白英提取液对人肺癌A549细胞凋亡及Fas／FasL基因表达的影响

目的探讨白英提取液(STE)对人肺癌A549细胞凋亡及fas/fasL基因表达的影响。方法体外培养肺癌A549细胞,以0(正常对照组),10,20和40 mg/ml STE处理A549细胞48 h,并以25 mg/L顺铂(DDP)作为阳性对照。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,TUNEL法检测凋亡率,半定量RT-PCR检测fas和fasL mRNA表达。结果与正常对照组比较,STE各浓度组细胞增殖抑制率显著上升(P(0.01),细胞凋亡率明显升高(P(0.01),基因fas mRNA表达显著上升(P<0.05或P<0.01),而fasL mRNA表达明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论STE通过上调fas基因和下调fasL基因表达,诱导细胞凋亡,从而抑制A549细胞增殖。

固始鸡免疫器官内细胞凋亡基因Fas和FasL的动态表达

【目的】探讨固始鸡免疫器官内细胞凋亡基因Fas和FasL的动态表达。【方法】应用免疫组织化学技术和Leica显微图像处理系统,对细胞凋亡基因Fas和FasL在固始鸡免疫器官内的动态表达进行研究。【结果】Fas在不同发育阶段固始鸡免疫器官内均有表达,但表达量均不相同,呈波浪样动态变化;Fas表达于固始鸡免疫器官内淋巴细胞细胞膜和细胞质,不表达于细胞核;Fas表达阳性细胞在固始鸡不同免疫器官内分布位置不同,呈散在或簇团状分布:法氏囊内阳性细胞主要分布于黏膜靠近上皮细胞的固有膜层内、淋巴小结与淋巴小结之间区域、淋巴小结边缘,淋巴小结内少量淋巴细胞也有Fas表达;胸腺内主要分布于胸腺小叶髓质,极少出现在皮质内;脾脏内主要分布于红髓和边缘区、淋巴小结周围和动脉周围淋巴鞘周围的区域,动脉周围淋巴鞘极少有Fas表达,淋巴小结无Fas表达。FasL在固始鸡免疫器官内的表达与Fas相似,但表达量与Fas相比较少。【结论】细胞凋亡基因Fas和FasL参与了固始鸡免疫器官内淋巴细胞发育分化过程中的凋亡调控,并对免疫器官的稳定发挥重要作用。

腰突颗粒调节腰椎间盘退变模型兔Fas/FasL基因的表达

背景:前期研究发现,腰突颗粒可以通过延缓人髓核细胞的退变,起到保护人髓核细胞的作用。临床发现,其治疗腰椎间盘突出疗效满意。目的:探讨经验方腰突颗粒对兔腰椎间盘退变模型Fas/Fas L基因表达的影响,进一步阐明腰突颗粒防治腰椎间盘退变的作用机制。方法:将20只新西兰大白兔采用微创针刺旋切法制备兔腰椎间盘退变模型成功后,随机分为生理盐水组、低剂量组、中剂量组、高剂量组(n=5)。生理盐水组予以10 m L生理盐水灌胃,低剂量组、中剂量组、高剂量组分别予以腰突颗粒水煎剂10,20,40 m L灌胃,灌胃次数为2次/d,持续灌胃21 d。所有新西兰大白兔在相同条件下饲养,灌胃干预完成后,对各组大白兔腰椎髓核中的Fas/Fas L基因表达水平进行检测。结果与结论:(1)新西兰大白兔经微创针刺旋切法造模12周后行MRI检查证实椎间盘信号强度减弱,并见纤维环断裂,椎间盘向后突;(2)Masson染色可见纤维环细胞排列紊乱,甚至断裂,番红O染色见髓核细胞明显减少;(3)与生理盐水组相比,低剂量组、中剂量组、高剂量组椎间盘组织的Fas m RNA、Fasl m RNA表达均降低,且随着灌服腰突颗粒剂量的增加,Fas m RNA、Fasl m RNA相对表达量逐渐降低(P<0.05);(4)结果说明,腰突颗粒可降低兔腰椎兔腰椎间盘退变模型中髓核Fas/Fas L基因表达,进而延缓兔腰椎间盘退变。

中药异位宁对子宫内膜异位症模型大鼠Fas/FasL基因表达影响的实验研究

目的:通过研究异位宁对Fas/FasL蛋白表达的影响来阐述异位宁治疗子宫内膜异位症的作用机制。方法:取雌性Wistar大鼠,随机分为5组,正常对照组、模型对照组、异位宁高、低剂量组及西药丹那唑对照组;造模成功后各给药组灌胃给药1个月后,观察各组子宫内膜局部组织中Fas及FasL蛋白的表达情况。结果:治疗后异位宁高、低剂量组以及西药对照组Fas、FasL表达增多,染色较深,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:异位宁具有诱导Fas、FasL基因表达,提高异位内膜凋亡能力,使异位病灶得以萎缩、消失的作用。

宫颈癌细胞凋亡及Fas、FasL基因的表达

目的 检测宫颈癌中Fas、FasL的表达和宫颈癌细胞凋亡。方法 采用免疫组织化学SP法对 47例宫颈癌、1 6例宫颈上皮内瘤样变 (CIN)、1 0例慢性宫颈炎及 1 0例正常宫颈中Fas和FasL的表达进行检测 ;并采用TUNEL技术 ,对 47例宫颈癌细胞凋亡进行原位观察。结果 Fas和FasL在宫颈癌中表达与CIN、慢性宫颈炎及正常宫颈有显著性差异 (P <0 0 1 ) ,并且与宫颈癌细胞的分化程度有关 ;宫颈癌细胞凋亡与癌细胞分化程度、临床分期有关 (P <0 0 5 )。Fas和FasL表达阳性的宫颈癌细胞凋亡均高于Fas和FasL阴性组 (P <0 0 5 )。结论 Fas及FasL对宫颈癌细胞凋亡具有促进作用。基因治疗特异性改变凋亡阈限有利于改变宫颈癌的自然进程。

MMC诱导EJ细胞凋亡和Fas/FasL、Caspase-3基因表达

目的:研究丝裂霉素(MMC)在体外诱导膀胱癌细胞EJ凋亡和凋亡相关基因Fas/FasL、Caspase-3表达的关系。方法:以低剂量MMC(0.100mg/ml)诱导EJ细胞凋亡;以TUNEL法和FCM研究EJ细胞凋亡、细胞周期分布及Caspase-3抗体对抗MMC诱导凋亡;以免疫组化检测Fas/FasL、Caspase-3蛋白表达。结果:低剂量MMC处理的EJ细胞出现明显的凋亡形态特征,凋亡峰和细胞生长阻滞均发生于G0/G1期,Fas/FasL、Caspase-3蛋白呈上调表达,Caspase-3抗体能特异性阻断MMC诱导EJ细胞凋亡。结论:低剂量MMC能够诱导EJ细胞凋亡和增加Fas/FasL、Caspase-3基因表达,且与启动Caspase凋亡信号传导有关。

牦牛Fas和FasL基因克隆及其在主要组织器官中的表达

为了进一步理解Fas/FasL系统,本研究拟克隆牦牛Fas和FasL基因,并对2个基因在各组织器官中的表达进行检测。采用RT-PCR方法克隆牦牛Fas和FasL基因,并利用相关软件进行生物信息学分析,结合RTPCR方法及免疫组织化学方法对2个基因在牦牛主要组织器官中的表达进行检测。克隆得到了2 605bp的牦牛Fas基因cDNA和1 572bp的FasL基因cDNA序列,与黄牛的相应序列有很高的同源性(分别为99.1%和99.4%)。除了在心中只检测到Fas mRNA外,Fas和FasL mRNA共同表达于所有检测的组织中,且2个基因均在肝、脾、肾、淋巴结、胸腺和睾丸中强表达。免疫组化检测发现FasL蛋白存在于多种体细胞的胞浆中。结果表明,除了在淋巴器官和免疫赦免位点外,Fas和FasL还强表达于其他器官如肾和肝,表明Fas/FasL系统比以前所了解的要复杂。

几种ACEI对实验性糖尿病大鼠心肌细胞凋亡和Caspase-3及Fas、FasL基因表达影响的类效应

目的:探讨几种血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)卡托普利、培哚普利、咪达普利、贝那普利、福辛普利对糖尿病大鼠左室心功能及心肌细胞凋亡和凋亡相关蛋白影响的类效应。方法:将48只SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病模型,随机分为5个给药组和1个糖尿病组(每组8只),另选8只做正常对照组。给药组每日分别灌胃给予卡托普利(50 mg/kg),培哚普利(雅施达4 mg/kg),咪达普利(达爽10 mg/kg),贝那普利(洛汀新10 mg/kg),福辛普利(蒙诺10 mg/kg),糖尿病组给予生理盐水灌胃,共8周。对照观察心肌细胞凋亡、心肌组织Fas、FasL蛋白、Caspase-3及其Fas mRNA表达的变化。结果:与正常对照组相比,糖尿病给药组及未给药组的心肌细胞凋亡指数明显增高(均为P<0.05);Caspase-3阳性蛋白表达率明显增高(均为P<0.05);Fas蛋白阳性染色指数增高(均为P<0.05);Fas的mRNA表达明显增高(均为P<0.05)。但糖尿病给药组的较未给药组低(均为P<0.05)。所有各组的FasL蛋白阳性染色指数差异不明显(均为P>0.05)。各种ACEI治疗组之间差异无显著性(均为P>0.05)。结论:糖尿病心肌病的发生、发展过程中有心肌细胞凋亡的变化和Caspase家族及Fas、FasL系统的参与;糖尿病大鼠心肌细胞凋亡指数、心肌组织Fas蛋白以及Fas的mRNA表达水平、Caspase-3蛋白表达水平增高。ACEI干预糖尿病心肌病,能够降低细胞凋亡及Fas基因的表达及Caspase-3蛋白表达水平,且几种ACEI具有类效应。

PML基因诱导角质形成细胞凋亡及其Fas,Fasl和Bcl-2表达

目的探讨PML基因在银屑病发病机制中的作用。方法通过流式细胞仪及Annexin V法检测经PML基因转染的角质形成细胞凋亡;采用免疫组织化学、基因探针杂交测定经PML基因作用后的角质形成细胞Fas,Fasl和Bcl-2表达。结果 PML基因上调角质形成细胞Fas及Fasl表达(P<0.01),抑制Bcl-2基因表达,诱导角质形成细胞凋亡。结论 PML基因可能通过上调角质形成细胞Fas抗原及Fasl表达,抑制Bcl-2基因表达,进而诱导角质形成细胞凋亡而参与银屑病的发病。

婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV自杀基因治疗系统对大鼠膀胱癌组织细胞凋亡及Fas/FasL表达的影响

目的评价婴儿双歧杆菌(BI)介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)/更昔洛韦(GCV)自杀基因治疗系统对SD大鼠膀胱癌的治疗效果,探讨其诱导大鼠膀胱癌组织细胞的凋亡及对大鼠膀胱癌组织Fas/FasL mRNA和蛋白表达的影响。方法 N-甲基亚硝基脲(MNU)膀胱灌注法诱导建立大鼠膀胱肿瘤模型,并随机分为生理盐水/GCV对照组(生理盐水组)、BI-pGEX-5X-1/GCV组(空质粒组)和BI-pGEX-TK/GCV治疗组(重组质粒组)。分别将生理盐水、BI-pGEX-5X-1、BI-pGEX-TK经尾静脉注射到各组荷瘤大鼠体内,联合腹腔注射GCV,治疗4周后,称取各组膀胱癌组织质量。TUNEL法检测各组肿瘤组织凋亡,RT-PCR、蛋白质印迹法(Western blot)检测各组肿瘤组织Fas/FasL mRNA及蛋白表达水平。结果与空质粒组及生理盐水组比较,重组质粒组荷瘤大鼠膀胱质量明显降低(P<0.01);TUNEL法检测发现各组均出现不同程度的肿瘤细胞凋亡,与空质粒组及生理盐水组比较,重组质粒组凋亡最为显著(P<0.01);与空质粒组及生理盐水组比较,重组质粒组的荷瘤大鼠膀胱癌肿瘤组织细胞Fas/FasL mRNA及其蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论双歧杆菌介导HSV-TK/GCV自杀基因治疗系统对大鼠膀胱肿瘤生长有明显抑制作用,可能通过激活Fas/FasL凋亡途径,诱导大鼠膀胱肿瘤细胞的凋亡,从而发挥抑瘤作用。

非小细胞肺癌Fas/FasL基因蛋白的表达及其临床意义

目的 :研究Fas/FasL基因蛋白在非小细胞肺癌 (NSCLC)的表达及其临床意义。 方法 :应用链霉菌抗生物素蛋白 过氧化物酶 (SP)法染色技术测定 6 5例NSCLC组织标本Fas/FasL基因蛋白的表达水平 ,并分析其与病理类型、区域淋巴结转移、病理分级及TNM分期之间的关系。 结果 :NSCLC组织中Fas基因蛋白表达率显著低于正常肺组织 (46 .15 %vs 80 .0 0 % ,P <0 .0 5 ) ,而FasL基因蛋白表达率显著高于正常肺组织 (49.2 3%vs13.33% ,P <0 .0 5 ) ;FasL的表达与肺癌区域淋巴结转移有关 ,但Fas/FasL与肿瘤病理类型、病理分级及TNM分期无关。 结论 :Fas/FasL基因蛋白可能参与了非小细胞肺癌细胞凋亡的调节 ;检测FasL基因蛋白的表达有可能为临床判断NSCLC区域淋巴结转移。

营养性肥胖对大鼠睾丸生殖细胞Fas/FasL基因表达及凋亡的影响

肥胖是指人体内脂肪堆积过多,是一种多因素共同作用导致的全身性疾病。研究表明,由于久坐的生活方式和饮食习惯的改变,肥胖的患病率日益增加,并且成为健康的不利影响因素之一[1]。肥胖是目前公认的女性不孕的危险因素之一。

慢性缺氧肺动脉高压左室心肌细胞凋亡基因Fas和FasL的表达

目的:探讨凋亡基因Fas和FasL与慢性缺氧肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)心肌细胞凋亡的关系。 方法:23例慢性严重肺源性疾病缺氧新生儿分为两组,缺氧无肺动脉高压组(n=8),缺氧并肺动脉高压组(n=15);正常对照组6例,均为尸检时留取少许左室心肌组织,利用免疫组化及原位杂交技术,对Fas和FasL进行半定量分析。 结果:免疫组化染色用性反应为心肌细胞胞浆均呈棕黄色片状颗粒,原位杂交阳性信号为胞浆及胞膜内为紫蓝色颗粒,而两种染色在对照组心肌细胞胞浆内均未见阳性反应。缺氧及缺氧性PH患儿左室心肌组织 Fas与FasL的mRNA水平及其蛋白质含量均明显升高,与正常对照组比较,差异均有显著性意义(t=17.17～43.01,P均<0.01),而缺氧PH组与缺氧无PH组患儿左室心肌组织Fas与FasL的mRNA水平及其蛋白质含量差异无显著性意义(t=0.30～1.16,P均>0.05)。 结论:Fas系统是参与介导缺氧心肌细胞凋亡的重要环节,而肺动脉高压没有使其表达进一步上调。

高龄高度梗阻食管癌患者基因Survivin、Fas和FasL表达与预后的关系

目的:探讨高龄高度梗阻食管癌患者基因Survivin、Fas、FasL的表达与预后的关系。方法:对88例75～92岁高梗阻食管癌患者行内镜治疗,其中42例行内镜下单纯支架置入术,46例联合微波组织凝固、局部注药治疗,同时采用免疫组织化学法检测肿瘤组织的基因Survivin、Fas、FasL的表达。结果:88例患者治疗后进食均显著改善。联合治疗组术后生存时间较单纯支架组明显延长,再狭窄率显著降低(P<0.05),肿瘤组织基因Survivin、Fas、FasL的阳性表达率分别为73.86%、46.59%、54.55%。Survivin和FasL的表达与患者术后生存时间呈负相关(P<0.05)。结论:基因Survivin、FasL可作为预测预后的重要参考指标,其高表达提示食管癌患者预后不良。

Fas/FasL和C-myc基因表达与隐睾生殖细胞凋亡的关系

目的 :探讨Fas/FasL和C myc基因表达与隐睾生殖细胞凋亡的关系 ,以及C myc与Fas/FasL介导的细胞凋亡途径之间的关系。方法 :采用 2 2d龄SD雄性大鼠建立单侧隐睾模型 ,运用生物素 dUTP/酶标亲和素测定法检测睾丸生殖细胞凋亡 ,运用免疫组织化学SP法检测Fas/Fasl和C myc基因表达。结果 :①与对侧睾丸相比 ,术后第 3天隐睾侧睾丸发生凋亡的生殖细胞无显著增加 (P >0 .0 5 ) ,Fas/FasL和C myc基因表达亦无显著增加 (P >0 .0 5 ) ;第 7天隐睾侧睾丸发生凋亡的生殖细胞显著增加 (P <0 .0 1) ;Fas/FasL和C myc基因表达均有显著增加 (P <0 .0 1)。②实验性隐睾术后第 3天和第 7天 ,C myc基因表达与相应Fas/FasL基因表达间均存在着正相关关系。结论 :手术诱导的隐睾生殖细胞凋亡增加 ;Fas/FasL和C myc基因表达上调可能是生殖细胞发生凋亡的重要原因之一 ;隐睾生殖细胞凋亡可能是通过与C

猪FasL基因在猪软骨细胞上的表达和鉴定

目的: 实现猪Fas配体(FasL)基因在猪软骨细胞中表达和鉴定。方法: 用RT- PCR扩增猪FasL基因片段, 构建重组pGCEN-FasL逆转录病毒载体, 并转染PA317细胞。经G418筛选获得高滴度的病毒液, 感染猪软骨细胞, 应用FACS和Westernblot检测软骨细胞上FasL的表达。结果: 经酶切分析、测序证明, 成功地构建pGCEN- FasL逆转录病毒载体。转染的软骨细胞表面FasL的表达率为 57%。Westernblot显示, 在Mr为 37 000处有 1条特异性蛋白带, 具有诱导Fas+细胞凋亡的作用。结论: 成功地构建重组猪FasL基因的逆转录病毒载体, 并在转染的软骨细胞上高表达具有生物学活性的FasL, 为建立同种异体软骨细胞移植的免疫耐受提供了实验依据。

凋亡相关基因Fas、FasL和bcl-2在膀胱移行细胞癌中的表达

目的 研究凋亡相关基因Fas、FasL和bcl-2 ,在膀胱移行细胞癌 (TCC )中的表达情况 ,并探讨其临床意义。方法 采用S -P免疫组化方法 ,检测 67例TCC及 12例正常膀胱组织中Fas、FasL和bcl -2蛋白的表达。结果 在TCC和正常膀胱组织中FasL蛋白阳性率分别为 5 6.7%和 0 ,两者有非常显著性差异 (P <0 .0 1) ,而Fas和bcl -2蛋白在TCC和正常膀胱组织中的表达无显著性差异 (P >0 .0 5 )。Fas和bcl -2蛋白表达阳性率在TCC不同病理分级、分期有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。FasL蛋白表达随着TCC分级、分期的增加 ,呈降低趋势 ,但无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 Fas/FasL系统异常可能是TCC发生发展过程中免疫逃逸的重要因素 ;在TCC发生以及在低分化和浸润性TCC中 ,Fas/FasL基因介导的细胞凋亡可能被bcl -2基因的过度表达所抑制 ;Fas和bcl

FasL和Caspase-8蛋白表达及Caspase-8基因甲基化在非小细胞肺癌中的应用价值研究

目的探讨Fas L和Caspase-8蛋白表达及Caspase-8基因甲基化在非小细胞肺癌中的应用价值。方法选取手术切除的非小细胞肺癌患者100例,均分别切除癌组织和癌旁组织(以肿瘤为中心6 cm为半径的肺组织),其中肺鳞癌55例,肺腺癌30例,肺腺鳞癌15例;低分化癌50例,中分化癌30例,高分化癌20例;伴有淋巴转移65例,无淋巴转移35例。另取正常肺内组织100例进行对照。采用免疫组化S-P染色法检测非小细胞肺癌标本Fas L和Caspase-8蛋白表达;采用甲基化特异性聚合酶链式反应检测非小细胞肺癌组患者的Caspase-8基因甲基化状态。结果 Fas L蛋白主要散布在肿瘤细胞浆液中,少数排列在细胞膜上;Caspase-8蛋白散布于细胞浆液中。在非小细胞肺癌中,Fas L蛋白及Caspase-8蛋白存在不同程度的阳性表达,Fas L蛋白阳性表达率明显大于癌旁组织和正常组织,在肺腺癌的阳性表达率明显大于鳞癌及腺鳞癌(P<0.05),在低分化癌中的阳性表达率明显大于中分化癌及高分化癌,伴淋巴转移Fas L蛋白阳性率大于非淋巴转移,差异均有统计学意义(P<0.05);而Caspase-8蛋白阳性表达率明显小于癌旁组织和正常组织,在肺腺癌的阳性表达率明显小于鳞癌及腺鳞癌,在高分化癌中的阳性表达率明显大于中分化癌及低分化癌,伴淋巴转移Caspase-8蛋白阳性率低于非淋巴转移,差异均有统计学意义(P<0.05)。癌组织Caspase-8基因甲基化率明显大于癌旁组织和正常组织,在肺腺癌的阳性表达率明显大于在鳞癌及腺鳞癌的阳性表达率,在低分化癌中的阳性表达率明显大于中分化癌及高分化癌,伴淋巴转移Caspase-8基因甲基化阳性率高于非淋巴转移,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论非小细胞肺癌中出现Fas L蛋白高表达和Caspase-8基因高甲基化的变化,加快肺癌细胞与免疫细胞联合的速率,抑制免疫细胞的活性,致使肿瘤内部形成无免疫区域而促进肿瘤细胞的分裂和滋长,成为腺癌较易发生早期转移的重要原因。Caspase-8蛋白在鳞癌中表达增高,这是鳞癌预后较好的主要因素,也是判断非小细胞肺癌预后的重要指标之一。Caspase-8参与了非小细胞肺癌的演变,与非小细胞肺癌的发生、发展及转移有密切关系,作为非小细胞肺癌预后的重要指标,为临床对非小细胞肺癌进行综合性、针对性的治疗提供了重要理论依据。

细胞凋亡相关基因Fas和FasL在大鼠苯巴比妥促肝癌过程中的表达研究

肿瘤发生是机体自稳态破坏,细胞异常过度增生,逃避免疫监视的结果.通过Fas(Apo-1)受体和Fas配体(FasL)介导的细胞凋亡,被认为是机体保持自稳态的重要机制之一[1].近年来的研究发现,Fas/FasL系统与肝癌的发生、发展和预后有密切关系[2,3].本实验研究了Fas及 FasL在实验性大鼠肝癌促癌过程中的表达及作用.