南瓜多糖对糖尿病大鼠胰岛Fas、Fas-L、Bcl-2及Bax表达的影响

目的观察南瓜多糖(PP)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠胰腺组织中Fas、Fas-L、Bcl-2及Bax表达的影响。方法建立链脲佐菌素性糖尿病模型,PP(150、300、600mg.kg-1)灌胃进行治疗。3wk后检测大鼠空腹血糖值;采用免疫组化的方法探讨PP对链脲佐菌素性糖尿病大鼠Fas和Fas-L蛋白表达的影响;采用RT-PCR的方法观察PP对实验性糖尿病大鼠胰岛凋亡调控基因Bax和Bcl-2表达的影响。结果PP(300、600mg.kg-1)能明显降低STZ诱导的糖尿病大鼠的空腹血糖值;PP(150、300、600mg.kg-1)治疗后大鼠胰腺组织中Fas/Fas-L蛋白的表达率明显低于STZ模型组;PP(150、300、600mg.kg-1)给药3wk后,大鼠Bcl-2基因的表达明显增加,PP(300、600mg.kg-1)治疗后大鼠Bax基因的表达明显下降,Bcl-2与Bax的比值明显增加。结论PP对实验性糖尿病大鼠有降血糖作用,其作用与降低大鼠胰腺组织中Fas、Fas-L蛋白的表达、调节Bcl-2与Bax基因的表达有关。

血清抗精子抗体阳性对青春期雄性大鼠睾丸组织及睾丸生殖细胞中Fas/Fas-L凋亡途径的影响

目的:通过人工免疫雄性大鼠获得抗精子抗体(AsAb)介导的血清AsAb阳性的免疫性不育大鼠动物模型,观察AsAb对青春期大鼠睾丸组织及睾丸生殖细胞中Fas/Fas-L凋亡途径的影响。方法:5周龄(青春期)雄性Wistar大鼠30只,其中10只处死,取精子制备精子悬液免疫大鼠,余20只动物随机分为实验组(10只)和对照组(10只),4周后摘取睾丸。光镜观察睾丸组织改变,免疫组化法检测Fas、Fas-L和Caspase-3蛋白的表达。结果:实验组睾丸组织切片呈凋亡样改变,实验组Fas、Fas-L及Caspase-3蛋白的OD值(176.97±4.58,187.52±7.76,157.65±7.38)较对照组(161.87±5.37,150.27±8.65,120.37±6.76)显著增高(P<0.01)。结论:同种精子免疫大鼠,可成功制作AsAb介导的免疫性不育模型;AsAb影响雄性大鼠的生育力,其机制可能与Fas/Fas-L凋亡途径中Fas、Fas-L和Caspase-3蛋白的表达升高有关。

TRAIL及其受体和Fas-L在卵巢癌组织中的表达

目的 探讨TRAIL 及其受体在正常卵巢和卵巢癌组织中的表达,以及其与Fas- L 表达的相互关系。方法 用免疫组化法检测37例卵巢癌在2 1例正常卵巢组织TRAIL、TRAIL 受体(DR4、Dc R1)和Fas- L 的表达,并进行两两之间直线相关分析。结果 卵巢癌中DR4和Dc R1的表达均低于正常卵巢组织;高中分化卵巢癌DR4阳性率为(92 .31% )明显高于低分化癌DR4 (5 4 .5 5 % ,P<0 .0 5 ) ,表明卵巢癌分化程度越低,DR4表达也降低;TRAIL与Fas- L 的表达呈明显正相关(r=0 .777)。结论 卵巢癌中DR4和Dc R1表达低于正常卵巢组织,DR4的表达可能与卵巢癌的预后有关,初步提示TRAIL 及其受体相互作用与卵巢癌细胞凋亡有关。

泻热通瘀逐水扶正法对ARDS大鼠Fas和Fas-L表达的影响

目的 :观察泻热通瘀、逐水扶正法对实验性急性呼吸窘迫综合征的作用 ,并探讨其机制。方法 :选用SD大鼠 ,采用盲肠结扎穿孔术 (CLP)造成大鼠急性呼吸窘迫综合征模型 ,分别以生理盐水、加减陷胸桃承汤、加减陷胸桃承汤合参麦注射液预处理动物 ,对照观察各组动物血气分析、肺湿干重比、Fas和Fas L表达。结果 :Fas、Fas L在假手术组大鼠肺组织中仅有轻微表达 ,而模型组表达则明显上调 ,与假手术组比较有显著性差异 ,用药各组表达则与假手术相比无明显差异 ,与模型组相比有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,Fas L合方组最明显。结论 :泻热通瘀、逐水扶正法对实验性大鼠急性呼吸窘迫综合征有一定的防治作用 ,且两药合用具有一定的协同性 ;其作用机制可能与抑制促进细胞凋亡的细胞因子Fas、Fas L的表达有关。

蛛网膜下腔移植骨髓基质干细胞治疗大鼠脊髓损伤模型Fas、Fas-L表达变化

目的通过蛛网膜下腔移植绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓基质干细胞治疗大鼠脊髓挫伤模型,观察凋亡因子Fas和Fas-L在移植后不同时点的变化情况,为骨髓基质干细胞治疗脊髓损伤及机制提供实验室依据。方法(1)成年健康SD雌鼠66只(体重200～250g)随机分成11组,每组6只,即空白对照组、损伤对照组、细胞移植治疗组(后2组再分为术后1、3、7、14、21d组)。(2)在手术前、后对大鼠进行BBB评分和爬网格试验。术后第2d移植MSCs。之后,制作15～20μm厚的连续冰冻切片,间隔取片进行荧光细胞观察及Fas和Fas-L抗体免疫组织化学ABC染色。并在光学显微镜下对脊髓灰质前角进行阳性细胞计数,用图文分析系统检测Fas和Fas-L免疫阳性反应物的平均灰度值。应用SPSS11.0软件包进行组间多个样本均数比较的单因素方差分析、q检验。结果3组脊髓组织中均可见Fas和Fas-L阳性细胞。损伤对照组和细胞移植治疗组Fas和Fas-L阳性细胞数出现先升高后降低的趋势,1d组就出现表达,持续到14d组,21d组表达接近正常对照组,高峰出现在7d。21d接近正常对照组。损伤对照组与细胞移植治疗组相比较,阳性细胞数在7d、14d组出现差异(P<0.05)细胞移植治疗组Fas和Fas-L1、3、7d组灰度值低于正常对照组(P<0.05)。结论与损伤对照组相比细胞移植治疗组7、14d组Fas、Fas-L阳性细胞数下降,灰度值升高,2组间有显著性差异,说明移植骨髓基质干细胞下凋7d及14d组Fas、Fas-L的表达。

C57black/6小鼠全脑缺血模型Fas-L和Caspase-3的表达

目的应用C57black/6小鼠制备全脑缺血模型,观察脑缺血后大脑皮质、丘脑、下丘脑杏仁核部位Fas-L和Caspase-3基因的表达。方法双侧颈总动脉夹闭(bilateral common carotid artery occlusion,BCCAO)15 min,造成全脑缺血,24 h后取脑组织进行Fas-L和Caspase-3免疫组织化学染色。结果Fas-L阳性细胞广泛分布在大脑皮质、丘脑、下丘脑、杏仁核。除丘脑外,缺血组其他部位Fas-L阳性神经元细胞密度均显著高于假手术组(P<0.01);缺血组各区域细胞染色灰度值均显著低于假手术组(P<0.01)。Caspase-3阳性细胞在大脑皮质、丘脑、下丘脑均有表达,缺血组各区域阳性神经元细胞密度均显著高于假手术组(P<0.05,P<0.01);缺血组各区域细胞染色灰度值均显著低于假手术组(P<0.01)。结论双侧颈总动脉夹闭法可复制C57black/6小鼠全脑缺血模型,缺血再灌注24 h后,Fas-L和Caspase-3基因在多个区域表达增加。提示该全脑缺血模型中,神经元死亡信号传导需要Caspases基因家族成员表达的加强,且存在缺血后神经元死亡信号传导的外源性通路。

芪丹通脉片对脑缺血-再灌注大鼠神经细胞凋亡及Fas-L蛋白表达的影响

目的观察芪丹通脉片对脑缺血-再灌注大鼠神经细胞凋亡及凋亡相关基因Fas-L蛋白表达的影响。方法采用Longa报道的线栓法制备大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和芪丹通脉片组,并予相应处理以TUNEL法检测各组大鼠脑组织神经细胞凋亡,以免疫组织化学法与医学图像分析结合的方法检测各组大鼠脑组织Fas-L蛋白的表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠缺血侧脑组织TUNEL阳性神经细胞及Fas-L阳性细胞表达增多;与模型组相比,芪丹通脉片组大鼠缺血侧脑组织TUNEL阳性神经细胞及Fas-L阳性细胞表达减少。结论芪丹通脉片可下调Fas-L蛋白的表达,从而抑制脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,这可能是芪丹通脉片对脑缺血再灌注损伤起神经保护作用的机制之一。

辛伐他汀对单肾切除糖尿病老龄鼠肾组织Fas/Fas-L基因表达的影响

目的:探讨辛伐他汀对单肾切除糖尿病老龄SD大鼠肾脏凋亡相关基因Fas/Fas-L表达的影响。方法:单肾切除老龄SD大鼠分为肾切除对照组(C组)、糖尿病模型组(D组)、糖尿病辛伐他汀治疗组(S组)。12周后采用原位末端标记法检测各组肾组织细胞凋亡指数,使用实时荧光定量PCR和免疫荧光法,从转录和翻译水平观察各组大鼠肾皮质中凋亡相关基因Fas及Fas-L的变化规律。结果:D组相对C组细胞凋亡指数、Fas及Fas-L的蛋白表达水平和相对应的mRNA拷贝数均明显增高,S组相对D组减弱(P<0.05),Fas、Fas-L蛋白主要在肾小管表达。结论:Fas及Fas-L系统与DN发生发展相关,辛伐他汀可在分子水平调控Fas及Fas-L基因的转录和翻译,抑制细胞凋亡,发挥肾脏保护作用。

长期饮酒大鼠缺血脑组织中Fas-L抗原表达及细胞凋亡的动态研究

目的研究长期饮酒大鼠局灶性脑缺血后Fas-L抗原和细胞凋亡在各时间段的表达。方法7.2%酒精代水自由饮用12周的大鼠用线拴法制备局灶性脑缺血模型,在缺血后不同时间(1,3,6 h)分别以免疫组织化学方法和TUNEL法动态检测Fas-L抗原表达和细胞凋亡情况。结果长期饮酒组大鼠缺血1 h,Fas-L抗原和凋亡细胞呈阳性,3 h达高峰,6 h减少。结论长期饮酒大鼠在脑缺血后Fas-L的阳性表达和细胞凋亡比正常大鼠脑缺血明显,且促使凋亡细胞迅速坏死。

清开灵干预新生大鼠缺氧缺血脑皮质白介素-6及Fas-L蛋白的实验研究

目的探讨缺氧缺血脑损伤对新生大鼠HIBD脑皮质IL-6放射免疫浓度,Fas-L蛋白表达的影响,及清开灵对新生大鼠HIBD的干预治疗作用以及有关分子机制。方法建立HIBD动物模型后分为放射免疫法测定组和免疫组化测定组,每组又分为清开灵干预组、生理盐水对照组、假手术组,根据检测需要,在缺氧缺血后24 h,3 d,7 d作IL-6脑皮质匀浆放射免疫浓度测定、Fas-L蛋白免疫组化SP法测定。结果①脑皮质组织匀浆IL-6放射免疫浓度(pg/ml)假手术组、生理盐水组、清开灵干预组:24 h依次为50.1±6.2,56.3±7.1,51.3±6.8;3 d依次为50.6±6.4,250.3±11.2,78.1±8.3;7 d依次为51.4±6.6,345.7±12.3,81.2±9.2,生理盐水组与另两组分别比较,24 hP均>0.05,无明显变化;3,7d生理盐水组增加明显?P<0.05)清开灵干预组降低明显?P<0.05)。②③④左脑皮质Fas-L蛋白表达阳性率假手术组、生理盐水组、清开灵干预组:24 h依次为8.04±3.50,120.20±6.10,21.10±5.10;3 d依次为8.20±3.10,87.6±5.90,13.40±4.20;7 d依次为8.01±2.80,8.32±2.90,8.26±2.83;生理盐水组与另两组分别比较,7 dP均>0.05,无明显变化;24 h,3 d增多明显(P<0.05),清开灵干预组降低明显(P<0.05)。结论①新生大鼠HIBD后24 h,3 d,7 d脑皮质IL-6含量逐渐增高。②清开灵能降低新生大鼠HIBD脑皮质IL-6的产生量。③新生大鼠HIBD后,结扎侧脑皮质fas-L蛋白表达增高。④清开灵能抑制新生大鼠HIBD结扎侧脑皮质fas-L蛋白的高表达。

寻常型天疱疮与大泡性类天疱疮皮损角质形成细胞Fas和Fas-L表达的研究

目的 :探讨 Fas和 Fas- L在寻常型天疱疮 (PV)和大泡性类天疱疮 (BP)皮损发生发展中的作用。方法 :采用免疫组化方法研究两病患者皮损 Fas和 Fas- L的表达情况。结果 :1角质形成细胞 Fas/Fas- L表达的部位 :PV,疱内分离的及疱周围的棘层细胞 ;BP,水泡上方及附近的棘层细胞 ;2寻常性天疱疮、大泡性类天疱疮表皮细胞 Fas/Fas- L表达都明显高于正常对照组(均 P <0 .0 1)。结论 :角质形成细胞 Fas/Fas- L表达异常与 PV和

肾上腺皮质肿瘤细胞中Fas、Fas-L、HLA-DR蛋白的表达及其意义

目的观察Fas、Fas-L、HLA-DR蛋白在肾上腺皮质肿瘤中的表达,探讨其在肾上腺皮质肿瘤免疫逃逸中的作用及意义。方法采用免疫组化SP法检测55例肾上腺皮质腺瘤和17例肾上腺皮质腺癌Fas、Fas-L、HLA-DR蛋白的表达,应用Mias99图像分析系统对检测结果进行分析。结果①Fas、HLA-DR在肾上腺皮质癌中表达减少,其阳性细胞率、平均吸光度值和阳性染色面积均明显低于肾上腺皮质腺瘤(P<0.01);②Fas-L在肾上腺皮质癌中表达增多,其阳性细胞率、平均吸光度值和阳性染色面积均明显高于肾上腺皮质腺瘤(P<0.01)。结论①Fas/Fas-L系统与HLA-DR可能在肾上腺皮质肿瘤的免疫逃逸机制中发挥重要作用;②Fas、HLA-DR可作为判别肾上腺皮质良、恶性肿瘤的指标。

选择性亚低温对脑外伤大鼠脑组织Fas-L基因表达的影响

目的研究选择性亚低温治疗大鼠脑外伤时对脑组织Fas-L基因表达的影响。方法 72只大鼠随机分为假手术组、亚低温组和常温对照组。采用改进的Feeney自由落体法制作重型外伤性颅脑损伤模型,局部降温法在伤后30min内达到亚低温目标并保持6h,RT-PCR检测3组大鼠伤后不同时间点脑组织Fas-L基因表达。结果亚低温组大鼠在损伤后不同时间点(6h,24h,48h和72h)脑组织的Fas-LmRNA的相对含量分别为0.54±0.07、0.47±0.06、0.41±0.06、0.67±0.08,常温对照组分别为1.53±0.21、0.91±0.11、1.33±0.15、1.56±0.171.53,相同时间点两组间比较均有显著性差异(P<0.05)。结论亚低温对大鼠外伤性颅脑损伤急性期具有降低Fas-LmRNA的作用。

LIGHT/INF-γ基因配比转染HepG2细胞对其凋亡及Fas/FasL系统表达的影响

目的:观察脂质体介导的LIGHT和IFN-γ配比转染HepG2细胞后对其凋亡及Fas和FasL表达的影响。方法:将HepG2细胞分为LIGHT单独转染组、LIGHT和IFN-γ联合转染组和空白对照组,以脂质体为中介转染HepG2细胞;分别于转染后12、24和48h收集HepG2细胞,流式细胞术检测转染后HepG2细胞的凋亡率及Fas和FasL的表达。结果:LIGHT基因转染HepG2细胞能明显促进其凋亡,随时间延长凋亡率增加;Fas和FasL在HepG2细胞高表达,以Fas升高程度显著。结论:LIGHT和IFN-γ联合转染HepG2,其凋亡效果优于LIGHT单独转染,主要是通过上调Fas的表达来促进HepG2细胞凋亡。

Fas,Fas-L,Bcl-2基因家族凋亡相关基因在葡萄膜炎发病机制中的作用研究进展

葡萄膜炎病因复杂,发病机制至今不明,许多研究表明可能与免疫因素及炎症细胞有关。近来研究又发现相关基因Fas、Fas-L和Bc l-2家族在葡萄膜炎的发生发展中发挥了重要作用。本文对Fas,Fas-L及Bc l-2凋亡相关基因与葡萄膜炎的发病关系作一综述。

Fas/Fas-L在乳腺癌与转移淋巴结中的表达及其相互关系

目的探讨Fas/Fas-L在乳腺癌中的表达及其与淋巴结转移的关系。方法采用S-P免疫组化方法对100例乳腺癌组织进行Fas/Fas-L的检测。结果共检测100例乳腺癌,在50例有转移的的乳腺癌中,25例Fas抗体呈阳性反应(50.0%),其中强阳性4例;40例Fas-L抗体呈阳性反应(80.0%),其中强阳性7例。50例中有浸润性导管癌46例,23例Fas抗体呈阳性反应(50.0%),其中强阳性4例;37例Fas-L抗体呈阳性反应(80.4%),其中强阳性6例;有浸润性小叶癌4例,2例Fas抗体呈阳性反应(50.0%),无强阳性,3例Fas-L抗体呈阳性反应(75.0%),其中强阳性1例。在50例无转移的乳腺癌中,22例Fas抗体呈阳性反应(44.0%),其中强阳性2例;22例Fas-L抗体呈阳性反应(44.0%),其中强阳性4例。无转移病例中浸润性导管癌45例,20例Fas抗体呈阳性反应(44.4%),其中强阳性3例,20例Fas-L抗体呈阳性反应(44.4%),其中强阳性4例;有浸润性小叶癌5例,Fas抗体2例呈阳性反应(40.0%),无强阳性,Fas-L抗体2例呈阳性反应(40.0%),无强阳性。乳腺癌的Fas表达与有无淋巴结转移无显著相关(P>0.05),与乳腺癌组织学分类无关(P>0.05);乳腺癌的Fas-L表达与有无淋巴结转移有显著相关性(P<0.05),亦与乳腺癌组织学分类无关(P>0.05)。结论乳腺癌中Fas-L的表达可能与肿瘤逃避免疫监视有关。

人脑胶质瘤干细胞Fas/Fas-L mRNA表达的研究

目的:检测脑胶质瘤干细胞中Fas/Fas-L的mRNA表达水平,探讨其在脑胶质瘤凋亡以及免疫治疗中的意义。方法:从8例临床标本中培养出脑胶质瘤干细胞,并通过生物学特性和免疫细胞化学方法予以鉴定。然后提取脑胶质瘤干细胞以及相对应的原代脑胶质瘤细胞中的RNA,进行RealTime RT-PCR检测,测定Fas/Fas-L的mR-NA表达水平,并予统计学分析。结果:成功从8例临床标本中培养出脑胶质瘤干细胞并通过鉴定。定量检测mRNA表达显示,在脑胶质瘤干细胞中,Fas和Fas-L的mRNA表达均显著低于相应的原代培养的脑胶质瘤细胞,配对t检验显示,差异有统计学意义,P值均<0.001。结论:脑胶质瘤干细胞中Fas/Fas-L的mRNA表达水平低,可能会使以Fas为靶点的免疫治疗失败,从而导致肿瘤的复发。对Fas/Fas-L系统在脑胶质瘤治疗中的前景提出了疑问,但仍需进一步研究以明确判断。

子宫肌瘤复发患者FAS和FAS-L的表达水平及其临床意义

目的:探讨子宫肌瘤复发患者FAS和FAS-L的表达水平及其临床意义。方法:随机选择子宫肌瘤剔除术后复发患者,取其首次剔除的肌瘤组织、瘤旁正常子宫平滑肌组织和复发剔除的肌瘤组织、瘤旁正常子宫平滑肌组织的病理存档蜡块各100例。采用免疫组织化学方法检测首次肌瘤组织、瘤旁正常子宫平滑肌组织和复发肌瘤组织、瘤旁正常子宫平滑肌组织中FAS和FAS-L的蛋白表达水平。结果:复发瘤旁正常子宫平滑肌组织中FAS和FAS-L的蛋白表达水平低于首次瘤旁正常子宫平滑肌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。与瘤旁正常子宫平滑肌组织比较,首次和复发的肌瘤组织FAS、FAS-L的蛋白表达水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);且复发肌瘤组织中FAS和FAS-L的蛋白表达水平明显低于首次肌瘤组织,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:FAS和FAS-L参与了子宫肌瘤的复发,与子宫肌瘤的复发有密切的关系。

人参皂甙Rb1对阿霉素致心力衰竭大鼠心脏凋亡相关蛋白和mRNA表达的影响

目的探讨人参皂甙Rb1(Gs-Rb1)是否改善慢性心力衰竭(CHF)大鼠的心功能以及是否通过改善心脏凋亡相关蛋白和mRNA介导其效应。方法在构建阿霉素CHF大鼠模型成功后,将其随机分为Gs-Rb1组[70 mg/(kg.d),n=17]和CHF组(n=15),另外选取同龄健康大鼠作为对照组(n=10)。第4周评估心脏功能和采用Western blot、RT-PCR等方法检测Bax、Bcl-2、Fas、Fas-L和Caspase-3蛋白和mRNA的表达。结果(1)与CHF组相比,Gs-Rb1组左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(LVFS)显著改善(P值分别为0.015,0.022);(2)对照组不表达Bcl-2、Bax、Fas、Fas-L、Caspase-3蛋白,但微量表达相应mRNA;与CHF组相比,Gs-Rb1组Bcl-2蛋白和mRNA表达显著增加,而Bax、Fas、Fas L、Caspase-3蛋白和mRNA表达均显著下降(P<0.05);(3)LVEF与Bcl-2/Bax蛋白(r=0.451,P=0.017)及mRNA(r=0.411,P=0.021)呈显著正相关,而与Fas(r=-0.324,P=0.027;r=-0.507,P=0.022)、Fas-L(r=-0.417,P=0.031;r=-0.309,P=0.022)、Caspase-3(r=-0.351,P=0.029;r=-0.508,P=0.031)蛋白及mRNA均呈显著负相关。结论在GS-Rb1改善CHF大鼠心功能的效应中,GS-Rb1既可通过调高Bcl-2蛋白和mRNA,又可通过降低Bax、Fas-L、Fas、Caspase-3蛋白和mRNA等介导其保护作用。

益气活血方对脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的:探讨益气活血方对脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡及凋亡相关基因B cl-2和F as-L蛋白表达的影响。方法:采用Longa报道的线栓法制备大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型。将36只SD大鼠按随机数字表法均分为假手术组、模型组和益气活血方组。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测各组大鼠脑组织凋亡神经元细胞;用免疫组化法与医学图像分析相结合的方法检测各组大鼠脑组织B cl-2和F as-L的蛋白表达。结果:①与假手术组相比,模型组大鼠缺血侧脑组织TUNEL阳性细胞及B cl-2、F as-L蛋白阳性细胞数目均增多(P均<0.01);②与模型组相比,益气活血方组大鼠缺血侧脑组织TUNEL阳性细胞及F as-L蛋白阳性细胞数目减少,B cl-2蛋白阳性细胞数目增多(P均<0.01)。结论:益气活血方药(芪丹通脉片)可增强B cl-2蛋白的表达,同时下调F as-L蛋白的表达,从而抑制脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡,这可能是益气活血方对脑缺血/再灌注损伤起神经保护作用的机制之一。