芍药苷抑制FasL诱导的Fas/FasL信号转导通路的实验研究

目的探讨芍药苷对Fas配体(FasL)诱导大鼠颈椎间盘纤维细胞的Fas/FasL信号转导通路的影响。方法采用1月龄SD大鼠(雌雄不拘)的颈椎间盘纤维环,采用酶消化法,建立椎间盘纤维环细胞体外培养。传至3代纤维环细胞,建立FasL诱导体外培养纤维环细胞凋亡模型。实验中,将细胞随机分为空白组、模型组和药物组,模型组应用适宜浓度的Fas配体(FasL)诱导其凋亡,药物组在FasL诱导的同时给予适宜浓度芍药苷培养液干预。Annexin V/FITC法检测细胞凋亡率,分别鉴定模型复制情况及观察芍药苷保护作用;荧光定量PCR技术检测Fas、Caspase-3、Caspase-8基因表达水平。结果药物组纤维环细胞的凋亡率明显低于模型组(P<0.01),药物组的Fas、Caspase-3、Caspase-8凋亡因子基因的表达明显低于模型组(P<0.01)。结论芍药苷可通过下调纤维环细胞的Fas、Caspase-3、Caspase-8的基因表达,抑制Fas/FasL信号转导通路,从而降低纤维环细胞的凋亡率。

Fas/FasL信号转导通路在DADS诱导K562细胞凋亡中的作用机制研究

本研究旨在探讨二烯丙基二硫化合物(diallyl disulfide,DADS)诱导白血病K562细胞凋亡的作用及Fas/FasL信号转导通路在DADS诱导白血病K562细胞凋亡作用中机制。以K562细胞为研究外培养的细胞分为空白组(2组)及药物处理组(4组),共6小组。空白组包括细胞对照组及溶媒对照组,药物处理组加入不同浓度DADS,DADS终浓度为10、20、40、80mg/L。取对数生长期细胞进行实验。采用Hoechst33258染色法观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术分析不同浓度、不同时间DADS对K562细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR法检测Fas、FasLmRNA表达变化。结果表明,DADS在浓度为10、20、40mg/L时,K562细胞以凋亡效应为主。K562细胞出现细胞核缩小,染色质凝集、核膜破裂等凋亡特征;同一时间组(作用细胞24小时),DADS浓度从10mg/L增至40mg/L,K562细胞的凋亡率由(2.10±0.25)%增至(37.94±0.87)%;同一浓度组(40mg/L),DADS作用时间从24小时增至72小时,K562细胞的凋亡率由(37.94±0.87)%增至(47.02±0.66)%,各实验组随时间、浓度增加凋亡率明显增高(p<0.01),呈现K562细胞的凋亡效用与药物浓度、时间明显依赖关系;作用48小时后,FasmRNA表达水平较对照组上调;FasLmRNA较对照组下调,差异具有统计学意义(p<0.05)。当DADS浓度为80mg/L时,K562细胞以坏死效应为主。结论 :DADS能够诱导K562细胞凋亡,其凋亡机制可能与上调Fas,下调FasL,激活Fas/FasL死亡受体通路有关。

Fas/FasL信号传导途径在启动尘肺中的作用机制

目的探讨Fas/FasL信号传导途径在尘肺发生发展中的作用机制。方法以中国煤炭工人北戴河疗养院无其他肺部疾病的0+接尘工人及Ⅰ期、Ⅱ期尘肺患者为研究对象,将支气管肺泡灌洗液(BALF)中的肺泡巨噬细胞(AMs)分5组培养(分别在信号传导途径的不同环节进行抑制),即对照组(未抑制任何途径介导的细胞凋亡过程)、SOD组(在AMs凋亡过程上游保护AMs,抑制AMs细胞膜脂质过氧化过程从而抑制凋亡过程,观察SOD对凋亡细胞的保护作用)、Fas/FasL组(抑制三条传导途径中的另两条即TNFR/TNF-α、TRAILR/TRAIL途径,观察Fas/FasL信号传导途径介导的细胞凋亡情况)、FasL抑制组(同时抑制TNFR/TNF-α、TRAILR/TRAIL和Fas/FasL三条途径,观察Fas/FasL信号传导途径上游抑制后的细胞凋亡情况),caspase-8抑制组(同时抑制TNFR/TNF-α、TRAILR/TRAIL途径和Fas/FasL途径的下游蛋白caspase-8的活性,观察Fas/FasL信号传导途径下游抑制后的细胞凋亡情况)。分别采用Western blot(WB)、琼脂糖凝胶电泳(AGE)和TDT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)方法检测肺泡巨噬细胞(AMs)的凋亡情况、DNA片段的改变、信号蛋白Fas、FasL、caspase-8、caspase-3的表达水平。结果SOD组、FasL抑制组、caspase-8抑制剂组的凋亡指数均低于对照组,差异均有统计学意义。对照组的AMs出现凋亡细胞特征性"梯状带",SOD组未出现,FasL抑制组、caspase-8抑制剂组的DNA条带明显弱于对照组。SOD组的Fas、FasL、caspase-8、caspase-3蛋白的表达均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0·05);FasL抑制组的caspase-8、caspase-3的表达低于Fas/FasL组与对照组,差异均有统计学意义(P<0·05);caspase-8抑制组的caspase-3表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0·05)。结论尘肺的发生发展可能与Fas/FasL信号传导途径介导的AMs凋亡有关。

活性氧对尘肺患者肺泡巨噬细胞凋亡信号转导途径的作用

目的探讨活性氧(ROS)对Fas/FasL信号转导途径致肺泡巨噬细胞凋亡作用。方法以中国北戴河煤炭工人疗养院无其他肺部疾病的Ⅰ期、Ⅱ期尘肺患者共45例为研究对象,将支气管肺泡灌洗液(BALF)中的肺泡巨噬细胞(AM)分两组培养,即对照组、超氧化物歧化酶(SOD)组。采用TUNEL技术检测AM凋亡情况,琼脂糖凝胶电泳法检测DNA片段,W estern b lot法检测AM的Fas、FasL、caspase-8、caspase-3表达水平。结果SOD组的凋亡指数(9.50±2.76)显著低于对照组(19.18±2.83,P<0.05);SOD组的Fas、FasL、caspase-8、caspase-3蛋白表达水平(分别为0.107±0.065、0.115±0.047、0.231±0.139、0.312±0.114)均低于对照组(分别为0.209±0.084、0.210±0.097、0.374±0.071、0.441±0.095,P<0.05);对照组出现凋亡细胞特征性"梯状带",而SOD组未出现。结论Fas/FasL信号转导途径介导的AM凋亡可能与ROS上调Fas/FasL系统的表达有关。

苦参碱对小鼠S180肉瘤细胞凋亡及对FAS/FASL信号途径的影响

本研究探讨苦参碱对肉瘤小鼠肿瘤生长和凋亡的影响,及其对FAS/FASL信号途径的影响。建立S180肉瘤小鼠模型,30只小鼠分为5组,每组6只,分为对照组,10 mg/kg苦参碱、25 mg/kg苦参碱、50 mg/kg苦参碱和5 mg/kg顺铂,对照组采用生理盐水灌胃,苦参碱组采用不同浓度苦参碱灌胃,顺铂组顺铂腹腔注射3天,饲养12天后取出瘤体,测定瘤体重量。TUNEL法检测肿瘤组织凋亡,测定Caspase-8活性,免疫组化检测FAS/FASL,Western blot检测FAS/FASL和Caspase-8蛋白表达。与对照组相比,10、25、50 mg/kg苦参碱组瘤体重量显著减小,瘤体细胞凋亡率显著增加,均具有显著统计学差异(P<0.01),且具有浓度依赖性。与对照组相比,10、25、50 mg/kg苦参碱组瘤体组织Caspase-8活性显著增加,FAS/FASL及Caspase-8蛋白表达增加,均具有显著统计学差异(P<0.01),且这些作用与苦参碱浓度呈现正相关趋势。与顺铂组相比,25和50 mg/kg苦参碱组瘤体重量显著减小,瘤体细胞凋亡率显著增加,FAS/FASL及Caspase-8蛋白表达和Caspase-8活性显著增加,均具有显著统计学差异(P<0.01)。苦参碱能够促进肉瘤小鼠肿瘤组织的凋亡,并且该作用与上调FAS/FASL表达及活化Caspase-8有关。

丹芍化纤胶囊对体外活化HSCs增殖、凋亡及Fas/FasL途径的影响

目的研究中药复方制剂丹芍化纤胶囊对体外活化肝星状细胞(HSCs)增殖、凋亡及Fas蛋白、caspase3mRNA表达的影响,探讨该药抗肝纤维化的作用机理。方法制备丹芍化纤胶囊大鼠药物血清,分离培养大鼠HSCs,并分为小牛血清组、正常大鼠血清组、丹芍化纤药物血清组3组,分别加入含5%、10%、20%以上3种血清的DMEM培养基干预培养的HSCs,然后测定以下指标MTT比色法测定原代HSCs增殖情况,TUNEL法测定传一代HSCs凋亡情况,免疫细胞化学SABC法测定传一代HSCs内Fas蛋白表达情况,荧光实时定量RTPCR法检测传一代HSCs内caspase3mRNA表达情况。结果丹芍化纤药物血清组较同浓度小牛血清组及正常大鼠血清组明显抑制HSCs增殖,促进HSCs凋亡,且活化的HSCs内Fas蛋白表达显著增多、增强,caspase3mRNA含量亦明显增加。同时,药物血清浓度越高,以上作用越明显,呈剂量依赖性。结论丹芍化纤胶囊能显著抑制HSCs增殖,并通过增加活化HSCs内Fas蛋白及caspase3mRNA表达(即激活HSCs内Fas/FasL途径)诱导该细胞凋亡。

Fas/FasL途径在氟暴露致PC12细胞凋亡中的作用

为了探讨Fas/FasL途径在氟暴露致PC12细胞凋亡中的作用及其机制,采用含20、40、80、160mg/L NaF培养液处理PC12细胞.结果表明,所有剂量Na F处理12、24、36、48h,PC12细胞活性升高;上述不同剂量Na F处理24h后,与对照组比,PC12细胞的活性氧水平、细胞凋亡率、细胞内Fas/FasL信号转导通路Fas和Fas L、Caspase8、FADD、Caspase3基因和蛋白表达水平均呈显著上升(P<0.05),而Bid基因和蛋白表达水平显著下降(P<0.05),且呈氟暴露剂量依赖性.结果提示Fas/FasL途径在氟暴露致PC12细胞凋亡中起重要作用,其中FADD可能是Fas/FasL凋亡途径中的重要靶分子.

解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠TNF-α/TNFR1及Fas/FasL表达的影响

目的:研究解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠TNF-α/TNFR1及Fas/FasL表达的影响。方法:SPF级Wistar大鼠84只,随机分为空白组、模型组、解毒化瘀Ⅱ方低、中、高剂量组、安宫牛黄丸组、乳果糖组,以硫代乙酰胺(TAA)皮下注射复制急性肝衰竭大鼠模型,造模前3d开始灌胃给药,2次/d,间隔12h,共给药5.5d;采用ELISA法检测各组大鼠血清中TNF-α含量,Western blot法测定肝细胞TNFR1的表达量,免疫组化法检测Fas/FasL在各组肝细胞中分布的趋势及表达强度。结果:与空白组比较,模型组大鼠血清中TNF-α含量升高,肝细胞TNFR1、Fas、FasL的表达均显著增强,差异有统计学意义(P<0.01),解毒化瘀Ⅱ方能降低血清TNF-α的含量,抑制肝细胞TNFR1、Fas/FasL的表达,呈现量效关系,并以解毒化瘀Ⅱ方高剂量组作用效果最佳。结论:解毒化瘀Ⅱ方抗肝衰竭的作用机制可能是通过干预TNF-α/TNFR1及Fas/FasL的表达,阻止死亡信号的转导,抑制肝细胞凋亡。

Fas/FasL系统与胆管癌的免疫逃逸

自1999年国外学者Que FG等发现Fas/FasL系统在胆管癌等恶性肿瘤的免疫赦免与逃逸过程中起重要作用以来,有关胆管癌Fas/FasL系统逃避免疫系统监视的机理及胆管癌治疗研究得到了蓬勃发展.本文就Fas/FasL系统介导细胞凋亡的信号转导机制、信号转导途径的调节和在诱导胆管癌免疫逃逸等方面进行了综述.

MAPK信号转导通路与肿瘤细胞凋亡

丝裂原活化的蛋白激酶（mitogen—activated protein kinase，MAPK）是一组可被多种信号激活的丝／苏氨酸激酶。经双重磷酸化激活后可参与细胞的多种生物活性，如调节基因转录，诱导细胞凋亡、调节细胞周期等。而MAPK对细胞凋亡的诱导作用，是近年来研究的重点，尤其是对肿瘤细胞凋亡的诱导作用，更是人们关注的焦点。现已发现p38，ERK5，ERK以及JNK4个亚族。其中ERK，JNK，p38MAPK三条通路与肿瘤细胞凋亡关系密切。细胞凋亡是在特定时空发生的、受机体严密调控的细胞“自杀”现象。在肿瘤细胞中，活化的p38可增强c—myc表达、磷酸化p53、参与Fas／Fasl介导的凋亡；可增强TNF-α表达；作用于Caspase家族的上游而诱导肿瘤细胞凋亡。某些作用丁p38通路的化疗药物，也是通过诱导凋亡，产生抗肿瘤作用。JNK信号转导通路参与多种凋亡反应，现阶段研究表明，JNK通路介导肿瘤细胞凋亡的机制是通过磷酸化Bcl-2和Bcl-xL，促进线粒体释放细胞色素C，进而激活Caspase级联反应，最终作用于Caspase-3，导致细胞凋亡。

细胞凋亡基因Fas/FasL的免疫学作用

本文简介了有关细胞凋亡相关基因Fas/FasL的基因与蛋白结构,信号传导途径以及它在细胞凋亡中的作用,并讨论了它在免疫学上的功能以及与自身免疫性疾病的关系。

牛Fas相关死亡功能域蛋白(FADD)研究进展

Fas相关死亡功能域蛋白(Fas-associated death domain protein,FADD)是Fas/F asL系统信号转导通路中介导细胞凋亡的胞浆死亡信号蛋白。近年来对牛FADD研究逐渐深入,已成功克隆出牛FADD基因,并构建pAcGF-N1-bFADD融合蛋白表达载体等。通过对小鼠等模式生物的研究发现,FADD在细胞质内能以磷酸化形式存在并参与细胞增殖和有丝分裂等过程。除此之外,FADD蛋白在细胞周期进程、胚胎发育、炎症反应、肿瘤发生等生物学活动中具有一定作用。本文将从FADD基因分析、蛋白修饰及生物学功能入手,揭示FADD作为多功能蛋白对细胞增殖与凋亡平衡起到重要作用,是机体维持正常发育和活动的关键蛋白。为肉牛在育种和实践应用中,提高肉质和胴体性状提供候选基因。

基于Fas/FasL途径的金匮肾气丸对肾阳虚模型睾丸细胞凋亡的影响

目的以"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠为模型,从Fas/FasL途径探讨肾阳虚小鼠睾丸组织细胞凋亡发生机制及金匮肾气丸的治疗作用。方法以Colldege效应诱导雄性小鼠房室不节,用强迫小鼠游泳法造成劳倦过度,建立肾阳虚小鼠模型。4周后,分别用普通光学显微镜和电子显微镜进行睾丸组织的形态学观察,TUNEL法测定小鼠睾丸生殖细胞的凋亡率,利用RT-PCR检测小鼠睾丸组织Fas/FasL mRNA表达,用免疫组织化学分析Fas、FasL蛋白表达差异。结果1模型组小鼠睾丸组织曲细精管内支持细胞及各级生精细胞层次不清,结构破坏明显,金匮肾气丸组和睾酮组小鼠睾丸生殖细胞较模型组有一定程度改善。2在透射电镜下,模型组小鼠睾丸细胞中,可以观察到处于凋亡不同阶段的初级精母细胞,凋亡小体。3模型组TUNEL阳性细胞较正常组显著增加,主要为精原细胞和初级精母细胞,并可见精子细胞凋亡。金匮肾气丸治疗组睾丸细胞凋亡率明显低于模型组,但高于正常组,凋亡细胞类型以精原细胞和初级精母细胞为主。4模型组与正常组相比,Fas/FasL的mRNA表达量明显增高,金匮肾气丸组和睾酮组Fas、FasL mRNA表达较正常组稍高,但与模型组比较,明显降低。5模型组Fas在支持细胞和精原细胞及初级精母细胞高表达增多,精子细胞高表达增加明显;模型组FasL高表达细胞明显增多,在支持细胞、各级生精细胞及精子细胞、精子中均有分布,无明显定位特异性;金匮肾气丸组和甲基睾酮对肾阳虚模型小鼠的Fas/FasL均有明显的抑制作用。结论房劳-倦劳所致肾阳虚小鼠的睾丸内生殖细胞凋亡率上升,通过Fas、FasL的外源性死亡通路引起生殖细胞凋亡。金匮肾气丸可以通过调节Fas/FasL表达,降低小鼠睾丸生殖细胞凋亡。

莱菔硫烷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与Fas/FasL途径的相关性研究

目的研究莱菔硫烷对人肝癌HepG2细胞Fas、FasL、Bid蛋白表达的影响,探讨其诱导HepG2细胞凋亡过程中Fas/FasL途径的作用。方法 Caspase-8试剂盒检测莱菔硫烷对HepG2细胞Caspase-8活性的影响;流式细胞仪检测莱菔硫烷对HepG2细胞中Fas、FasL、Bid蛋白表达的影响。结果莱菔硫烷10、20、40μmol/L作用于HepG2细胞48 h,可显著升高HepG2细胞Caspase-8活性(P<0.01);可使HepG2细胞Fas、FasL蛋白的表达显著升高(P<0.01);莱菔硫烷20、40μmol/L时,可显著提高Bid蛋白的表达(P<0.01),上述作用均呈剂量相关性。结论激活Fas/FasL途径可能是莱菔硫烷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的重要机制之一。

玉米赤霉烯酮对大鼠睾丸支持细胞Fas/FasL凋亡信号通路的影响

为探讨玉米赤霉烯酮（zearalenon,ZEA）诱导睾丸支持细胞（sertoli cell,SC）凋亡的影响,试验以分离大鼠原代SC为材料,不同浓度ZEA处理SC 24 h,采用CCK-8法观察支持细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率的影响,q RT-PCR检测Fas、Fas L转录水平的变化,Western-blot法检测Fas、Fas L等凋亡相关蛋白表达的情况。结果显示,与对照组相比,随着ZEA浓度的升高,睾丸支持细胞的活力受到明显的抑制（P〈0.05或P〈0.01）;流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,10、20 mol/L ZEA染毒组细胞凋亡率呈极显著升高（P〈0.01）;q RT-PCR结果分析显示,10、20 mol/L染毒组细胞Fas和Fas L转录水平呈显著或极显著升高（P〈0.05或P〈0.01）;凋亡相关蛋白检测结果显示,与对照组相比,5 mol/L以上ZEA染毒组Fas、Fas L、FADD、Cleaved-caspase8、Cleaved-caspase3蛋白表达均出现显著或极显著性升高（P〈0.05或P〈0.01）。结果表明,ZEA可以通过Fas/Fas L途径诱导睾丸支持细胞发生凋亡。

中度寻常性银屑病患者血浆对Jurkat细胞作用的研究

目的:探究中度寻常性银屑病患者血浆微环境对Jurkat细胞炎症因子分泌、增殖及凋亡活性的影响。方法:分别采用中度寻常性银屑病患者(试验组)和正常人(对照组)的血浆培养Jurkat细胞,48 h后采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RTqPCR)检测Jurkat细胞分泌白细胞介素(IL)-8、IL-10、增殖核抗原(Ki-67)、细胞死亡受体1(Fas)、Fas配体(FasL)、胱天蛋白酶(Caspase)-3及Caspase-8的mRNA相对表达水平。结果:RT-qPCR结果显示与对照组相比,试验组Jurkat细胞表达促炎因子IL-8水平增高,抑炎因子IL-10水平降低(P<0.05);Fas、FasL、Caspase-3及Caspase-8表达水平均显著上调(P<0.05);而Ki-67表达差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman相关性分析显示,试验组中高表达的IL-8水平与胞内Fas(r=0.72,P<0.05)、FasL(r=0.54,P<0.05)、Caspase-3(r=0.62,P<0.05)、Caspase-8(r=0.69,P<0.05)mRNA表达均呈正相关;低表达的IL-10水平与胞内Fas(r=-0.40,P<0.05)、Caspase-3(r=-0.46,P<0.05)、Caspase-8(r=-0.62,P<0.05)mRNA表达均呈负相关。结论:银屑病患者血浆可诱导Jurkat细胞IL-8及IL-10表达异常,并增强Fas/FasL凋亡途径;且IL-8与Fas/FasL凋亡呈正相关,IL-10与Fas/FasL凋亡呈负相关,提示银屑病血浆微环境异常可能是T细胞活性异常的形成机制之一。