β-苦茄碱通过Fas介导的死亡受体途径诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的探讨β-苦茄碱(Beta-solamarine,BSM)诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其对Fas介导的死亡受体途径相关蛋白的影响。方法将不同浓度的BSM对体外培养的乳腺癌MCF-7细胞进行干预。采用MTT法测定细胞增殖抑制率,细胞侵袭试验观察细胞侵袭能力,TUNEL法检测细胞凋亡情况,采用Western Blot对Fas、FADD、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP和PARP蛋白表达水平进行检测。结果BSM处理后的细胞组显示出了较高的抑制率、侵袭细胞数明显下降、细胞凋亡率显著增加,各BSM组的细胞抑制率、侵袭细胞数和凋亡率与正常对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.01)。Caspase-8抑制剂Z-IETD-FMK处理组的细胞凋亡率显著降低,相较于与BSM同剂量组,细胞凋亡率差异具有统计学意义(P<0.01)。在BSM的作用下,MCF-7细胞中Fas、FADD、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-3以及Cleaved PARP的表达水平显著提升,而PARP的表达水平下降明显,与正常对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论BSM在抑制MCF-7细胞的增殖、侵袭和促进细胞凋亡方面显示出显著效果,激活Fas介导的死亡受体途径可能是BSM诱导细胞凋亡的机制之一。

血清抗精子抗体阳性对青春期雄性大鼠睾丸组织及睾丸生殖细胞中Fas/Fas-L凋亡途径的影响

目的:通过人工免疫雄性大鼠获得抗精子抗体(AsAb)介导的血清AsAb阳性的免疫性不育大鼠动物模型,观察AsAb对青春期大鼠睾丸组织及睾丸生殖细胞中Fas/Fas-L凋亡途径的影响。方法:5周龄(青春期)雄性Wistar大鼠30只,其中10只处死,取精子制备精子悬液免疫大鼠,余20只动物随机分为实验组(10只)和对照组(10只),4周后摘取睾丸。光镜观察睾丸组织改变,免疫组化法检测Fas、Fas-L和Caspase-3蛋白的表达。结果:实验组睾丸组织切片呈凋亡样改变,实验组Fas、Fas-L及Caspase-3蛋白的OD值(176.97±4.58,187.52±7.76,157.65±7.38)较对照组(161.87±5.37,150.27±8.65,120.37±6.76)显著增高(P<0.01)。结论:同种精子免疫大鼠,可成功制作AsAb介导的免疫性不育模型;AsAb影响雄性大鼠的生育力,其机制可能与Fas/Fas-L凋亡途径中Fas、Fas-L和Caspase-3蛋白的表达升高有关。

黄芩苷对FM1肺炎小鼠肺组织细胞凋亡FAS/FAS-L系统的影响

目的研究黄芩苷对FM1肺炎小鼠肺组织细胞凋亡FAS/FAS-L系统的影响,探索黄芩苷抗流感病毒感染机制。方法制备小鼠甲型流感病毒性肺炎模型,通过死亡保护实验确定黄芩苷的最小有效浓度,TUNEL法观察小鼠肺组织细胞凋亡情况,RT-PCR技术检测肺组织FAS(CD95)、FAS-L(CD178)、Caspase-3 mRNA表达,Western blot方法测定肺组织FAS、FAS-L、Caspase-3蛋白表达。结果与模型组相比,黄芩苷187.5、375 mg.kg-1剂量均能明显降低肺组织细胞凋亡率,明显降低肺组织FAS、FAS-L及Caspase-3 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论黄芩苷能够明显抑制FM1肺炎小鼠肺组织细胞的凋亡,其可能通过影响细胞凋亡受体途径FAS/FAS-L系统而发挥抗流感病毒感染作用。

“肺气虚”大鼠模型肺、皮肤、大肠Fas、Fas-L表达相关性的实验研究

目的:在分子水平上探讨肺与皮肤、大肠之间的内在联系。方法:单纯烟熏法建立大鼠“肺气虚”病理模型,将20只大鼠随机分为正常对照组和病理模型组。采用免疫组化SP方法,分别检测Fas、Fsa-L在两组动物肺、皮肤和大肠组织中的表达水平,并进行比较。结果:“肺气虚”病理模型组的肺、皮肤、大肠组织中Fas、Fas-L与正常对照组比较明显增高,具有显著性差异(P<0.01)。结论:肺、皮肤、大肠三种组织中Fas、Fas-L的表达水平呈平行相关性,从分子水平上提示肺与皮肤、大肠之间可能存在着内在联系,证实了中医学“肺外合皮毛”及“肺与大肠相表里”的重要理论。

Fas,Fas-L和Caspase-3在增生性瘢痕中表达特征及其对瘢痕形成的影响

探讨Fas、Fas L和Caspase 3在增生性瘢痕和正常皮肤组织内的表达特征及其对瘢痕形成的影响。用免疫组化方法和常规病理技术检测这三种蛋白在 8例增生性瘢痕和 8例正常皮肤中的表达变化规律。结果发现 ,在正常皮肤中 ,Fas和Fas L主要分布于表皮细胞、部分成纤维细胞的胞浆和胞膜内 ,Caspase 3则定位于这些细胞的胞浆中。Fas和Fas L在增生性瘢痕的表皮基底层细胞内有少量分布 ,阳性细胞率显著降低(P <0 0 5 ) ;Caspase 3的阳性细胞率也明显降低 (P <0 0 5 ) ,在表皮角质形成细胞的胞浆内有轻微表达。提示增生性瘢痕的发生可能与Fas、Fas L和Caspase 3蛋白表达降低、由这三种蛋白介导的细胞凋亡受阻相关。

膀胱癌组织中凋亡相关基因fas及fas-L的表达及相互关系

目的 研究凋亡相关基因 fas及 fas- L在膀胱移行细胞癌 (TCC)组织中的表达 ,探讨其与 TCC生物学行为的关系及在 TCC发生、发展中相互作用 .方法 采用 S- P免疫组化法检测 5 6例 TCC及 10例正常膀胱组织 Fas及 Fas- L的表达 ,并与 TCC病理分级、临床分期及随访结果相比较 .结果 Fas及 Fas- L在 TCC中阳性表达率分别为 41.1%及5 7.1% ,与在正常膀胱组织表达率 80 .0 %及 0 %相比 ,有显著性差异 (P<0 .0 5 ) .Fas阳性表达率与肿瘤分级及分期无显著相关性 ,与肿瘤复发有关 (P<0 .0 5 ) .Fas- L阳性表达率与肿瘤分级、分期及复发密切相关 (P<0 .0 5 ) ,随恶性程度增加 ,其表达强度也增加 .Fas及 Fas- L的表达无显著相关性 (r C=- 0 .0 84) .结论 凋亡相关基因 fas及 fas- L 表达异常可能参与膀胱肿瘤发生和发展 .检测 fas及 fas- L

缺氧环境下大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡及Fas、Fas-L的表达

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)在缺氧环境下是否存在凋亡及Fas和Fas-L蛋白在MSCs凋亡时是否表达及与细胞凋亡的相关性。方法将接种的P3细胞置于94%N2、1%O2和5%CO2缺氧箱中37℃孵育,分别于0.5h、1h、2h、4h、6h、8h和12h取出进行缺口末端标记(TUNEL)计算细胞凋亡指数(ApoptoticIndex,AI)和透射电镜观察细胞超微结构的改变,用Fas和Fas-L免疫组化试剂盒检测Fas-L和Fas蛋白的表达。结果1.培养的骨髓单个核细胞CD29、CD71、CD44免疫细胞化学染色均阳性,CD34染色阴性,5-氮胞苷诱导后表达TnT,提示其为MSCs。2.MSCs在缺氧前、缺氧0.5、1、2、4、6、8和12h时AI分别为0.11±2.03%、15.4±3.19%、16.7±2.51%、16.9±0.25%、17.7±2.50%、18.3±3.15%、18.4±4.22%、19.7±4.58%,缺氧不同时间点AI较缺氧前均显著性增高(P<0.01),并随着缺氧时间延伸,AI显著增加(P<0.05),不过,缺氧6h、8h和12h时AI没有统计学意义(P>0.05)。3.MSCs在不同缺氧时间点Fas、Fas-L蛋白表达较缺氧前均显著性增高(P<0.05),且随着缺氧时间延伸,表达显著增加,而在缺氧6h-12h时间点表达没有统计学意义(P>0.05)。3.缺氧0.5、1、2、4、6、8和12h,AI与Fas和Fas-L均显著正相关。结论缺氧是促进MSCs凋亡的重要因素,Fas和Fas-L蛋白可能在MSCs缺氧凋亡的调控中起着重要作用。

丹芍化纤胶囊对体外活化HSCs增殖、凋亡及Fas/FasL途径的影响

目的研究中药复方制剂丹芍化纤胶囊对体外活化肝星状细胞(HSCs)增殖、凋亡及Fas蛋白、caspase3mRNA表达的影响,探讨该药抗肝纤维化的作用机理。方法制备丹芍化纤胶囊大鼠药物血清,分离培养大鼠HSCs,并分为小牛血清组、正常大鼠血清组、丹芍化纤药物血清组3组,分别加入含5%、10%、20%以上3种血清的DMEM培养基干预培养的HSCs,然后测定以下指标MTT比色法测定原代HSCs增殖情况,TUNEL法测定传一代HSCs凋亡情况,免疫细胞化学SABC法测定传一代HSCs内Fas蛋白表达情况,荧光实时定量RTPCR法检测传一代HSCs内caspase3mRNA表达情况。结果丹芍化纤药物血清组较同浓度小牛血清组及正常大鼠血清组明显抑制HSCs增殖,促进HSCs凋亡,且活化的HSCs内Fas蛋白表达显著增多、增强,caspase3mRNA含量亦明显增加。同时,药物血清浓度越高,以上作用越明显,呈剂量依赖性。结论丹芍化纤胶囊能显著抑制HSCs增殖,并通过增加活化HSCs内Fas蛋白及caspase3mRNA表达(即激活HSCs内Fas/FasL途径)诱导该细胞凋亡。

Survivin在子宫内膜癌中的表达及其与Fas/Fas-L表达相关性的研究

目的探讨生存素(Survivin)在子宫内膜癌组织中的表达及其与Fas、Fas-L表达的相关性。方法应用S-P免疫组化染色法检测Survivin、Fas及Fas-L蛋白在46例子宫内膜癌中的表达,同时选9例子宫内膜非典型增生及12例正常子宫内膜组织作为对照。结果Survivin在子宫内膜癌中表达率为65.2%,明显高于正常子宫内膜中的表达率25%(P<0.05)。Fas在子宫内膜癌和正常子宫内膜组织中表达率分别为52.2%和84.6%(P<0.05)。Fas-L在子宫内膜癌和正常子宫内膜组织中表达率分别为78.3%和33.3%(P<0.05)。Fas蛋白表达阳性、阴性者子宫内膜癌组织中,Survivin表达阳性率分别为45.8%、81.8%,两者间具有明显的负相关(P<0.05);而Fas-L表达阳性、阴性者中,Survivin表达率分别为75%、30%,两者之间具有明显的正相关(P<0.05)。结论Survivin引起的细胞凋亡抑制,在子宫内膜癌的发生、发展中起一定作用,Survivin与Fas、Fas-L有关。

肺炎链球菌溶血素经死亡受体/Fas途径和线粒体途径诱导RAW264.7细胞凋亡

目的:探讨肺炎链球菌溶血素(Pneumolysin,Ply)对小鼠RAW264.7细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用及机制。方法:Ply蛋白加入RAW264.7细胞培养上清与细胞共孵育。倒置显微镜观察Ply对RAW264.7细胞形态的影响。MTT法检测Ply对RAW264.7细胞的增殖抑制。Annexin V法检测细胞凋亡率。分光光度法检测Caspase-3、8、9活性。免疫细胞化学法检测到Bax、Fas、Bcl-2蛋白的表达。结果:Ply对小鼠RAW264.7细胞有明显的增殖抑制作用,呈剂量和时间依赖性;1μg/ml Ply处理RAW264.7细胞24小时后,可见典型的凋亡形态学改变;1μg/ml Ply处理RAW264.7细胞1小时和3小时后,细胞凋亡率分别为32.90%和51.56%(P<0.05);1μg/ml Ply蛋白处理RAW264.7细胞24小时,Caspase-3、8、9活性均比对照组升高(P<0.05);免疫细胞化学法检测到Bax、Fas表达较对照组增强,Bcl-2表达减弱(P<0.01)。结论:Ply可诱导小鼠RAW264.7细胞凋亡,诱导凋亡的机制可能是通过死亡受体/Fas途径和线粒体途径双重机制的介导实现。

Fas/Fas-L与体外热应激胸腺细胞亚群变化及凋亡的关系

目的探讨体外热应激胸腺细胞的亚群变化及凋亡与胸腺细胞表达 Fas、Fas- L 的关系。方法用流式细胞术检测体外热应激后再培养的胸腺细胞不同时间的凋亡率、CD4CD8亚群及表达 Fas、Fas- L的阳性率。结果体外热应激胸腺细胞的凋亡率和表达 Fas及 Fas- L 的阳性率均呈时间依赖性增高 ,凋亡的胸腺细胞以 CD4+ CD8+双阳性胸腺细胞为主。结论热应激主要诱导 CD4+ CD8+ 胸腺细胞凋亡 ;Fas与 Fas-

Fas/FasL信号传导途径在启动尘肺中的作用机制

目的探讨Fas/FasL信号传导途径在尘肺发生发展中的作用机制。方法以中国煤炭工人北戴河疗养院无其他肺部疾病的0+接尘工人及Ⅰ期、Ⅱ期尘肺患者为研究对象,将支气管肺泡灌洗液(BALF)中的肺泡巨噬细胞(AMs)分5组培养(分别在信号传导途径的不同环节进行抑制),即对照组(未抑制任何途径介导的细胞凋亡过程)、SOD组(在AMs凋亡过程上游保护AMs,抑制AMs细胞膜脂质过氧化过程从而抑制凋亡过程,观察SOD对凋亡细胞的保护作用)、Fas/FasL组(抑制三条传导途径中的另两条即TNFR/TNF-α、TRAILR/TRAIL途径,观察Fas/FasL信号传导途径介导的细胞凋亡情况)、FasL抑制组(同时抑制TNFR/TNF-α、TRAILR/TRAIL和Fas/FasL三条途径,观察Fas/FasL信号传导途径上游抑制后的细胞凋亡情况),caspase-8抑制组(同时抑制TNFR/TNF-α、TRAILR/TRAIL途径和Fas/FasL途径的下游蛋白caspase-8的活性,观察Fas/FasL信号传导途径下游抑制后的细胞凋亡情况)。分别采用Western blot(WB)、琼脂糖凝胶电泳(AGE)和TDT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)方法检测肺泡巨噬细胞(AMs)的凋亡情况、DNA片段的改变、信号蛋白Fas、FasL、caspase-8、caspase-3的表达水平。结果SOD组、FasL抑制组、caspase-8抑制剂组的凋亡指数均低于对照组,差异均有统计学意义。对照组的AMs出现凋亡细胞特征性"梯状带",SOD组未出现,FasL抑制组、caspase-8抑制剂组的DNA条带明显弱于对照组。SOD组的Fas、FasL、caspase-8、caspase-3蛋白的表达均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0·05);FasL抑制组的caspase-8、caspase-3的表达低于Fas/FasL组与对照组,差异均有统计学意义(P<0·05);caspase-8抑制组的caspase-3表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0·05)。结论尘肺的发生发展可能与Fas/FasL信号传导途径介导的AMs凋亡有关。

Fas/Fas-L介导热应激诱导的胸腺细胞凋亡

目的 探讨体外热应激诱导小鼠胸腺细胞凋亡与Fas、Fas-L表达的关系。方法 用流式细胞术检测体外热应激后再培养的胸腺细胞不同时间的凋亡率及Fas、Fas-L表达阳性率。结果 体外热应激诱导胸腺细胞的凋亡率和Fas及Fas-L表达阳性率均呈时间依赖性增高，体外热应激诱导胸腺细胞Fas/Fas-L的表达与凋亡明显相关。结论 Fas与Fas-L是介导体外热应激损伤胸腺细胞凋亡的重要分子。

组织细胞性坏死性淋巴结炎中EBV-LMP-1、Fas/Fas-L的表达

目的探讨EB病毒、Fas/Fas-L在组织细胞性坏死性淋巴结炎(histiocytic necrotizing lymphadenitis,HNL)发生、发展中的作用及相互关系。方法应用免疫组化SP法检测40例HNL和10例反应性增生淋巴结组织中的CD8、EB病毒编码的隐伏膜蛋白(EBV-LMP-1)、Fas、Fas-L蛋白的表达状况。结果LMP-1、Fas/Fas-L在HNL的表达均比对照组明显增高(P<0·05)。EBV-LMP-1的表达与Fas/Fas-L呈正相关(P<0·05)。结论EB病毒是HNL的发病原因之一,Fas/Fas-L介导的细胞毒性反应为引起EB病毒感染淋巴细胞凋亡的主要原因之一。

缬沙坦对FAS/FAS-L在甲状腺素诱导的心脏病大鼠心肌组织表达的干预作用

目的研究缬沙坦对FAS、FAS-L在甲状腺功能亢进(甲亢)性心脏病大鼠心肌组织表达的影响。方法Sprage-Dawley(SD)大鼠40只,按随机数字表法分为对照组、L-甲状腺素组、缬沙坦小剂量组(L-甲状腺素+10 mg/kg缬沙坦)、缬沙坦大剂量组(L-甲状腺素+30 mg/kg缬沙坦)。L-甲状腺素组和缬沙坦干预组予L-甲状腺素0.5 mg/(kg.d)腹腔注射28 d建立甲亢模型,缬沙坦小剂量组在建模同时予缬沙坦10 mg/(kg.d)灌胃治疗,缬沙坦大剂量组每天灌服缬沙坦30 mg/(kg.d)。造模前后分别采取大鼠静脉血,用化学发光法检测血清TT3、TT4浓度;第28天解剖动物,测定各组大鼠心脏质量指数;收集左心室心肌组织分别行苏木素伊红染色和Masson染色观察左心室心肌组织形态结构、测定左心室细胞直径和胶原容积分数及免疫组化观察FAS、FAS-L的表达情况。结果与对照组相比,L-甲状腺素组大鼠心脏质量指数、心肌细胞直径、胶原容积分数增大,FAS、FAS-L蛋白表达明显增强,差异有统计学意义(P<0.05);而缬沙坦干预组上述心室重构指标明显改善,FAS、FAS-L蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);而缬沙坦大、小剂量组之间上述指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论缬沙坦可通过调节FAS/FAS-L的表达,抑制心肌重构,具有保护心脏功能的作用。

穿孔素、粒酶B、Fas、Fas-L和Caspase 3在心肌细胞凋亡中的作用和相互关系

目的探讨小鼠移植心脏组织中穿孔素、粒酶B、Fas、Fas-LmRNA以及活性Caspase3的表达和水平变化,以了解它们在急性排斥反应心肌细胞凋亡中的作用和相互关系。方法利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术、Western免疫印迹(WesternBlot)等检测方法,检测了与凋亡发生机理有关的穿孔素、粒酶B、Fas、Fas-LmRNA及活性Caspase3蛋白的表达和变化。同时,通过组织学分析和TDT介导的原位末端标志(TUNEL)等检测方法,分析了小鼠心脏移植模型急性排斥反应时组织损伤和细胞凋亡的情况。结果Fas在同基因组和异基因组中均有表达,且水平无差异。但Fas-L、穿孔素、粒酶B及Caspase3只在异基因小鼠心脏移植中出现,术后第1天都开始表达,术后3d、5d强烈上调,与组织损伤、细胞凋亡呈直接相关。当使用Caspase抑制剂后,Caspase3活性随之明显降低(P<0·01),相应地组织损伤和细胞凋亡指数(AI)也明显减轻(P<0·01)。但其穿孔素、粒酶B、Fas-L却无变化。结论小鼠心脏移植急性排斥反应过程中存在心肌细胞的凋亡,是其损伤的重要机制;FasL、穿孔素、粒酶B以及活化Caspase3的出现和上调程度与凋亡细胞的数量与急性排斥反应的严重程度直接相关;由细胞毒T淋巴细胞引发的Fas/FasL、粒酶B/穿孔素两种途径介导的细胞凋亡,都必须经过Caspase3的活化这一共同通道来完成。

Fas/Fas-L在重型肝炎患者肝组织中的表达及其在肝细胞凋亡中的意义

目的 研究Fas/Fas L系统在重型肝炎患者肝细胞中的表达情况及在肝细胞凋亡中的意义。方法 采用免疫组织化学方法对 2 0例住院的重型肝炎病人之活检肝组织进行了Fas抗原及Fas配体表达的检测 ,并运用末端转移酶标记技术 (TUNEL)同时检测细胞原位凋亡的情况。结果 所检测 2 0例重型肝炎肝组织中 ,Fas抗原在肝细胞中呈强阳性表达 ;浸润的淋巴细胞上大量表达Fas L ,肝细胞中也有散在分布 ;每例标本均见凋亡细胞 ,分布在炎症坏死区及周边和小叶内。结论 Fas/Fas L系统过量表达 ,引起大量肝细胞死亡 ,参与重型肝炎的发病 ,Fas途径引起的细胞凋亡可能是重型肝炎发病过程中的重要机制之一。所检标本中 ,凋亡和坏死同时存在 ,表明这两种不同的死亡方式在重型肝炎的发病上存在着关联性。

Fas/Fas-L介导血管细胞凋亡的研究进展

凋亡是一系列主要以Caspase-8、Caspase-3为主的半胱氨酸蛋白酶激活的程序性死亡过程,Caspase可被Fas等细胞表面死亡受体和细胞内线粒体介导的级联反应这两种基本的信号转导通路激活。随着研究的深入,Fas/Fas-L介导的血管细胞的凋亡越来越受到学者的关注,已经成为血管疾病领域的研究热点之一,

1类多巴胺受体活性变化对细胞凋亡Fas/Fas-L通路的影响

目的以细胞凋亡的死亡受体(Fas/Fas-L)途径为切入点,探讨1类多巴胺受体(dopamine receptor-1,DR1)活性变化对缺血-再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡的影响及可能机制。方法乳鼠心肌细胞以模拟缺血溶液培养2 h后再正常培养24 h的方法建立心肌细胞缺血-再灌注损伤模型。心肌细胞随机分为4组:正常对照组,缺血-再灌注组(I/R组),10μmol/L SKF-38393(DR1激动剂)组(SKF干预组),10μmol/L SCH-23390(DR1抑制剂)组(SCH干预组)。RT-PCR和Western blot分别检测Fas、Fas-L、Caspase-8、Caspase-3 mR-NA和蛋白质的表达;TUNEL染色和流式细胞仪技术观察心肌细胞的凋亡情况;紫外分光光度计检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;透射电镜观察心肌细胞形态变化。结果与正常对照组比较,I/R组中Fas、Fas-L、caspase-8、caspase-3表达均上调,LDH活性和MDA含量增加,而SOD活性降低,心肌细胞损伤加重;与I/R组比较,10μmol/L SKF-38393使上述指标进一步增加,而10μmol/L SCH-23390对上述指标影响不显著。结论 DR1激活能够促进缺血-再灌注损伤诱导的细胞凋亡,其机制与上调Fas/Fas-L死亡途径有关。