肠道菌群介导次级胆汁酸及其受体调节肠黏膜免疫机制的研究进展

胆汁酸是一种胆固醇衍生物,对提高每日膳食中脂肪的消化与吸收率具有显著功效。在肝内,细胞利用胆固醇形成初级胆汁酸,初级胆汁酸在肠道菌群产生的蛋白酶的影响下产生次级胆汁酸,极大地扩大了肠道环境的分子多样性。目前最常见的次级胆汁酸受体为跨膜G蛋白胆汁酸偶联受体-5(GPBAR1,也被称为TGR5)和核受体法尼类X受体(FXR),在调节机体健康中起着多效性作用,特别是可以维持肠道菌群稳态和黏膜免疫系统平衡。本综述讨论了胆汁酸与肠道菌群的关系、次级胆汁酸的代谢以及次级胆汁酸及其受体在肠道免疫系统中的不同作用机制,可为肠道菌群在动物肠道疾病的防治以及相关研究等方面提供理论基础。

鹅去氧胆酸通过FXR调控高脂饮食诱导小鼠肠道GLP-1表达水平改善胰岛素抵抗的作用

目的 探究鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid, CDCA)通过FXR对高脂饮食诱导小鼠肠道GLP-1表达水平的影响及相关机制。方法 C57BL/6小鼠40只分为对照组(Control组)、高脂饮食组(HFD组)、HFD+CDCA组、HFD+Z-Gug(FXR拮抗剂)组、HFD+CDCA+Z-Gug组,每组8只。干预8周,期间每周检测体质量及24 h摄食量。第8周进行口服葡萄糖耐量实验(OGTT)、腹腔葡萄糖耐量实验(IPGTT)。小鼠处死后,检测血清学指标GLu、TG、CHO、LDL-C、HDL-C;免疫荧光检测小鼠肠道组织GLP-1及FXR表达水平;RT-qPCR检测炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β、Gcg及FXR mRNA表达;ELISA试剂盒检测血清GLP-1含量;流式细胞术检测小肠IELs亚群比例及CD26/DPP4表达水平。结果 与Control组相比,HFD组小鼠体质量增加,血清糖脂代谢异常,口服糖耐量受损,胃肠激素分泌减弱(P<0.05);FXR mRNA及蛋白表达水平增加,Gcg mRNA表达及GLP-1分泌水平下降(P<0.05);肠道炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA表达水平升高(P<0.05);TCRαβ+IELs、TCRαβ+CD8αα+IELs与TCRαβ+CD8αβ+IELs细胞比例增加,TCRγδ+IELs比例下降,IELs总CD26/DPP4表达增加(P<0.05)。与HFD组相比,HFD+CDCA组小鼠体质量增加,口服糖耐量异常,胃肠激素分泌减弱(P<0.05);肠组织FXR mRNA及蛋白表达增加,Gcg mRNA表达及GLP-1分泌降低(P<0.05);肠道炎性因子表达降低,TCRαβ+IELs、TCRαβ+CD8αα+IELs与TCRαβ+CD8αβ+IELs细胞比例下降,TCRγδ+IELs占IELs比例升高,IELs总CD26/DPP4表达升高(P<0.05),以上作用在加入FXR拮抗剂Z-Gug后被明显抑制(P<0.05)。结论 CDCA可能通过激活FXR受体抑制肠道组织GLP-1表达,减少GLP-1分泌;同时可能抑制相关炎症因子表达调节IELs亚群比例,上调CD26/DPP4表达水平,促进GLP-1降解,加重胰岛素抵抗。

猪去氧胆酸对脂肪变性肝细胞活性的影响及其机制

目的探讨猪去氧胆酸(HDCA)在代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)发展中的作用及机制,为进一步阐明MAFLD的发病机制提供新的理论依据。方法L02肝细胞作为实验细胞,利用棕榈酸诱导L02细胞发生脂肪变性。采用FXR siRNA干扰链技术,构建FXR低表达的肝细胞株。CCK8实验检测HDCA在不同浓度(0、100、200、300、400μmol/L)和时间(12、24、36、48 h)对L02脂肪变性肝细胞的影响。通过qRT-PCR检测法尼醇X受体(FXR)、增殖细胞核抗原(PCNA)、周期蛋白D1(Cyclin D1)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)mRNA表达;Western Blot检测FXR、Cyclin D1、PCNA、PI3K、pPI3K、AKT和p-AKT蛋白表达。计量资料服从正态分布且方差齐时多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Tukey HSD检验;服从正态分布但方差不齐时采用Welch方差分析,进一步两两比较采用Games-Howell检验。两组间比较采用成组t检验。结果CCK8检测结果显示,300μmol/L HDCA处理的L02细胞和脂肪变性肝细胞活性明显下降(P值均<0.05);qRT-PCR检测结果显示,FXR mRNA表达增强,PCNA、Cyclin D1、PI3K、AKT的mRNA表达下降,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。Western Blot检测结果显示,FXR蛋白表达明显上升(P<0.05);干扰L02细胞FXR的表达后,PCNA、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT的蛋白表达均明显增加(P值均<0.05)。结论HDCA通过上调FXR表达抑制PI3K/AKT信号通路,从而造成脂肪变性肝细胞活性下降。

糖宁孜亚比土斯片基于高糖人结直肠腺癌细胞模型对小克里斯滕森菌-TαMCA-FXR/TGR5轴的调控作用

目的探讨糖宁孜亚比土斯片(TZT)基于高糖人结直肠腺癌细胞模型对小克里斯滕森菌科-牛磺-α鼠胆酸钠盐(TαMCA)-法尼醇X受体(FXR)/G蛋白偶联受体5轴的调控作用。方法配制菌株液体培养基、高糖培养基、TZT溶液、TαMCA溶液,培养菌株,制备灭活小克里斯滕森菌及其发酵液,常规培养人结直肠腺癌细胞(Caco-2细胞)。取部分细胞随机分为对照组、灭活菌体组、106 CFU/mL活菌组、10^(7)CFU/mL活菌组、10^(8)CFU/mL活菌组、10^(9)CFU/mL活菌组,对照组用无菌Caco-2专用培养基培养,灭活菌体组用灭活小克里斯滕森菌菌体悬液干预,106 CFU/mL活菌组、10^(7)CFU/mL活菌组、10^(8)CFU/mL活菌组、10^(9)CFU/mL活菌组分别在含有完全分化的Caco-2细胞培养板孔中加入2 mL 10^(9)CFU、10^(8)CFU、10^(7)CFU、10^(6)CFU的小克里斯滕森菌活菌干预。取部分细胞随机分为对照组、发酵培养液组,对照组用无菌Caco-2专用培养基培养,发酵培养液组用小克里斯滕森菌发酵液干预。取部分细胞随机分为对照组、高糖组及TZT低、中、中高、高剂量组,除对照组外其他各组加入8 g/L高糖培养基干预24 h,TZT低、中、中高、高剂量组分别加入10、25、50、100μg/mL的TZT含药培养基干预24 h。取部分细胞随机分为对照组、25μmol/L TαMCA组、50μmol/L TαMCA组,后两组换入25、50μmol/L的含TαMCA培养基干预24 h。实时荧光定量PCR法检测FXR、TGR5、IL-8、IL-10 mRNA,Western blotting法检测FXR、TGR5蛋白。结果与对照组比较,10^(6)CFU/mL活菌组、10^(7)CFU/mL活菌组、10^(8)CFU/mL活菌组、10^(9)CFU/mL活菌组TGR5 mRNA表达高(P均<0.05),FXR、IL-8、IL-10 mRNA表达差异无统计学意义(P均>0.05)。与对照组比较,菌发酵液组FXR mRNA表达高(P均<0.05),TGR5 mRNA表达差异无统计学意义(P均>0.05)。与对照组比较,高糖组FXR mRNA表达高(P<0.05),TGR5 mRNA表达低(P<0.05),FXR、TGR5蛋白表达差异无统计学意义(P均>0.05)。与高糖组比较,各TZT组FXR mRNA表达低(P均<0.05),TGR5 mRNA表达高(P均<0.05),FXR、TGR5蛋白表达差异无统计学意义(P均>0.05)。与对照组比较,25μmol/L TαMCA组FXR mRNA、蛋白表达低(P均<0.05),TGR5 mRNA、蛋白表达高(P均<0.05);50μmol/L TαMCA组FXR蛋白表达低(P<0.05)。结论小克里斯滕森菌具有一定的抗炎效果,TZT可能通过促进小克里斯滕森菌的生长,产生代谢产物影响胆汁酸代谢,促进TαMCA肠道内累积,进一步抑制肠FXR表达,促进TGR5表达。

法尼醇X受体在治疗胆汁淤积性肝病中的作用机制和药物研究进展

目的综述法尼醇X受体(FXR)在治疗胆汁淤积性肝病中的作用机制及以FXR为靶点的药物研究进展。方法对FXR通过调控胆汁酸的生成、代谢、转运以及肠肝循环等方式改善胆汁淤积的机制进行阐述,对FXR具有的抗炎、抗氧化和抗肝纤维化等作用和机制进行论述,对甾体和非甾体类FXR激动剂和FXR拮抗剂的治疗效果和临床试验进展进行综述。结果与结论胆汁淤积性肝病是以胆汁淤积为主要表现的一组临床常见疾病,其致病机制复杂,也一定程度上决定了用药的复杂性。核受体能调控胆汁酸体内平衡,是目前胆汁淤积治疗药物靶标的研究热点;FXR在保持胆汁酸平衡方面起着至关重要的作用,是一种生理性的胆汁酸核受体,被视为胆汁淤积和相关疾病的主要治疗靶点。随着对FXR研究的不断深入,发现其在胆汁酸稳态、抗炎、抗氧化、抗纤维化方面发挥核心调控作用,FXR激动剂和FXR拮抗剂不断被研发以治疗胆汁淤积性肝病。

基于FXR-FGF19通路研究益生菌对胆总管结石患者胆汁酸代谢的影响

背景:胆总管结石在取石术后有较高的复发率。近年研究表明肠道微生态失衡与胆固醇结石的形成有关。目的:探究益生菌干预对胆固醇结石高危人群血清脂多糖(LPS)以及胆汁酸代谢指标的影响。方法:选取2021年6月—2023年6月在石河子大学第一附属医院行ERCP取石术的胆总管结石患者60例,收集胆汁和粪便样本行细菌培养。将患者随机分为对照组和益生菌干预组,对照组取石术后予常规支持治疗,干预组在常规治疗的基础上服用双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊420 mg,每日2次,连续6个月。检测治疗前后革兰阴性菌细胞壁成分LPS、胆汁酸代谢关键分子成纤维细胞生长因子19(FGF19)和胆汁酸合成限速酶胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)血清水平的变化。结果:胆总管结石患者胆汁、粪便细菌培养显示主要致病菌为大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。ERCP取石术后6个月,患者血清LPS、FGF19水平明显降低,CYP7A1水平明显升高(P均<0.05),益生菌干预组数据变化较对照组更为显著(P均<0.05)。结论:口服益生菌制剂可降低胆固醇结石高危人群的血清LPS水平,同时调节胆汁酸经肠肝循环代谢的经典通路法尼酯X受体(FXR)-FGF19通路,从而减少胆汁中的胆固醇过饱和,降低胆固醇结石的形成概率。

小檗碱对糖尿病肾病小鼠肾脏中FXR和SHP表达的影响

目的 基于转录组学探究小檗碱(berberine,BBR)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠的改善作用及其潜在机制。方法 8周龄db/db小鼠随机分为模型组(DN组)、BBR 50 mg·kg^(-1)组(BBR-L组)、BBR 100 mg·kg^(-1)组(BBR-H组)和恩格列净10 mg·kg^(-1)组(EMPA组);同时以同龄db/m小鼠作为对照组(NC组),每组8只,灌胃1次/d,连续8周。给药结束后,采集血清、尿液和肾脏样本,评估肾功能指标并观察肾脏病理变化。通过转录组学检测各组小鼠肾组织差异表达基因(DEGs),并进行KEGG和GO富集分析。最后,利用分子对接、分子动力学模拟、Western blot和免疫组化验证潜在靶点。结果 BBR和EMPA均明显降低DN小鼠的空腹血糖水平,改善肾功能,减轻肾损伤和纤维化。与NC组相比,DN组共有855个DEGs;与DN组相比,BBR-H组共有194个DEGs。KEGG富集分析表明,BBR治疗DN的作用机制主要与1型糖尿病和胆汁分泌等信号通路有关。分子对接结果表明BBR与FXR具有强烈的结合活性,与SHP具有较好的结合活性。分子动力学模拟结果与分子对接结果基本一致。与NC组比,DN组FXR和SHP蛋白表达明显降低;而与DN组相比,BBR组FXR和SHP蛋白表达明显升高。结论 BBR可能通过上调FXR、SHP的表达调控胆汁酸和脂质稳态,减轻DN引起的肾脏损伤。

核受体FXR调控内质网应激途径缓解小鼠溃疡性结肠炎病理损伤

目的 探究法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)激活对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型小鼠结肠组织病理损伤的影响及其作用机制。方法 将40只C57BL/6雄性健康小鼠随机分为对照组、模型组、奥贝胆酸(obeticholic acid,OCA)组、奥贝胆酸+衣霉素(OCA+TM)组,记录各组小鼠体质量、粪便性状与隐血程度、疾病活动指数(disease activity index,DAI)、剥离结肠长度。ELISA法检测各组小鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量,HE染色观察各组小鼠结肠组织病理形态变化,免疫组化染色检测各组小鼠结肠组织中GRP78和CCAAT/CHOP阳性表达情况,RT-qPCR和Western blotting检测各组小鼠结肠组织中GRP78和CHOP在mRNA与蛋白水平上的表达变化。结果 与对照组比较,模型组小鼠DAI升高,结肠长度缩短,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量均增加,结肠组织发生明显损伤,可见广泛炎性细胞浸润,结肠组织中GRP78和CHOP阳性染色增强,GRP78和CHOP的mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均上调(P<0.05);与模型组比较,OCA组小鼠DAI降低,结肠长度增加,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量均减少,结肠组织损伤程度明显改善,未见炎性细胞浸润,结肠组织中GRP78和CHOP阳性染色减弱,且GRP78和CHOP的mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均下调(P<0.05);而与OCA组比较,OCA+TM组小鼠DAI升高而结肠长度缩短,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量也均增加,结肠组织损伤,表现出明显的溃疡现象,同时,结肠组织中GRP78和CHOP阳性染色增强,GRP78和CHOP的mRNA相对表达量与蛋白相对表达量也均上调(P<0.05)。结论 在UC小鼠模型中激活FXR能够有效缓解结肠组织病理损伤,该机制可能与调控内质网应激途径有关。

法尼醇X受体在肠道疾病中的研究进展

法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)是胆汁酸的受体之一,同时也是一种依赖配体转录因子,其在调控机体的胆汁酸稳态和免疫反应方面发挥着关键作用。FXR激活异常可使胆汁酸代谢紊乱和炎症途径失调,并可引发多种肠道疾病。本文概述了FXR在肠道疾病发病中的机制及FXR激动剂起到的作用,以期为这些疾病的临床诊治提供参考依据。

FXR激动剂在非酒精性脂肪性肝炎治疗中的研究进展

非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis,NASH),又称代谢性脂肪性肝炎,是病理变化与酒精性肝炎相似但无过量饮酒史的临床综合征,好发于中年特别是超重肥胖个体。非酒精性脂肪性肝炎与肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病、高脂血症等代谢紊乱关系密切,主要特征为肝细胞大泡性脂肪变伴肝细胞损伤和炎症,严重者可发展为肝硬化,但至今NASH尚无得到批准的治疗方案。在寻找有效的治疗方法时,解决代谢失调、炎症和抗纤维化的新策略不断涌现。法尼类X受体(Farnesoid X receptor,FXR)除了是胆汁酸代谢和肠肝循环的关键调节剂外,还参与调节代谢稳态,使其成为NASH中有吸引力的治疗靶点。本文综述了FXR激动剂对NASH治疗的研究进展。

高通量筛选研究茯砖茶对FXR模型的作用

将茯砖茶水提液分别用三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取,制得三氯甲烷层、乙酸乙酯层、正丁醇层及水层样品,茶渣用95%的乙醇提取,制得乙醇提取物,通过高通量药物筛选测定各样品对法尼酯衍生物X受体(FXR)模型的激活和抑制作用,研究茯砖茶的降脂减肥功效,结果显示茯砖茶各部份对FXR都有抑制作用,乙酸乙酯层样品激活作用较明显,从中分离制得儿茶素EGCG及ECG单体对FXR模型有很好的激活作用,证明茯砖茶有较强的降脂功能,有望开发成天然的降脂药物。茯砖茶中其他活性成分的分离有待进一步进行。

胆汁酸受体FXR的研究进展

法尼酯衍生物X受体 (FXR)是一种胆汁酸受体 ,在胆汁酸代谢和胆固醇代谢中发挥重要作用 ,并有望成为降低胆固醇 ,治疗某些心血管病及肝脏疾病的治疗靶点。本文介绍了FXR的发现、FXR在调控胆汁酸和脂质代谢中的作用 ,以及FXR在心血管疾病治疗中的应用前景。

FXR、CYP7A1在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用

目的分析法尼醇受体(FXR)及其靶基因胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)在妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahe-patic cholestasis of pregnancy,ICP)孕鼠肝脏的表达情况,探讨FXR与CYP7A1在ICP发病机制中的作用。方法用随机数字表法将30只孕15d的SD大鼠分成2组:生理盐水(NS)组和苯甲酸雌二醇(estradiol benzoate,EB)组,每组15只。用药前和用药后第5天分别测定血清中ALT、AST、ALP、TBA水平,同时观察肝脏形态学变化,并应用RT-PCR和Westernblot分别检测肝脏FXR、CYP7A1两者mRNA和蛋白的表达。结果EB组用药后各血清生化指标比用药前显著升高(P<0.01),NS组用药前后无明显变化(P>0.05);EB组孕鼠肝脏出现肝内胆汁淤积表现,NS组肝脏形态结构正常;EB组FXR和CYP7A1两者的mRNA和蛋白表达均显著高于NS组(P<0.01)。结论EB诱导的ICP孕鼠肝脏FXR及CYP7A1表达均增加,说明存在胆汁酸合成自身反馈调节障碍,导致胆汁酸合成增加,这可能是ICP发病机制之一。

激活类法尼醇X核内受体(FXR)可下调载脂蛋白M在HepG2细胞中的表达

类法尼醇X核内受体(farnesoid Xreceptor,FXR)和载脂蛋白M(ApoM)在动脉粥样硬化中发挥重要作用.为研究FXR激动剂鹅脱氧胆酸(chenodexycholic acid,CDCA)和拮抗剂Guggulsterones在人肝癌细胞株HepG2和人胎肝细胞株L02中对载脂蛋白M(apolipoprotein M,ApoM)表达的影响.本研究应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western印迹法检测CDCA和CDCA加Guggulsterones处理后HepG2和L02细胞中ApoM的mRNA水平和HepG2细胞中ApoM的蛋白水平.实验结果显示:FXR天然配体CDCA以剂量依赖的方式显著降低HepG2细胞中ApoM分子(mRNA和蛋白水平)的表达,L02细胞中ApoM分子mRNA水平的表达;FXR抑制剂Guggulsterones不仅能明显阻止CDCA对ApoM表达的下调,而且可引起ApoM表达显著增加.本研究提示,FXR抑制剂Guggulsterones在抗动脉粥样硬化过程中可能发挥重要作用.

法尼酯衍生物X受体基因多态性与2型糖尿病的相关性研究

目的2型糖尿病（type2diabetes，T2DM）的发病机制目前尚未阐明。文中旨在探讨法尼酯衍生物x受体（胁-nesoidXreceptor，FXR）基因多态性与华东汉族人群T2DM的相关性。方法连续收集2014年1月至2015年8月南京军区南京总医院健康体检中心的患者467例，T2DM患者240例（病例组），对照组227例。采用连接酶检测反应方法对FXR基因中11个单核苷酸多态性位点进行基因分型。利用非条件Logistic回归校正年龄、性别、吸烟、饮酒后，在不同遗传模式下分析各基因型与T2DM的相关性。结果OR值比较，rs1030454GG基因型发生T2DM的风险较AA型高2．78倍[GG：AA=3．78（1．56～11．15）：1．00，P=0．017]，GA＋GG较AA有增加T2DM发病风险的趋势[GA＋GG：AA=2．87（1．01—7．53）：1．00，P=0．049]。rsl0860598GA较AA能够降低T2DM发病风险[GA：AA=0．45（0．14～0．94）：1．00，P=0．025]，GA＋GG较AA有降低T2DM发病风险的趋势[0．52（0．25—0．95）：1．00，P=0．049]。rs11110411CT、CT＋CC较TT能降低T2DM发病风险（P=0．016、0．024）。rs17030270GA、GA＋GG较AAT2DM发病风险降低（P=0．018、0．032）。结论FXR基因多态性与华东汉族人群T2DM遗传易感性相关，FXR基因变异在T2DM发病过程中起作用。

鹅去氧胆酸对胆汁淤积孕鼠血生化指标、肝脏病理及胎鼠预后的影响

目的以熊去氧胆酸(UDCA)为对比,研究法尼醇X受体(FXR)激动剂——鹅去氧胆酸(CDCA)对妊娠期肝内胆汁淤积(ICP)孕鼠血生化指标、肝脏病理及胎鼠预后的影响。方法建立ICP孕鼠模型,将孕17d的SD大鼠40只随机分成对照组、ICP组、UDCA组和CDCA组。比色法检测用药前后各组丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP)和总胆酸(TBA)水平,光镜下观察孕鼠肝脏病理学变化,记录胎鼠身长、尾长、体重及死胎数。结果ICP组ALT、AST、ALP、TBA明显高于对照组(P<0.008 3);与ICP组比较,UDCA组ALT、AST、ALP明显降低(P<0.008 3),但TBA无明显改善(P>0.008 3);CDCA组ALT、AST、ALP无明显改善(P>0.008 3),但TBA显著降低(P<0.008 3);2治疗组胎鼠的身长、尾长、体重及死亡率与ICP组比较均无统计学差异(P>0.008 3)。光镜下见ICP组肝细胞肿胀变性,肝血窦变窄,胆管扩张;UDCA组肝细胞脂肪变性明显,小叶结构正常;CDCA组小部分肝细胞脂肪变性,小叶结构正常。结论UDCA能改善ICP孕鼠肝功能指标,但不能有效降低血胆汁酸水平及胎鼠死亡率;CDCA能明显降低胆汁酸,促进胆汁酸代谢,但其安全性还有待确定。

HNF1α对人FXR启动子的调控作用

为探讨肝细胞核因子1α(HNF1α)对人胆汁酸受体(FXR)转录激活的作用及机制,将含HNF1α的真核表达载体(pcDNA3·1(+)HNF1α)和含有FXR启动子的荧光素酶报告基因载体共转染人肝癌细胞系HepG2,检测转染细胞中荧光素酶活性并用半定量RT-PCR、免疫印迹法检测FXR的表达.QuikChange法对FXR启动子HNF1α可能结合位点进行突变,将包含突变点的重组荧光素酶报告质粒单独或与pcDNA3.1(+)共同转染HepG2细胞,检测各组荧光素酶活性.根据凝胶电泳迁移率变化,分析HNF1α与FXR启动子区域的结合.结果发现,转染pcDNA3.1(+)HNF1α可以上调FXR在HepG2细胞中的表达,并增强FXR启动子活性且具有剂量依赖性;-65^-48区域的点突变,导致FXR启动子活性明显降低,共转染pcDNA3.1(+)HNF1α也不具有增强作用.结果提示,转录因子HNF1α能调控FXR基因表达,其机制为:HNF1α与FXR启动子区域-65^-48区域的反向半位点结合,发挥其反式激活作用.

小鼠MCP-1基因启动子的克隆及核受体FXR下调其活性初步分析

目的小鼠单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)启动子的克隆及其活性分析。方法从小鼠巨噬细胞株ANA-1中分别扩增一长一短2个小鼠MCP-1启动子片段,并克隆入虫荧光素酶报告基因载体中。2个不同长度的MCP-1启动子片段重组报告基因质粒分别与类法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)真核表达质粒共转染HEK293细胞中,经鹅脱氧胆汁酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)处理后,检测荧光素酶活性。结果小鼠MCP-1启动子报告基因载体构建成功。经CDCA处理后,转染FXR表达质粒可下调2个不同长度的MCP-1启动子活性,且下调幅度相当。结论激活FXR可能通过小鼠MCP-1基因启动子-322～+82 bp区域FXR负性结合元件而下调该基因转录活性。

梗阻性黄疸大鼠肝细胞MRP2和FXR蛋白表达变化及意义分析

目的通过建立梗阻性黄疸动物模型,在蛋白水平观察多耐药相关蛋白MRP2(mu ltidrug resistance-assoc iated prote in2,MRP2)和类法尼醇X受体FXR(farnesoid X receptor)表达变化并分析二者之间的关系。方法用胆总管结扎术方法制备大鼠梗阻性黄疸模型,检测肝功能;提取大鼠肝细胞膜蛋白与核蛋白,测定提取液蛋白浓度;采用W estern b lot技术检测MRP2和FXR蛋白表达。结果梗阻性黄疸大鼠总胆红素、直接胆红素显著升高;与假手术对照组相比,梗阻性黄疸组大鼠肝细胞MRP2蛋白表达明显降低(P=0.041),FXR蛋白无表达,差异均有统计学意义。结论MRP2表达下调可能与FXR表达抑制有关,FXR蛋白可能对MRP2蛋白表达有正性调控作用。

阻塞性黄疸大鼠肝脏中法尼酯衍生物X受体的表达及CDCA对其影响

目的探讨应用鹅脱氧胆酸(CDCA)治疗胆汁淤积性疾病的可行性。方法取4周龄健康雄性SD大鼠72只,随机将其中48只大鼠的胆总管在十二指肠上方双重结扎后剪断然后缝合关腹,建立胆道阻塞大鼠动物模型。另外24只大鼠仅游离胆总管但并不结扎,然后缝合关腹作为对照组。观察大鼠胆管阻塞1d、3d、7d和14d四个时段的肝脏组织形态学改变,并检测这四个不同时段的大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TB)和总胆汁酸(TBA)等血液生化指标;通过免疫组化方法观察大鼠胆管阻塞不同时段的法尼酯衍生物X受体(FXR)表达变化,同时利用上述方法研究CDCA在大鼠胆管阻塞进程中的作用。结果大鼠胆管阻塞后,肝内胆管扩张,纤维组织增生,但14d后症状有所缓解;随大鼠胆管阻塞时间延长,血清中ALT、TB和TBA明显升高。第7天达到峰值,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),第14天时均明显下降;CDCA可不同程度的降低大鼠血清中ALT、TB和TBA的水平。另外,随大鼠胆管阻塞时间的延长,FXR表达上调,第7天最为明显。CDCA治疗可明显减轻大鼠胆管阻塞后所致的肝脏损伤,CDCA可抑制FXR的表达上调。结论胆管阻塞可导致肝损伤和肝纤维化,其程度和血清中的ALT水平呈密切相关。胆道阻塞时,胆汁酸浓度的上升刺激FXR表达上调,并随阻塞时间延长,FXR蛋白表达增高相对缓慢。FXR的激动剂——CDCA可减轻胆道阻塞后大鼠肝脏损害。