠胰岛细胞脂毒性损伤的影响。方法棕榈酸诱导Wistar大鼠原代胰岛细胞凋亡模型后,FDA/PI双染和流式法检测细胞凋亡,ELISA法测定GSIS水平,qPCR检测FAS、CPT-1 mRNA表达,Western blot检测AMPK蛋白表达,硫代巴比妥酸法测定细胞内丙二醛(MDA)活性,分光光度计法测定细胞还原型谷胱甘肽(GSH)活性。结果与对照组比较,棕榈酸组GSH活性、CPT-1 mRNA表达、p-AMPK蛋白表达显著降低,MDA含量、FAS mRNA表达显著增加(P<0.05),而翻白草水提液+棕榈酸能明显逆转棕榈酸组上述作用。与翻白草水提液+棕榈酸组比较,BML-275(AMPK选择性抑制剂)组GSH活性、CPT-1 mRNA表达显著降低,MDA活性、FAS mRNA表达显著增加(P<0.05)。结论翻白草水提液可能通过激活AMPK,抑制脂肪酸合成,促进脂肪酸β氧化,从而抑制氧化应激所致胰岛细胞脂性凋亡,最终改善胰岛素分泌功能。

翻白草三萜类成分粗提物纯化及其降血糖作用研究

目的：研究翻白草中三萜类成分粗提物的纯化方法及其纯化物对四氧嘧啶溶液诱导的糖尿病小鼠的降血糖作用。方法：翻白草三萜类成分粗提物采用大孔吸附树脂分离纯化，并通过小鼠体内降血糖实验，评价翻白草三萜类成分的降血糖效果。结果：纯化的后的齐敦果酸和总三萜的纯度分别为3．18％、55．16％；各给药组小鼠空腹血糖浓度显著下降（P〈0．01），高剂量组降血糖效果最显著。结论：优选的纯化方法简单可行，质量可控，翻白草三萜类成分有降血糖的作用。

RP-HPLC法测定翻白草中山奈酚、槲皮素的含量

目的:建立翻白草中山奈酚、槲皮素含量的高效液相色谱测定方法;方法:采用D iamonsilTMC18柱(4.6mm×150 mm,5μm),以M eOH-0.3%H3PO4(4:6,t/v)为流动相,365 nm波长,流速为1.0 mL.m in-1;结果:待测组分与其它组分分离良好(R>1.5),2组分平均回收率分别为99.2%,RSD=0.6%;99.1%,RSD=2.4%;结论:该方法操作简单、易行,重现性好,可为该原料药及制剂的质控提供参考。

翻白草中黄酮类成分含量测定及其质量评价研究

目的:建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定翻白草药材中4种黄酮类成分的方法,以及紫外-可见分光光度法测定翻白草总黄酮含量的方法,并比较19批翻白草药材和2批委陵菜药材上述成分含量差异。方法:采用HPLC法,色谱柱:InertSustain C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm),以0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长360 nm,测定不同批次翻白草药材和委陵菜药材中4种黄酮类成分含量;以芦丁为对照品,采用紫外-可见分光光度法测定总黄酮的含量。结果:不同批次翻白草药材中4种黄酮类成分差异显著,总黄酮存在一定差异;委陵菜药材中芦丁、槲皮苷含量低于翻白草药材。结论:本研究所建立的方法稳定,精密度好,重现性高,为更好地控制翻白草药材的内在质量提供了科学依据。

基于网络药理学和GEO数据集的翻白草治疗2型糖尿病分子机制探讨

目的:网络药理学结合GEO数据集探讨翻白草治疗2型糖尿病的分子机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)下载翻白草化学成分信息,经SwissADME对各成分进行筛选和SwissTargetPrediction预测靶点后,得到药物作用靶点。采用R软件下载GEO数据中GSE系列,提取表达矩阵,对原始数据进行归一化处理后提取临床信息,采用limma程序包进行2型糖尿病差异基因分析。通过微生信在线平台获取药物作用靶点和疾病差异基因交集,即为翻白草治疗2型糖尿病的潜在作用靶点,对潜在作用靶点进行生物信息学分析,采用分子对接方法对分析结果进行验证。结果:筛选得到翻白草中20个化学成分,经SwissTargetPrediction预测后,得到374个药物作用靶点,R软件分析获得2型糖尿病差异基因658个,取交集后得到17个潜在作用靶点。经过基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析可知,翻白草有效成分有原儿茶酸、咖啡酸、山柰酚、3,4,5-三羟基苯甲酸、罗索酸,通过作用蛋白激酶C-θ (PKC-θ)、核转录因子-κB p65亚单位(RELA)、核糖体蛋白S6激酶α3 (RPS6KA3)、信号传导和转录激活因子3 (STAT3)、乳酸脱氢酶B (LDHB)和6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶同工酶3 (PFKFB3)靶点,参与胰岛素抵抗通路(P<0.01)、低氧诱导因子-1 (HIF-1)信号通路(P<0.01)和脂肪细胞因子信号通路(P<0.01)来发挥治疗2型糖尿病作用。分子对接结果显示,PKC-θ、RELA、STAT3与咖啡酸,RPS6KA3与罗索酸,LDHB与3,4,5-三羟基苯甲酸,PFKFB3与山柰酚之间均具有较好的对接活性。结论:通过网络药理学结合GEO数据集,初步预测了翻白草治疗2型糖尿病的潜在靶点和可能的作用机制,为翻白草治疗2型糖尿病的进一步研究提供理论依据。

2种近缘中药翻白草和仙鹤草的化学成分和降血糖活性比较

翻白草Potentilla discolor和仙鹤草Agrimonia pilosa是蔷薇科(Rosaceae)2种近缘的药用植物,具有明确的降血糖活性,作为治疗糖尿病的中药材应用于临床。基于药用植物亲缘学(pharmaphylogeny)的理论,总结二者主要活性成分的生物合成途径,进而比较二者活性成分的共性及差异,并对物质基础与疗效之间的相关性进行总结。结果表明,2种近缘中药共有的生物合成途径占到60%,刺蒺藜苷、槲皮素等共有成分及翻白叶苷A、蔷薇酸等差异性成分同时也是活性成分,而特征成分及其量的差别可能引起功效及作用方式的不同。

清热益气中药对初发2型糖尿病KKay小鼠胰岛素敏感性的影响

目的观察清热益气中药干预初发2型糖尿病KKay小鼠血糖水平、胰岛素敏感指数的效果及肝脏病理形态变化,探讨中药治疗初发2型糖尿病的作用机制。方法 10周龄雄性初发2型糖尿病KKay小鼠27只按血糖值随机分为模型组、罗格列酮组[0.67 g/(kg.d)]、中药组[8.3 g/(kg.d)]。正常对照组选10周龄雄性C57BL/6J小鼠9只。各组连续灌胃给药4周后取材,测定其随机血糖、空腹血糖、胰岛素,肝脏切片HE染色观察组织学改变。结果给药4周后,与正常组相比,模型组胰岛素敏感指数明显降低(P<0.01),空腹血糖、随机血糖明显升高(P<0.01),肝脏组织明显脂肪变性。中药组与模型组相比,胰岛素敏感指数高于模型组(P<0.01);空腹血糖值低于模型组(P<0.01);中药组随机血糖值较模型组有下降,但无统计学意义(P>0.05);中药组肝脏结构明显好于模型组。结论清热益气中药可改善初发2型糖尿病KKay小鼠的胰岛素抵抗,增加胰岛素的敏感性从而改善血糖水平,并能有效保护肝脏组织形态结构。

翻白草总黄酮对2型糖尿病db/db小鼠降血糖的作用机制

目的:探讨翻白草总黄酮对2型糖尿病db/db小鼠的血糖、血脂、氧化应激、组织病理及肝脏磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响。方法:24只db/db小鼠随机分为模型组、盐酸二甲双胍组(0.2 g·kg^(-1)),翻白草总黄酮低、高剂量组(0.1,0.4 g·kg^(-1)),另取6只db/m小鼠作为正常组。药物干预4周后,检测血清中空腹血糖(FBG),糖化血清蛋白(GSP),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),空腹血胰岛素(FINS),丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),检测肝糖原含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏、胰腺组织病理学变化;采用蛋白免疫印迹法(Western bolt)分别检测肝脏组织中胰岛素受体β(IRβ),胰岛素受体底物-1(IRS-1),PI3K,磷酸化PI3K(p-PI3K),Akt,p-Akt,葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组肝细胞排列紊乱,胞浆内可见大量脂肪空泡、脂滴,伴有部分细胞坏死。胰腺胰岛体积减小,胰岛组织和腺泡细胞界限不明显,细胞排列紊乱,部分细胞空泡化;血清FBG,GSP,TC,TG,LDL-C,FINS,MDA水平显著升高(P<0.01),血清HDL-C,SOD水平明显降低(P<0.05),肝糖原含量显著降低(P<0.01),肝脏组织IRβ,IRS-1,p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt和GLUT4蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,翻白草总黄酮低、高剂量组肝细胞形态结构较完整,空泡样变、水肿坏死显著减少。胰腺结构清晰,被膜结构完整,胰岛分布正常,结构完整。血清FBG,GSP,TC,TG,FINS,MDA水平明显降低(P<0.05),血清HDL-C,SOD水平明显升高(P<0.05),肝糖原含量显著升高(P<0.01),肝脏组织IRS-1,p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt和GLUT4蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:翻白草总黄酮可显著改善糖脂代谢紊乱及胰岛素抵抗,抗氧化应激,减轻肝脏、胰腺的病理损伤,提高肝脏组织PI3K/Akt信号通路中的相关蛋白表达,从而防治2型糖尿病。