五味子乙素对H_2O_2损伤人肝细胞Fas通路的影响

目的建立H2O2诱导氧化的L02人肝细胞模型,从细胞凋亡调控因子FAS、具有死亡功能区的Fas相关蛋白（fas associateddeath domain protein,FADD）和Caspase-8的表达变化来研究五味子乙素（Sch B）对L02细胞的可能作用机制。方法用实时荧光定量PCR法检测FAS、FADD和Caspase-8 mRNA的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测FAS蛋白含量,Westernblotting检测FADD蛋白变化和分光光度法检测Caspase-8活性。结果在5~15μmol/L剂量范围内,Sch B可剂量依赖性抑制H2O2引起的FAS、FADD的表达和Caspase-8的活化。结论 Sch B可部分抑制H2O2诱导的L02细胞凋亡,其作用机制可能是通过影响了FAS-FADD-Caspase-8通路。

雌激素抑制Fas相关死亡结构域蛋白保护缺血性脑损伤

目的:研究缺血性皮质Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)mRNA和蛋白表达,以探讨雌激素神经保护作用的分子机制。方法:研制卵巢切除小鼠雌激素替代模型;一侧大脑中动脉线栓(MCAO)小鼠模型;缺血2 h再灌6 h后取两侧大脑皮质,用RT-PCR、Western blot等方法观察其FADD mRNA和蛋白水平、Caspase-3活性及其雌激素的影响。结果:①雌激素抑制缺血侧皮质升高的FADD mRNA[(49.67+0.68)%vs(67.36±0.2)%,P<0.01]和蛋白表达水平[(37.50±1.68)%vs(67.46+1.41)%,P<0.01],具有显著性统计学意义。②与正常侧相比,缺血侧皮质Caspase-3活性增强(45175±601vs35993±643,P<0.01),雌激素抑制其活性(39 556±432vs45 175±601,P<0.05)。结论:雌激素可部分抑制FADD保护缺血性脑损伤。

阿霉素诱导Jurkat白血病细胞凋亡及上调Fas配体和Fas相关死亡域(英文)

目的研究阿霉素诱导白血病细胞凋亡的剂量及时间关系,探索其相关的分子机制。方法分别以0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L的阿霉素处理人类Jurkat白血病细胞61、22、44、8 h。其中一份样本在加入0.2 mg/L阿霉素前用zVAD-fmk(苄氧羰-缬氨酰-丙氨酰-天冬氨酰-氟甲基酮)预处理。应用AnV/PI双染细胞,在流式细胞仪上分析AnV/PI双阳性的凋亡细胞。采用Western Blot技术检测FasL和FADD(Fas相关死亡域)的表达。结果6 h时所有剂量的阿霉素诱导的凋亡细胞无显著差异(P>0.05),在12 h,只有1.0 mg/L诱导细胞明显凋亡。当细胞与0.2和0.5 mg/L的阿霉素共同培养24 h或36 h,观察到调亡细胞显著增加(P<0.001)。在zVAD-fmk存在的情况下,当细胞与阿霉素一同培养时,由阿霉素诱导的细胞凋亡完全受到抑制(P<0.001)。随着阿霉素作用时间增加,FasL和FADD表达水平相应增加。结论在阿霉素诱导的白血病细胞凋亡中,阿霉素以剂量和时间依赖方式诱导细胞凋亡;上调FasL可能启动FasL信号通路的激话,而caspase是最终的执行者。

稽留流产绒毛组织中Fas相关死亡结构域蛋白和Livin的表达

目的:探讨稽留流产绒毛组织中Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)及凋亡抑制蛋白家族成员Livin的表达。方法:采用免疫组化和RT-PCR方法检测30例稽留流产患者绒毛组织中FADD及Livin蛋白和mRNA的表达,并以30例正常早孕绒毛组织作对照。结果:稽留流产绒毛组织中FADD蛋白阳性表达率和mRNA相对表达量均高于对照组(86.7%vs60.0%,χ2=5.455,P=0.020;(1.195±0.264)vs(0.685±0.274),t=7.221,P=0.002)。稽留流产绒毛组织中Livin蛋白阳性表达率和mRNA相对表达量均低于对照(63.3%vs90.0%,χ2=5.963,P=0.015;(0.933±0.188)vs(1.630±0.305),t=10.660,P<0.001)。结论:FADD过表达和Livin低表达诱导的滋养层细胞凋亡的增加可能参与了稽留流产的发生。

Fas相关死亡结构域蛋白荧光真核表达载体的构建及其鉴定

目的:构建真核表达载体pEGFP-N1-FADD并检测其在结肠癌细胞株SW480中的表达.方法:设计人FADD特异性引物,从人结肠癌细胞SW480细胞提取总RNA,通过RT-PCR方法获取人FADD全长cDNA,定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1.应用PCR、酶切和DNA测序进行鉴定,确认后转染人结肠癌细胞SW480.G418抗性筛选获得FADD稳定表达细胞克隆,应用Westernblot检测FADD的表达水平.结果:测序及酶切鉴定证明获得人全长FADD基因,FADD基因正确插入pEGFP-N1中,在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白在SW480细胞中的稳定表达,Westernblot检测结果显示稳定转染pEGFP-N1-FADD的细胞FADD表达水平增高,是未转染细胞的2.34倍.结论:成功构建真核表达载体pEGFP-N1-FADD,并且在SW480细胞中稳定表达.

rhEPO对视网膜缺血再灌注损伤大鼠视网膜神经细胞凋亡及Fas、FADD表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素（rhEPO）对视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）所致视网膜神经细胞凋亡的保护作用及机制。方法将52只Wistar大鼠随机分为对照组4只，不行特殊处理；模型组和观察组各24只，均通过前房穿刺加压法制成RIRI模型，并分别于缺血前24h腹腔注射生理盐水和rhEPo，于1～72h应用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记（TUNEL）法检测视网膜神经细胞凋亡，采用过氧化物酶标记的sP免疫组化方法检测Fas、Fas相关蛋白（FADD）表达。结果对照组未见细胞凋亡及Fas、FADD表达。观察组与模型组视网膜神经细胞凋亡及Fas、FADD表达均出现于再灌注后6h，24h达到高峰，48h开始下降，其中观察组细胞凋亡在12、24、48h明显低于模型组（P〈0．05），Fas、FADD表达在6、12、24h明显低于模型组（P〈0．05）。结论rhEPO可明显减轻RIRI所致大鼠视网膜神经细胞凋亡，可能机制为下调Fas、FADD表达。

Fas相关死亡结构域蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其与癌细胞凋亡的关系

目的研究Fas相关死亡结构域(FADD)蛋白在膀胱移行细胞癌(TCCB)中的表达,并探讨其与TCCB中癌细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化方法SP法检测68例TCCB及13例正常膀胱黏膜组织FADD蛋白表达。原位末端标记(TUNEL)法检测TCCB细胞的凋亡。结果正常膀胱黏膜FADD呈阳性表达,在TCCBⅠ级(G1)、Ⅱ级(G2)、Ⅲ级(G3)和浅表性(Tis～T1)、浸润性(T2～T4)肿瘤的阳性表达率分别为84.6%、48.3%、19.2%和65.6%、25.0%;FADD的阳性率在3组不同组织学分级的TCCB中差异有显著性意义(P<0.05),在两组不同临床分期的TCCB中差异有非常显著性意义(P<0.01),在复发组与未复发组分别为36.8%和53.3%,差异无显著性意义(P>0.05)。所有标本均可检测到细胞的凋亡,FADD蛋白表达水平与癌细胞凋亡程度呈显著正相关(rs=0.49,P<0.01)。结论FADD表达异常在TCCB的发展中可能起着重要作用,FADD表达水平与TCCB细胞凋亡密切相关。

替米沙坦对猪心动过速性心肌病心肌细胞Fas/FasL、FADD、Bcl-2/Bax、caspase-3蛋白的影响

目的 研究替米沙坦对猪心动过速性心肌病（tachycardiomyopathy,TCM）心肌细胞Fas/FasL、Fas相关死亡结构域（Fas-associated death domain,FADD）、Bcl-2/Bax、caspase-3蛋白的影响,探讨替米沙坦对心肌细胞的保护作用及其作用机制.方法 18头家猪随机分为3组（每组n=6）：快速右心房起搏组（TCM组）,实验猪植入永久起搏器,起搏频率500次/min;快速右心房起搏加替米沙坦组（TCM＋TS组）,起搏器植入前3天至起搏2周后,每日给予替米沙坦（1.5 mg·kg-1·d-1）混于饲料中喂服;对照组,实验猪未植入起搏器也未服药.每周记录1次心电图,实验前后经胸心脏超声观测猪左心室舒张末期内径（LVEDD）和左心室射血分数（LVEF）.2周后处死动物,取左心室组织,Western blot技术检测Fas/FasL、FADD、Bcl-2/Bax、caspase-3蛋白含量,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测fas、caspase-3 mRNA转录水平.结果 TCM组较对照组左心室心肌细胞Fas/FasL、FADD、Bcl-2/Bax、caspase-3蛋白表达量均明显增高（P〈0.05）,TCM＋TS组较TCM组Fas/FasL、FADD、Bcl-2/Bax、caspase-3蛋白表达量均明显降低（P〈0.05）.TCM组较对照组左心室心肌细胞fas及caspase-3 mRNA表达明显增高（P〈0.05）,TCM＋TS组较TCM组fas及caspase-3 mRNA表达明显降低（P〈0.05）.Fas与caspase-3蛋白表达呈明显正相关（r=0.987,P〈0.01）;fas与caspase-3 mRNA表达呈明显正相关（r=0.950,P〈0.01）.结论 替米沙坦通过抑制Fas/FasL通路相关蛋白的表达,进而减少细胞凋亡,延缓TCM病情进展.

膀胱尿路上皮癌Fas相关死亡结构域蛋白表达及意义

目的研究Fas相关死亡结构域(FADD)蛋白在膀胱尿路上皮癌(BUC)组织的表达,并探讨其与肿瘤生物学行为之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测68例BUC及13例正常膀胱黏膜组织FADD蛋白表达。原位杂交法检测其中34例BUC组织FADD mRNA表达水平。结果正常膀胱黏膜FADD蛋白呈阳性表达。FADD的阳性率在不同组织学分级、不同临床分期的BUC组织中差异均有极显著性(χ2=15.38、11.34,P<0.01);复发组与未复发组FADD的阳性率分别为36.84%和53.33%,差异无显著意义(2χ=1.85,P>0.05)。BUC组织中FADD mRNA阳性率为44.12%,FADD蛋白阳性率为47.06%,两者差异无统计学意义(χ2=0.06,P>0.05)。结论FADD表达异常在BUC的发展中可能起着重要作用,FADD阳性表达与BUC病理分级、浸润关系密切,但与BUC复发无关。

来氟米特对佐剂关节炎大鼠血清及滑膜Fas系统的影响

目的通过观察来氟米特(leflunomide,LEF)治疗前后佐剂关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠外周血T淋巴细胞及滑膜中Fas/Fas L水平的变化情况,了解LEF对AA大鼠外周血T淋巴细胞及滑膜细胞凋亡的影响。方法选用Wistar大鼠60只,随机分为5组:空白组,模型组,甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)治疗组(MTX组),LEF治疗组(LEF组),MTX+LEF治疗组(MTX+LEF组)。分别观察各组大鼠关节炎指数、血清Fas/Fas L水平,免疫组织化学方法检测滑膜组织Fas/Fas L表达。结果第60天各实验组大鼠关节炎指数下降,MTX组6.83±1.93 vs3.38±1.61(P<0.01);LEF组7.35±2.16 vs 3.25±1.17(P<0.01);MTX+LEF组7.21±1.82 vs 2.13±1.18(P<0.01),模型组无明显变化(7.12±1.67 vs 6.25±1.46,P>0.05)。各实验组治疗后血清Fas、Fas L水平下降,Fas,MTX组(55.3±7.5)%vs(27.3±6.8)%(P<0.01);LEF组(58.3±8.1)%vs(25.9±7.2)%(P<0.01);MTX+LEF组(54.6±7.4)%vs(18.2±4.9)%(P<0.01)。Fas L,MTX组(4.1±0.5)%vs(2.4±0.5)%(P<0.01);LEF组(3.7±0.6)%vs(2.5±0.4)%(P<0.01);MTX+LEF组(3.8±0.6)%vs(1.7±0.4)%(P<0.01),模型组无变化,Fas(57.1±7.9)%vs(64.2±8.4)%(P>0.05);Fas L(4.0±0.7)%vs(4.1±0.6)%(P>0.05),各实验组及模型组滑膜组织Fas蛋白表达的IRS积分较空白组均上调,MTX组(7.5±2.2)分vs(4.2±1.0)分(P<0.01);LEF组(7.7±2.1)分vs(4.2±1.0)分(P<0.01);MTX+LEF组(9.4±2.1)分vs(4.2±1.0)分(P<0.01);模型组(5.6±1.9)分vs(4.2±1.0)分(P<0.01)。各实验组滑膜组织Fas L蛋白表达较空白组均上调,MTX组(7.8±2.1)分vs(5.2±1.0)分(P<0.01);LEF组(7.9±1.8)分vs(5.2±1.0)分(P<0.01);MTX+LEF组(9.4±1.8)分vs(5.2±1.0)分(P<0.01),模型组下调(2.0±0.9)分vs(5.2±1.0)分(P<0.01)。结论LEF可以通过下调AA大鼠外周血淋巴细胞和关节滑膜Fas系统的表达来达到抗风湿作用。

Fas相关死亡结构域蛋白在乳腺癌中表达的临床病理研究

目的探讨Fas相关死亡结构域蛋白在乳腺癌中表达的临床病理特点。方法选择2013年2月~2017年2月我院收治的行乳腺肿瘤手术治疗患者的人体石蜡包埋组织标本148例,其中乳腺良性病变26例(A组),无淋巴结转移乳腺癌58例(B组),淋巴结转移乳腺癌64例(C组)。所有标本均实施免疫组化检查,分析Fas相关死亡结构域蛋白表达。结果 Fas相关死亡结构域蛋白表达于乳腺癌癌细胞胞浆内和乳腺良性病变上皮细胞内。B组中Fas相关死亡结构域蛋白表达较弱,染色范围较小,染色深度均较低;A组、C组中Fas相关死亡结构域蛋白表达较弱,染色深度强。A、B、C三组Fas相关死亡结构域蛋白阳性表达率分别为88.5%(23/26)、46.6%(27/58)、65.6%(42/64),A组高于B组、C组,差异有统计学意义(P<0.05)。在乳腺癌患者中,淋巴结转移、确诊年龄与Fas相关死亡结构域蛋白表达有关(P<0.05),但临床分期、组织学类型与Fas相关死亡结构域蛋白表达无关(P>0.05)。结论 Fas相关死亡结构域蛋白与乳腺癌淋巴结转移、确诊年龄有着密切的关系,但与临床分期、组织学类型无关,需引起高度关注。

Fas死亡结构域相关蛋白对颈动脉成形术后大鼠血管狭窄和平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨大鼠颈动脉成形术后,死亡域相关蛋白(death domain-associated protein,DAXX)对损伤后血管狭窄和平滑肌细胞增殖的影响及其机制。方法:将32只SD大鼠随机分为4组:假手术组、手术组、空转染组、转染组。所有动物暴露颈动脉,假手术组仅游离颈总动脉,手术组采用球囊扩张损伤大鼠左颈总动脉,空转染组及转染组在此基础上局部运用脂质体转染DAXX空质粒或DAXX质粒,于术后7,14 d分别取各组大鼠左颈总动脉行HE染色,观察并测量内膜、中膜的面积比;免疫组织化学和PCR检测平滑肌中DAXX及氨基末端激酶(Jun N-terminal kinase,JNK)的表达。结果:术后7,14 d手术组均出现血管管腔狭窄,管壁增厚,血管平滑肌细胞增殖明显(P<0.01);转染组管腔狭窄程度、平滑肌细胞数、血管内膜/中膜面积比值中较手术组明显降低(P<0.01)。手术组平滑肌细胞中DAXX及JNK的蛋白及m RNA表达较假手术组均有所增多(P<0.01),而转染组DAXX,JNK的表达上调程度更为显著(P<0.01)。结论:DAXX局部高表达能有效抑制球囊扩张术后大鼠颈动脉平滑肌细胞增殖,减轻血管狭窄,其作用机制可能与DAXX–JNK通路相关。

肺腺癌转移相关转录本1、Fas相关死亡结构域蛋白、雌激素相关受体α在乳腺癌中的表达及与患者临床分期和预后的关系

目的探讨肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)、Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)、雌激素相关受体α(ERRα)在乳腺癌中的表达及与患者临床分期和预后的关系。方法选取122例乳腺癌患者,取其乳腺癌组织及相应癌旁组织,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MALAT1的相对表达量,免疫组化法检测FADD、ERRα蛋白的表达情况。比较不同临床分期及预后乳腺癌患者乳腺癌组织中MALAT1、FADD、ERRα的表达情况。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估MALAT1、FADD、ERRα单独及联合检测对乳腺癌患者预后的预测价值。结果乳腺癌组织中MALAT1的相对表达量、ERRα阳性表达率均明显高于癌旁组织(P﹤0.01),FADD阳性表达率明显低于癌旁组织(P﹤0.01)。Ⅲ~Ⅳ期乳腺癌患者乳腺癌组织中MALAT1的相对表达量、ERRα阳性表达率均明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P﹤0.01),FADD阳性表达率明显低于Ⅰ~Ⅱ期患者(P﹤0.01)。随访1年,死亡23例,生存99例,生存率81.15%(99/122),死亡乳腺癌患者乳腺癌组织中MALAT1的相对表达量、ERRα阳性表达率均明显高于生存患者(P﹤0.01),FADD阳性表达率明显低于生存患者(P﹤0.01)。ROC曲线显示,MALAT1、FADD、ERRα联合检测预测乳腺癌患者预后的AUC为0.872(95%CI:0.813~0.941),高于各指标单独检测。结论MALAT1、FADD及ERRα在乳腺癌组织中异常表达,可能与患者临床分期、预后有关,上述因子联合检测对乳腺癌患者预后的评估价值较高。

基于TP53突变型胃癌患者DAXX表达特征的预后模型及其对临床结局的预测价值

目的分析TP53突变型胃癌(GC)患者死亡结构域相关蛋白(DAXX)表达特征并构建预后模型,评价该模型对GC患者预后的预测价值。方法收集癌症基因组图谱数据库中TP53野生型和突变型GC患者的DNA变异特征;收集2014年1月至2016年12月温州医科大学附属第一医院手术切除的GC标本,并通过免疫组化检测p53蛋白表达状态和DAXX的亚细胞定位。绘制生存曲线分析不同DAXX表达状态TP53突变型GC患者的生存差异。采用Cox比例风险回归模型评估TP53突变型GC患者DAXX细胞核表达水平及不同临床病理特征对患者预后的预测效能,建立可视化临床预后模型。结果GC患者的TP53突变主要集中于p53 DNA结合区域,且与肌联蛋白基因、低密度脂蛋白受体相关蛋白1B基因和丝聚蛋白基因的突变水平有关。与TP53野生型GC患者相比,TP53突变型GC患者DAXX的mRNA表达显著升高(P<0.05)。免疫组化分析结果显示,与TP53野生型GC患者相比,TP53突变型GC患者DAXX细胞质表达显著下降,细胞核表达显著升高,核质比显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。生存分析结果显示,在TP53突变型GC患者中,DAXX高表达,尤其是DAXX细胞核高表达提示预后良好。单因素和多因素Cox回归分析结果显示,年龄>67岁、肿瘤分期Ⅲ期、DAXX细胞核低表达是影响TP53突变型GC患者预后的独立危险因素(均P<0.10)。基于这3个指标建立的预后模型能准确预测TP53突变型GC患者的预后;模型一致性指数为0.740,显示出良好的预测效能。结论DAXX细胞核表达联合年龄、分期等临床病理特征,可较好地预测TP53突变型GC患者的预后。

死亡结构域相关蛋白的核-质定位对乳腺癌MCF-7细胞功能的影响

目的研究死亡结构域相关蛋白(death domain-associated protein,DAXX)在乳腺癌细胞MCF-7中的表达及核-质定位,并探讨这两者对MCF-7细胞功能的影响。方法通过构建LV-DAXX-RNAi-GFP干扰与LV-DAXX-GFP过表达慢病毒质粒,转染MCF-7细胞,敲低和过表达DAXX。采用核-质分离法与免疫荧光法验证DAXX在MCF-7细胞中的表达与核-质定位,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,MTT法检测细胞增殖情况。结果核-质分离法与免疫荧光法均证实DAXX主要定位在MCF-7细胞核,转染LV-DAXX-GFP慢病毒质粒主要上调了MCF-7细胞质内DAXX的表达,而转染LV-DAXX-RNAi-GFP慢病毒质粒则主要下调了DAXX在MCF-7细胞核内的表达;流式细胞术证实下调DAXX的核内表达可以使MCF-7细胞凋亡率上升,细胞增殖受抑,并将细胞阻滞在S期,而上调DAXX的细胞质内表达对MCF-7的细胞凋亡、细胞周期和细胞增殖均无显著影响。结论DAXX在乳腺癌MCF-7细胞中主要定位在细胞核,DAXX表达于细胞核或者细胞质可能对MCF-7细胞功能有着相反的作用。

中药淫羊藿苷逆转肝癌HepG2.2.15细胞恶性表型及诱导分化研究

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)诱导HepG2.2.15细胞分化凋亡的作用机制.方法:MTT法检测细胞增殖;流式细胞术(FACS)检测细胞周期分布;RT-PCR方法检测P27基因、FLIP基因mRNA表达水平的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测ICA处理后HepG2.2.15细胞凋亡的变化;电化学发光法和速率散射比浊法分别检测ICA处理后HepG2.2.15细胞上清液中甲胎蛋白(AFP)和转铁蛋白(Tf)水平变化.结果:ICA作用HepG2.2.15细胞增殖呈抑制作用,具有时间依赖性.ICA处理后,HepG2.2.15细胞周期各时相分布与对照组相比发生变化,G0/G1期升高,S期减小,与对照组相比有显著性差异(56.26±1.56%vs49.68±1.34%,19.95±1.24%vs28.02±1.03%;P<0.01).ICA分别上调HepG2.2.15细胞P27和下调FLIP基因mRNA的表达水平(0.78vs0.27,0.54vs0.90);HepG2.2.15细胞凋亡率增加,AFP下降,Tf水平升高,与对照组相比均有显著性意义(7.09%vs0.59%,156±46mg/Lvs285±58mg/L,152.1±26mg/Lvs67.1±24mg/L;P<0.05).结论:ICA可能通过升高G0/G1期,减少S期抑制HepG2.2.15细胞的增殖;上调P27mRNA和Tf水平,下调FLIPmRNA的表达和AFP合成的水平来诱导细胞分化.

人参皂苷Rg1对帕金森病模型小鼠黑质区FADD和FLIP表达的影响及其意义

目的:探讨人参皂苷Rg1对帕金森病(PD)模型小鼠黑质区凋亡信号蛋白Fas死亡结构域蛋白(FADD)、FADD样白细胞介素1-转化酶样抑制蛋白(FLIP)及Caspase-3表达的影响,阐明FADD和FLIP在PD发病机制中的作用及人参皂苷Rg1对多巴胺(DA)能神经元的保护作用。方法:45只C57BL/6N小鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rg1组,每组15只。模型组小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP),人参皂苷Rg1组小鼠注射MPTP前先注射人参皂苷Rg1,对照组小鼠腹腔注射生理盐水。观察各组小鼠行为学变化;采用免疫组织化学法和免疫蛋白印迹法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、FLIP、FADD及Caspase-3的表达。结果:与对照组比较,模型组小鼠出现典型PD症状,黑质区TH阳性细胞数明显减少(P<0.01),FADD、FLIP及Caspase-3阳性细胞数明显增加(P<0.01),胞浆染色深;FADD、FLIP及Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,人参皂苷Rg1组小鼠PD症状减轻,黑质区TH阳性细胞数明显增多(P<0.01),FADD、FLIP及Caspase-3阳性细胞数明显减少(P<0.01),胞浆染色浅;FADD、FLIP和Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.01)。FADD与Caspase-3阳性细胞数呈正相关关系(r=0.791,P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1可通过影响PD模型小鼠黑质区FADD和FLIP的表达对DA能神经元起到一定的保护作用。

双酚A对成年雄性小鼠的生殖毒性及其作用机制

目的:探讨双酚A(BPA)对成年小鼠睾丸组织的损伤作用,阐明BPA对动物机体的生殖毒性及其作用机制。方法:8周龄昆明小鼠40只随机分为对照组(玉米油)和低(100 mg·kg^(-1) BPA)、中(200mg·kg^(-1)BPA)、高(400mg·kg^(-1)BPA)剂量BPA组。灌胃染毒4周后,取小鼠睾丸组织,采用流式细胞术检测小鼠睾丸组织中细胞凋亡率;免疫组织化学法检测Fas和FADD蛋白表达情况。结果:与对照组比较,低剂量BPA组小鼠睾丸组织中细胞凋亡率、Fas和FADD阳性细胞表达率无明显变化(P>0.05);中和高剂量BPA组小鼠睾丸组织中细胞凋亡率、Fas和FADD阳性细胞表达率明显升高(P<0.05)。与低剂量BPA组比较,中和高剂量BPA组小鼠睾丸组织中细胞凋亡率、FAS和FADD阳性细胞表达率明显升高(P<0.05);与中剂量BPA组比较,高剂量BPA组小鼠睾丸组织中细胞凋亡率、FAS和FADD阳性细胞表达率明显升高(P<0.05)。中剂量BPA组细胞凋亡率与FAS、FADD阳性细胞表达率呈正相关关系(r=0.430,P<0.05;r=0.238,P<0.01),高剂量组细胞凋亡率与Fas、FADD阳性细胞表达率呈正相关关系(r=0.637,P<0.01;r=0.359,P<0.01)。结论:一定剂量BPA会导致小鼠睾丸组织中细胞凋亡率升高,凋亡调控基因Fas和FADD表达上调;BPA对小鼠睾丸组织有损伤作用,其生殖毒性与激活Fas死亡受体信号通路从而导致细胞过度凋亡有关。

活血通络组方对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能恢复及其抗凋亡机制研究

目的:探讨活血通络组方对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能恢复及其抗凋亡机制研究。方法:大脑中动脉闭塞再通法建立脑缺血再灌注模型,采用神经行为学评分评价神经功能的恢复,跳台法测试大鼠学习和记忆成绩,原位末端标记法检测凋亡神经元,用免疫组化法检测Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)、凋亡蛋白酶(caspase-8、caspase-3)阳性细胞数。结果:与模型组比较,活血通络组的学习和记忆成绩均优于模型组,神经功能损伤评分亦有明显降低,神经元凋亡指数(AI)、FADD、caspase-8、caspase-3阳性细胞数均显著减少。结论:FADD、caspase-8、caspase-3在脑缺血再灌注后细胞凋亡过程中发挥重要作用,活血通络组方能减轻脑缺血再灌注后神经功能损伤,其机制可能与抑制细胞凋亡死亡受体通路有关。

大骨节病死亡受体途径调节因子表达的组织学改变

目的观察大骨节病软骨组织中Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)和细胞FLICE抑制蛋白(c-FLIP)表达的变化,明确其在大骨节病软骨损伤中的作用。方法将依据大骨节病和骨关节病诊断标准收集的软骨分为大骨节病组(KBD)、骨关节病组(OA)和正常对照组。采用免疫组化染色法检测3组关节软骨的死亡受体调节因子FADD和c-FLIP表达变化,并在显微镜下计数和比较3组关节软骨不同层间阳性表达率的显著性差异。结果(1)KBD和OA组软骨[分别为(28.68±2.19)%和(35.40±2.34)%]中层FADD表达显著较正常组增高(F=16.245,P=0.000),而在表、深层3组间均无显著差异(P=0.206,P=0.761);(2)FADD在KBD软骨中表达以中层最高,为(28.68±5.38)%,其次为深层的(17.94±8.38)%;(3)KBD和OA软骨表层FLIP表达均显著低于正常组(F=5.929,P=0.018),而中层和深层与正常组间均无显著差异。结论 KBD软骨中层FADD显著上调,而软骨表层FLIP表达显著下调,表明死亡受体途径及其调节因子在大骨节病软骨损伤中具有重要作用。