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Western印迹法分析蓖麻毒素在正常小鼠血清和肝组织匀浆中的稳定性 被引量:2
1
作者 郎立伟 王晨宇 +2 位作者 王玉霞 陆丽娜 傅风华 《烟台大学学报(自然科学与工程版)》 CAS 北大核心 2010年第3期243-246,共4页
以重组蓖麻毒素A链(rRTA)免疫家兔,制备的抗rRTA兔血清效价高,能达到1∶51200.以兔多抗血清为检测抗体,建立蓖麻毒素的Western印迹检测法,对蓖麻毒素检测灵敏度可达1 ng.含有蓖麻毒素的小鼠血清和肝组织匀浆(蓖麻毒素终浓度为0.67μg... 以重组蓖麻毒素A链(rRTA)免疫家兔,制备的抗rRTA兔血清效价高,能达到1∶51200.以兔多抗血清为检测抗体,建立蓖麻毒素的Western印迹检测法,对蓖麻毒素检测灵敏度可达1 ng.含有蓖麻毒素的小鼠血清和肝组织匀浆(蓖麻毒素终浓度为0.67μg/mL)在37℃孵育0~4 h后,应用此法体外观察蓖麻毒素在正常小鼠组织样品中的稳定性,结果显示Western印迹可用于组织中蓖麻毒素的测定,蓖麻毒素可在小鼠血清和肝组织匀浆中稳定存在. 展开更多
关键词 蓖麻毒素 western印迹 免疫分析
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油桃花芽自然休眠诱导期FAR1/FHY3基因的表达分析
2
作者 郇蕾 王旭旭 +2 位作者 刘文海 李玲 高东升 《山东农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 2017年第2期229-235,共7页
FAR-RED ELONGATED HYPOCOTYL 3(FHY3)和它的同源基因FAR-RED-IMPAIREDRESPONSE 1(FAR1)参与远红光、脱落酸(Abscisic acid,ABA)对拟南芥种子休眠的调节,然而FHY3/FAR1在木本植物花芽休眠中的表达尚不清楚。本研究以八年生‘中油四号’... FAR-RED ELONGATED HYPOCOTYL 3(FHY3)和它的同源基因FAR-RED-IMPAIREDRESPONSE 1(FAR1)参与远红光、脱落酸(Abscisic acid,ABA)对拟南芥种子休眠的调节,然而FHY3/FAR1在木本植物花芽休眠中的表达尚不清楚。本研究以八年生‘中油四号’油桃花芽为材料,利用NCBI找出桃树上的FAR1/FHY3同源基因,测定了同源性最高的5个基因在休眠诱导期的表达,并在休眠诱导期分别用脱落酸及远红光处理桃树,荧光定量检测了基因的表达量变化。结果表明,桃中同源性最高的Prupe.3G186100、Prupe.3G186200、Prupe.4G115100、Prupe.3G186000 4个基因在休眠诱导期均有上调,且受ABA诱导表达上调,受远红光诱导表达下调,而Prupe.2G327900在休眠诱导期表达下调,受ABA诱导下调,受远红光诱导上调。我们推测,Pp FRSs基因可能通过不同的模式参与油桃花芽休眠诱导的调控。 展开更多
关键词 ABA 花芽休眠诱导 表达分析 远红光 FHY3/far1
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高内涵分析及Western blotting法在蛋白质核质分布研究中的应用及比较研究 被引量:4
3
作者 纪晓方 李丽英 常娜 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第5期616-620,共5页
目的使用不同方法对蛋白质的核质分布进行检测并比较差异。方法细胞经免疫荧光染色后使用高内涵分析(high content analysis,HCA)对蛋白质的细胞质或细胞核总荧光强度进行分析;分别提取胞质及胞核蛋白,使用Western blotting法对核质组... 目的使用不同方法对蛋白质的核质分布进行检测并比较差异。方法细胞经免疫荧光染色后使用高内涵分析(high content analysis,HCA)对蛋白质的细胞质或细胞核总荧光强度进行分析;分别提取胞质及胞核蛋白,使用Western blotting法对核质组分中的蛋白质含量进行鉴定。结果两种方法均可检测到蛋白质的出核转运;经定量分析,HCA法检测到的HuR蛋白质/核比升高倍数小于Western blotting法。结论使用HCA法检测蛋白质核质定位具有准确、客观、成本低、快捷、多参数等特点,不失为Western blotting的有效补充及替代方法。 展开更多
关键词 高内涵分析 western BLOTTING 蛋白质核质分布
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用Far-Western印迹技术筛选人肝组织中与乙肝病毒表面抗原PreS1相互作用的蛋白 被引量:3
4
作者 苏婧 杨静 +6 位作者 张松 丁晓然 王学军 胡伟 朱向前 张敏丽 王升启 《生物技术通讯》 CAS 2010年第3期355-358,共4页
目的:利用Far-Western印迹技术从正常人肝组织中筛选乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原PreS1结合蛋白,为阐明HBV的感染致病机理提供依据。方法:提取正常人肝组织细胞膜蛋白,双向电泳展示后转膜,对表达纯化获得的PreS1的重要片段与GST的融合蛋白... 目的:利用Far-Western印迹技术从正常人肝组织中筛选乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原PreS1结合蛋白,为阐明HBV的感染致病机理提供依据。方法:提取正常人肝组织细胞膜蛋白,双向电泳展示后转膜,对表达纯化获得的PreS1的重要片段与GST的融合蛋白PreS/1-48myr-GST进行Far-Western印迹实验,对筛选获得的蛋白点切胶,质谱鉴定。结果:对PreS/1-48myr-GST融合蛋白进行Far-Western-2D筛选,共获得22个蛋白点,经质谱鉴定获得15个候选相互作用蛋白,其中膜蛋白Ezrin可能在HBV感染致病过程中具有重要作用。结论:Ezrin蛋白能够与乙肝病毒表面抗原PreS1结合,其在HBV感染致病过程中的重要作用值得探索。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒表面抗原 PRES1 结合蛋白 EZRIN far-western印迹
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Water masses in the far western equatorial Pacific during the winters of 2010 and 2012 被引量:1
5
作者 LI Bo YUAN Dongliang ZHOU Hui 《Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2018年第5期1459-1474,共16页
Conductivity-temperature-depth(CTD)data obtained during the 2010 La Nina winter and the 2012 normal winter,combined with concurrent Argo profiling float data,provide a quasi-synoptic description of the water mass di... Conductivity-temperature-depth(CTD)data obtained during the 2010 La Nina winter and the 2012 normal winter,combined with concurrent Argo profiling float data,provide a quasi-synoptic description of the water mass distributions and their variations in the far western equatorial Pacific Ocean.The water mass connection between the western Pacific and the east Indonesian seas is emphasized.Analysis indicates that the North Pacific Tropical Water(NPTW,S〉34.9)carried by the Mindanao Current southward and the South Pacific Tropical Water(SPTW,S〉35.1)from the southern hemisphere meet in the area.Observations suggest that the southward transport of the NPTW is stronger in 2010 than in 2012 due to enhanced advection of the Mindanao Current.The distribution of SPTW,which crosses the equator in the northwest direction and retroflects back to the interior Pacific Ocean,is found to retreat from 4°–5°N in2012 to 2°–3°N in 2010 La Ni?a peak in the 130°E section.A relatively fresh tropical subsurface water is identified in between the NPTW and the SPTW,moving eastward with the North Equatorial Countercurrent into the equatorial Pacific Ocean.However,the salinity maximum of this subsurface fresh water is found to decrease eastward,suggesting that the salinity maximum is generated either by strong diapycnal mixing or by isopycnal mixing of temporally entrained Indonesian sea water into the area. 展开更多
关键词 far western equatorial Pacific North Pacific Tropic Water South Pacific Tropical Water tropical subsurface water La Nifia
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Western印迹中蛋白质定量分析的替代方法 被引量:6
6
作者 王尧尧 税朝祥 方秋红 《细胞生物学杂志》 CSCD 2007年第2期296-298,共3页
Western印迹广泛采用显像密度计法对特异性蛋白质表达进行定量,但是仍然存在敏感性的问题尚未解决。同时,昂贵的试剂与复杂的设备限制了其应用。建立了一种改良定量检测法,使用碱性磷酸酶标记的第二抗体,以萘酚磷酸盐和快红作反应底物... Western印迹广泛采用显像密度计法对特异性蛋白质表达进行定量,但是仍然存在敏感性的问题尚未解决。同时,昂贵的试剂与复杂的设备限制了其应用。建立了一种改良定量检测法,使用碱性磷酸酶标记的第二抗体,以萘酚磷酸盐和快红作反应底物。吸附膜上的终末显色用有机溶剂洗脱,通过测定光吸收值定量。结果显示该法更简便、快速、经济而不失其敏感性。 展开更多
关键词 western印迹 蛋白质定量分析
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辣椒FAR1基因家族的全基因组分析 被引量:1
7
作者 夏承东 方大伟 《安徽农业科学》 CAS 2020年第14期97-102,共6页
FAR-RED IMPAIRED RESPONSE 1(FAR1)基因在植物生长发育中起着重要的调控作用。该研究采用生物信息学的方法,从辣椒基因组中鉴定得到20个CaFAR1转录因子家族成员,系统进化分析表明,20个CaFAR1基因分为6个亚家族,其中18个CaFAR1基因分布... FAR-RED IMPAIRED RESPONSE 1(FAR1)基因在植物生长发育中起着重要的调控作用。该研究采用生物信息学的方法,从辣椒基因组中鉴定得到20个CaFAR1转录因子家族成员,系统进化分析表明,20个CaFAR1基因分为6个亚家族,其中18个CaFAR1基因分布在8条染色体上,8号染色体上有3个,2号、6号、7号、12号染色体各分布1个,6号和10号染色体上各分布2个,3号染色体上有6个。GO功能注释表明,20个CaFAR1蛋白序列基于氨基酸的相似性被分为三大类:生物过程(BP)、细胞成分(CC)和分子功能(MF)。 展开更多
关键词 辣椒 far基因家族 生物信息学 全基因组分析
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非小细胞肺癌组织MAGE-1蛋白的Western印迹分析 被引量:2
8
作者 黎涛 马春山 +2 位作者 李川 孙强 王云 《实用医药杂志》 2008年第2期219-221,共3页
目的检测黑素瘤抗原-1(MAGE-1)蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,探讨以该蛋白作为疫苗对NSCLC患者进行免疫治疗的可能性。方法采用Western印迹法对3种人肺癌细胞系和56例NSCLC标本及相邻正常肺组织标本MAGE-1蛋白的表达情况进行研究... 目的检测黑素瘤抗原-1(MAGE-1)蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,探讨以该蛋白作为疫苗对NSCLC患者进行免疫治疗的可能性。方法采用Western印迹法对3种人肺癌细胞系和56例NSCLC标本及相邻正常肺组织标本MAGE-1蛋白的表达情况进行研究。结果3种人肺癌细胞系均表达MAGE-1蛋白;56例NSCLC标本中,25例表达MAGE-1蛋白,而相邻正常肺组织均不表达。结论MAGE-1蛋白在NSCLC中呈高频率表达,提示该蛋白有望成为对NSCLC患者进行免疫治疗的适宜靶点。 展开更多
关键词 肺肿瘤 非小细胞肺癌 黑素瘤抗原-1 免疫治疗 western印迹分析
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CpOGA^(D298N)与核心链霉亲和素Stv13融合表达用于检测蛋白质O⁃GlcNAc修饰
9
作者 黎先感 杨明 +4 位作者 鲁莹 李玲 马骞 李静 张连文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期513-519,共7页
氧连接的β-N-乙酰葡萄糖胺修饰(O-GlcNAc修饰)是一种发生在蛋白质丝氨酸、苏氨酸羟基上的一种动态、可逆的翻译后修饰。O-GlcNAc修饰在细胞的许多关键过程中发挥重要作用,也是研究阿尔茨海默病和糖尿病等的重要途径,但是常用于O-GlcNA... 氧连接的β-N-乙酰葡萄糖胺修饰(O-GlcNAc修饰)是一种发生在蛋白质丝氨酸、苏氨酸羟基上的一种动态、可逆的翻译后修饰。O-GlcNAc修饰在细胞的许多关键过程中发挥重要作用,也是研究阿尔茨海默病和糖尿病等的重要途径,但是常用于O-GlcNAc蛋白检测的抗体特异性或者检测分子量范围仍存在问题且耗时(~36 h)过长,对后续研究造成困扰。在本研究中,我们设计构建了产气荚膜梭菌OGA(O-GlcNAcase)突变体(CpOGA^(D298N))与核心链霉亲和素Stv13融合表达质粒pET28a-CpOGA^(D298N)-Stv13。将质粒pET28a-CpOGA^(D298N)-Stv13转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,获得了融合蛋白质CpOGA^(D298N)-Stv13。通过CpOGA^(D298N)特异性结合O-GlcNAc的能力及生物素-亲和素特异性亲和作用,设计了Far-Western blot(Far-WB)用于检测蛋白质O-GlcNAc修饰,利用sOGT(short form O-GlcNAc transferase)、去O-GlcNAc修饰sOGT、细胞裂解液样本及人肝细胞核因子1A(hepatocyte fuclear factor 1A,HNF1A)对该方法进行验证。本研究成功构建了一种蛋白质O-GlcNAc修饰检测方法,耗时相对O-GlcNAc特异性抗体缩短至5~7 h,丰富了蛋白质O-GlcNAc修饰的检测方法,为其后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 氧连接的β-N-乙酰葡萄糖胺修饰 CpOGA^(D298N)-Stv13 生物素 far-western blot
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家蚕30kD特异性变应原的分析、纯化与质谱鉴定 被引量:13
10
作者 刘志刚 张杰 林格 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期101-105,共5页
以Coca’s提取液分别提取到不同时期家蚕Bombyx mori的粗浸液,利用SDS-PAGE和Western blotting鉴定其特异性变应原,然后用DEAE-52离子交换层析及切胶纯化出30kD的特异性变应原,再经MALDI—TOF在线联机分析,所得质谱数据进入网站搜... 以Coca’s提取液分别提取到不同时期家蚕Bombyx mori的粗浸液,利用SDS-PAGE和Western blotting鉴定其特异性变应原,然后用DEAE-52离子交换层析及切胶纯化出30kD的特异性变应原,再经MALDI—TOF在线联机分析,所得质谱数据进入网站搜索分析。结果显示:1~5龄家蚕均有20条左右蛋白带,其中5龄家蚕有23条蛋白带,主带有11条(82、79、60、51、46、38、32、30、28、24和18kD)。选用家蚕过敏患者阳性血清进行免疫印迹,1-4龄家蚕均显示出82和79kD的特异性变应原;但只有5龄家蚕的30kD蛋白为特异性变应原,通过离子交换层析和经切胶纯化出30kD蛋白,再经MALDI—TOF—MS鉴定该蛋白为外膜蛋白。提示家蚕不同时期抗原成分有所变化,5龄家蚕新出现的30kD蛋白为特异性变应原。 展开更多
关键词 家蚕 过敏原 SDS-PAGE western BLOTTING 离子交换层析 质谱分析
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麻疯树水通道蛋白新基因JcPIP干旱胁迫下的功能分析 被引量:6
11
作者 王云霄 张颖 +2 位作者 江璐玎 牛蓓 陈放 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期289-295,共7页
采用RT-PCR和RACE技术,从大戟科(Euphorbiaceae)耐旱植物麻疯树(Jatropha curcas)cDNA中克隆得到了一个麻疯树质膜内膜蛋白(PIP)新基因,命名为JcPIP。聚类分析表明,麻疯树PIP蛋白与蓖麻、葡萄和菠菜的PIP蛋白在进化上有最近的亲缘关系。... 采用RT-PCR和RACE技术,从大戟科(Euphorbiaceae)耐旱植物麻疯树(Jatropha curcas)cDNA中克隆得到了一个麻疯树质膜内膜蛋白(PIP)新基因,命名为JcPIP。聚类分析表明,麻疯树PIP蛋白与蓖麻、葡萄和菠菜的PIP蛋白在进化上有最近的亲缘关系。将JcPIP基因在非洲爪蟾卵母细胞(xenopus oocytes)中异源表达发现细胞膨胀率扩大了10倍,表明JcPIP基因编码的是一个水通道蛋白。合成亲水性、抗原性好的JcPIP保守序列多肽,制备并纯化JcPIP多克隆抗体。Western-blot检测显示JcPIP蛋白富集在29kDa区段,且在麻疯树各组织中均有大量表达。PEG-6000干旱胁迫下麻疯树叶片JcPIP蛋白丰度增加,复水后丰度开始下降,表明JcPIP与麻疯树的耐旱性相关。 展开更多
关键词 麻疯树 水通道蛋白 聚类分析 western—blot 功能分析 干旱胁迫
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4株IBDV分离株VP2基因的序列分析及原核表达 被引量:2
12
作者 肖跃强 管宇 +4 位作者 李书光 刘吉山 王金良 郭广君 沈志强 《畜牧与兽医》 北大核心 2010年第4期69-73,共5页
RT-PCR扩增获得4株鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)分离株(GT、HN、ZB、BZ)VP2基因并测序,序列分析结果表明:各基因全长均为1356bp,编码452个氨基酸残基;核苷酸、氨基酸序列同源性分别在93.2%~99.9%与93.6%~100%之间;除HN株与经典毒株Cu-1... RT-PCR扩增获得4株鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)分离株(GT、HN、ZB、BZ)VP2基因并测序,序列分析结果表明:各基因全长均为1356bp,编码452个氨基酸残基;核苷酸、氨基酸序列同源性分别在93.2%~99.9%与93.6%~100%之间;除HN株与经典毒株Cu-1核苷酸同源性为95.5%外,其余3株均为95.6%;GT、HN、ZB及BZ株与VariantE株核苷酸同源性均为95.9%;该4株病毒与北欧、非洲、西亚、东南亚、东亚等地区于1998~2008年报道的超强毒株的核苷酸与氨基酸序列同源性均非常高。根据VP2蛋白氨基酸序列特征,HN、ZB、BZ株病毒皆为超强毒株(vvIBDV),GT株除254位氨基酸残基为变异株特征性的S(丝氨酸)外,其余均与超强毒株特征相符。以GT株VP2基因克隆至原核表达载体pBV220,转化大肠杆菌BL21(DE3),低温培养后42℃热诱导,并对诱导产物进行SDS-PAGE、Western-blot分析。结果显示,目的基因获得表达,并与阳性抗体具有良好的反应原性,为以VP2为基础的基因工程亚单位疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 VVIBDV VP2基因 序列分析 原核表达 western—blot
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飞蝗几丁质酶5-1抗体制备及表达特性分析 被引量:1
13
作者 张婷婷 柳伟伟 +7 位作者 高璐 李任建 付穗业 刘晓健 李大琪 刘卫敏 董卿 张建珍 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2418-2428,共11页
【目的】通过制备飞蝗(Locusta migratoria)几丁质酶5-1(LmCht5-1)的多克隆抗体,建立飞蝗体内LmCht5-1蛋白水平检测方法,分析LmCht5-1在4龄飞蝗的表达特性及组织定位。【方法】采用MEGA软件对LmCht5-1和LmCht5-2氨基酸序列进行比对,利用... 【目的】通过制备飞蝗(Locusta migratoria)几丁质酶5-1(LmCht5-1)的多克隆抗体,建立飞蝗体内LmCht5-1蛋白水平检测方法,分析LmCht5-1在4龄飞蝗的表达特性及组织定位。【方法】采用MEGA软件对LmCht5-1和LmCht5-2氨基酸序列进行比对,利用Expression网站对LmCht5-1氨基酸序列进行抗原表位预测分析,获得LmCht5-1抗原结构区域;以飞蝗c DNA为模板,通过PCR扩增LmCht5-1的抗原片段;同时通过酶切连接构建含有鸡血清白蛋白OVA的载体p ET32a-OVA;然后通过酶切连接将LmCht5-1插入到p ET32a-OVA载体构建p ET32a-OVA-LmCht5-1;将p ET32a-OVA-LmCht5-1转入表达菌株BL21(DE3)中,IPTG诱导表达重组蛋白OVA-LmCht5-1;利用Ni-NTA纯化后免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体。通过ELISA方法检测抗体效价;利用Western blot检测抗体特异性。提取4龄飞蝗不同日龄表皮,采用Western blot分析LmCht5-1蛋白表达模式。对4龄飞蝗注射ds LmCht5-1,检测蛋白水平LmCht5-1表达量,并通过免疫组化方法对LmCht5-1进行定位及功能分析。【结果】通过LmCht5-1和LmCht5-2序列比对和抗原表位预测分析,获得LmCht5-1的471—533AA可作为抗原区域;通过酶切连接分别获得p ET32a-OVA和p ET32a-OVA-LmCht5-1。经诱导表达和纯化后获得重组蛋白OVA-LmCht5-1,分子量为71.34 k D;免疫后制备多克隆抗体OVA-LmCht5-1,ELISA检测效价为1﹕102 400。多克隆抗体OVA-LmCht5-1用于Western blot检测时可特异性识别LmCht5-1,与LmCht5-2蛋白无交叉反应。利用Western blot方法检测4龄若虫各日龄表皮中LmCht5-1蛋白的表达,发现LmCht5-1蛋白随发育日龄其表达量逐渐增加,在蜕皮当天达到峰值,蜕皮后快速降至最低点。对飞蝗若虫N4D2注射ds LmCht5-1,检测到在N4D5时,LmCht5-1的转录水平和蛋白水平均被显著抑制,抑制率分别为70.0%和73.6%。选取注射ds LmCht5-1和ds GFP的4龄飞蝗表皮,进行免疫组化实验显示LmCht5-1定位于表皮细胞和旧表皮中,其功能失活引起旧表皮中几丁质不降解。【结论】获得飞蝗LmCht5-1多克隆抗体可特异性识别LmCht5-1,可用于Western blot和免疫组化检测。明确LmCht5-1在飞蝗4龄若虫蜕皮当天表达最高,定位于表皮细胞和旧表皮中。ds LmCht5-1可减少表皮细胞和旧表皮中LmCht5-1的表达,阻碍旧表皮中几丁质的降解。 展开更多
关键词 飞蝗 几丁质酶5-1 抗体制备 表达分析 western BLOT
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南极适冷菌Psychrobacter sp.G冷激蛋白基因Csp2039的表达分析 被引量:1
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作者 李阳 车帅 +1 位作者 王桢 林学政 《海洋科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期85-94,共10页
以南极适冷菌Psychrobacter sp.G为研究对象,利用qRT-PCR和Western blot技术从转录水平和翻译水平对冷激蛋白基因Csp2039在不同温度/盐度胁迫条件下的表达特征进行了研究。在转录水平上,qRT-PCR分析表明,冷激蛋白基因Csp2039的表达于6h... 以南极适冷菌Psychrobacter sp.G为研究对象,利用qRT-PCR和Western blot技术从转录水平和翻译水平对冷激蛋白基因Csp2039在不同温度/盐度胁迫条件下的表达特征进行了研究。在转录水平上,qRT-PCR分析表明,冷激蛋白基因Csp2039的表达于6h时显著被低温(0℃,10℃)和高温(30℃)诱导;低盐(0)胁迫下,基因Csp2039的表达先被诱导后被抑制,在盐度为15的胁迫下,基因Csp2039的表达均被诱导,高盐(90,120)时基因Csp2039的表达在6h时显著被诱导;在温度和盐度协同胁迫条件下,温度为0℃时,无论盐度高低,基因Csp2039的表达均显著上升,而高温(30℃)时,除2h被低盐诱导以外,其余条件下均显著被抑制。在翻译水平上,Western blot分析表明,冷激蛋白Csp2039的表达被低温(0℃,10℃)显著诱导,但高温(30℃)对其抑制并不明显;在低盐(0,15)胁迫下,Csp2039蛋白的表达均被诱导,高盐(90)胁迫下,Csp2039蛋白的表达先被抑制,然后逐渐升高;在温度和盐度协同胁迫条件下,低温(0℃)时,当盐度为15时,Csp2039蛋白的表达被诱导,盐度为90时,Csp2039蛋白的表达量被显著抑制;而高温(30℃)时,该蛋白在盐度15时6h的表达量最大,盐度90时于6h其表达被显著抑制。比较分析表明,在转录水平上基因Csp2039表达量的变化更容易受温度影响,而在翻译水平上盐度对Csp2039蛋白的影响作用大于温度;基因Csp2039在翻译水平上对温度/盐度胁迫的应答时间要迟于转录水平的。 展开更多
关键词 PSYCHROBACTER 冷激蛋白基因Csp2039 QRT-PCR western BLOT 表达分析
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水稻中一个谷胱甘肽转移酶基因的克隆、表达和酶活性分析(英文) 被引量:1
15
作者 胡廷章 黄小云 +1 位作者 肖国生 屈霄霄 《云南植物研究》 CSCD 北大核心 2008年第6期688-692,共5页
OsGSTL1是位于水稻3号染色体上的一个λ类谷胱甘肽转移酶基因,由8个内含子和9个外显子组成,编码一个由243个氨基酸组成的多肽链。将OsGSTL1克隆到酵母表达载体pYTV上,转化大肠杆菌,然后再转化酵母菌PEP4。Western印迹分析表明外源OsGSTL... OsGSTL1是位于水稻3号染色体上的一个λ类谷胱甘肽转移酶基因,由8个内含子和9个外显子组成,编码一个由243个氨基酸组成的多肽链。将OsGSTL1克隆到酵母表达载体pYTV上,转化大肠杆菌,然后再转化酵母菌PEP4。Western印迹分析表明外源OsGSTL1基因在转基因酵母中表达,分析半乳糖诱导表达的酵母粗提液的谷胱甘肽转移酶活性表明:转基因酵母的谷胱甘肽转移酶较非转基因酵母和未诱导的酵母高,说明OsGSTL1在转基因酵母中受半乳糖的诱导表达,具有谷胱甘肽转移酶活性。 展开更多
关键词 谷胱甘肽转移酶 水稻 western印迹分析 GST活性
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鸭茅斑驳病毒CP基因克隆、序列分析及原核表达 被引量:1
16
作者 董志 张海龙 张飞云 《自然科学进展》 北大核心 2007年第1期127-131,共5页
通过RT-PCR技术从鸭茅斑驳病毒(CfMV)总RNA中获得了外被蛋白(CP)基因,并将其连接到含有编码GST基因的表达载体pGEX-4T-1后,得到重组质粒pGEXCfMV-JANCP,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLys后,用IPTG诱导其基因表达,表达产物经SDS-PAGE和Western ... 通过RT-PCR技术从鸭茅斑驳病毒(CfMV)总RNA中获得了外被蛋白(CP)基因,并将其连接到含有编码GST基因的表达载体pGEX-4T-1后,得到重组质粒pGEXCfMV-JANCP,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLys后,用IPTG诱导其基因表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析后证明:CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,获得的融合蛋白分子质量约为56.0 ku. 展开更多
关键词 鸭茅斑驳病毒 序列分析 原核表达 western印迹
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弓形虫不同分离株致密颗粒蛋白基因的序列分析及其在大肠埃希菌中的表达 被引量:3
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作者 郑斌 郑焕钦 +4 位作者 何蔼 李卓雅 曹爱莲 张瑞琳 詹希美 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期100-105,共6页
目的分析弓形虫不同分离株致密颗粒蛋白7(densegranuleprotein,GRA7)基因的异同及在大肠埃希菌中表达致密颗粒蛋白。方法从弓形虫不同分离株(RH株、ZS2株和GT株)的基因组中特异地扩增出GRA7基因,将目的基因定向克隆至原核表达载体pGEX-4... 目的分析弓形虫不同分离株致密颗粒蛋白7(densegranuleprotein,GRA7)基因的异同及在大肠埃希菌中表达致密颗粒蛋白。方法从弓形虫不同分离株(RH株、ZS2株和GT株)的基因组中特异地扩增出GRA7基因,将目的基因定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,转化大肠埃希菌JM109并测序。利用互联网上的在线工具CLUSTALW进行序列分析。异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)体外诱导pGEX-4T-1/GRA7重组质粒菌的表达,对表达的目的蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),分别以抗抗谷胱甘肽巯基转移酶(GST)抗体、人抗弓形虫阳性血清为一抗进行Westernblotting分析。以纯化的重组蛋白作为包被抗原,ELISA法检测抗弓形虫阴性、阳性血清。结果弓形虫不同分离株GRA7的基因序列相同;pGEX-4T-1/GRA7重组质粒在大肠埃希菌中表达了目的蛋白,Westernblotting分析表明该蛋白为GST融合蛋白,且能被人抗弓形虫阳性血清所识别;ELISA结果表明该蛋白能与人抗弓形虫阳性血清、兔抗弓形虫阳性血清特异结合,而与抗弓形虫阴性血清无反应。结论弓形虫不同分离株GRA7基因具有高度保守性;GRA7基因在大肠埃希菌中以GST融合蛋白的形式得到表达,且该重组蛋白具有一定免疫反应性。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 弓形虫 分离株 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 蛋白基因 blotting western GST融合蛋白 分析 GRA7基因 谷胱甘肽巯基转移酶 ELISA法检测 致密颗粒蛋白 protein 阳性血清 原核表达载体 重组质粒 重组蛋白
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利用鱼抗血清及鼠抗血清分析鱼肠道弧菌全菌蛋白抗原性 被引量:2
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作者 张铭伟 唐小千 +2 位作者 绳秀珍 邢婧 战文斌 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期24-31,共8页
从患腹水症牙鲆脾脏组织中分离得到一株优势菌株CD86,经人工感染实验证实菌株CD86对牙鲆有较高的致病力,其半致死浓度为1.8×105 CFU/尾。通过生理生化特征测定和16SrDNA基因序列分析,判定菌株CD86为鱼肠道弧菌(Vibrio ichthyoente... 从患腹水症牙鲆脾脏组织中分离得到一株优势菌株CD86,经人工感染实验证实菌株CD86对牙鲆有较高的致病力,其半致死浓度为1.8×105 CFU/尾。通过生理生化特征测定和16SrDNA基因序列分析,判定菌株CD86为鱼肠道弧菌(Vibrio ichthyoenteri)。以福尔马林灭活的菌株CD86全菌分别免疫健康的小鼠和牙鲆,ELISA测定鼠抗血清和牙鲆抗血清效价分别为12 800和1 200。利用间接免疫荧光技术检测2种抗血清与菌株CD86的结合活性,结果显示,2种血清均可同菌体发生阳性反应,其中鼠抗血清阳性反应信号明显强于鱼抗血清。同时,利用Western blotting分析了菌株CD86全菌蛋白的抗原性,结果显示分子量为27、30和37kDa的菌体蛋白条带与2种血清均发生阳性反应;分子量为19、25、28、29和35kDa的菌体蛋白条带仅与鼠抗血清发生阳性反应;分子量为45kDa的菌体蛋白条带只与鱼抗血清发生阳性反应。研究结果表明,牙鲆对菌体抗原产生的抗体应答与小鼠存在明显差异,该发现对研筛鱼用高效的鱼肠道弧菌亚单位疫苗具有重要的参考价值。 展开更多
关键词 鱼肠道弧菌 分离鉴定 ELISA western BLOTTING 抗原性分析 抗血清
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对虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白VP110部分重组表达及其与对虾鳃细胞膜蛋白结合分析
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作者 张平 李晨 +3 位作者 黄倢 梁艳 刘庆慧 刘莉 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2014年第2期66-73,共8页
将VP110基因的部分序列克隆到pET-28a载体中构建pET28a-vp110b重组质粒并进行原核表达,获得重组表达的蛋白rVP110-B;用rVP110-B注射凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei后,经WSSV感染,实验表明,该蛋白注射使凡纳滨对虾感染WSSV的半数死亡时... 将VP110基因的部分序列克隆到pET-28a载体中构建pET28a-vp110b重组质粒并进行原核表达,获得重组表达的蛋白rVP110-B;用rVP110-B注射凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei后,经WSSV感染,实验表明,该蛋白注射使凡纳滨对虾感染WSSV的半数死亡时间比对照组延长了20%。用表达纯化的该重组蛋白制备了兔抗rVP110-B多克隆抗体,该抗体用于凡纳滨对虾鳃细胞膜蛋白与rVP110-B的Far-western分析显示,凡纳滨对虾鳃细胞膜蛋白中除90 kDa左右的血蓝蛋白外,在41.7 kDa存在结合条带,经质谱分析表明这条鳃细胞膜蛋白是肌动蛋白。 展开更多
关键词 WSSV VP110 原核表达 凡纳滨对虾鳃细胞膜蛋白 far-western
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水貂IgG Fc段基因及抗原性分析
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作者 蒋磊 赵翠 +3 位作者 沈强 郭浩 王秋菊 常维山 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第2期78-82,共5页
根据GenBank上发布的水貂IgG中Fc段的序列(L07789.1),设计合成1对引物用于扩增水貂Fc段基因。从水貂脾脏中提取总RNA,RT-PCR扩增水貂Fc段基因,获得大小约606 bp的片段,将其连接T载体并测序。然后进行遗传进化分析,在此基础上利用Western... 根据GenBank上发布的水貂IgG中Fc段的序列(L07789.1),设计合成1对引物用于扩增水貂Fc段基因。从水貂脾脏中提取总RNA,RT-PCR扩增水貂Fc段基因,获得大小约606 bp的片段,将其连接T载体并测序。然后进行遗传进化分析,在此基础上利用Western blot进行抗体杂交试验。结果显示水貂IgG Fc与Fc犬核苷酸序列同源性为85.0%,氨基酸序列同源性为80.5%。Western blot显示水貂IgG重链可以和抗犬IgG有效结合,遗传进化分析得出哺乳动物中水貂与犬IgG Fc的亲缘关系最近。通过以上分析和相关文献得出用犬的诊断试剂可以检测水貂疾病,或用犬的抗血清进行水貂疾病治疗。 展开更多
关键词 水貂 IGG Fc基因 遗传进化分析 western BLOT
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