鱼蛇逍遥汤对宫颈癌Hela细胞Fas凋亡途径相关信号分子的影响

目的探讨鱼蛇逍遥汤对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响及其分子机制。方法不同浓度的鱼蛇逍遥汤(0、2、5、10、20μM)处理人宫颈癌Hela细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot、RT-PCR检测Fas、FasL的蛋白和mRNA表达。结果鱼蛇逍遥汤处理后凋亡率增加,Fas、FasL的蛋白和mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论鱼蛇逍遥汤可以诱导人类宫颈癌Hela细胞凋亡,其可能是通过Fas/FasL介导外源性途径来实现的。

Fas凋亡途径在椎间盘退变中的研究进展

随着人们工作、生活节奏的加快,下腰痛(Low back pain,LBP)已成为危害人类健康的重要原因之一。目前认为,椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)是导致下腰痛的重要病理变化。关于IDD的研究主要集中在发病的分子机制上,然而具体机制尚未阐明。近期的研究表明,Fas凋亡途径在椎间盘退变的发生发展中发挥了一定作用。本文主要就Fas凋亡途径在椎间盘退变中的相关研究作一综述。

脑健胶囊对MCAO大鼠脑组织Fas凋亡途径的影响

目的研究脑健胶囊对大鼠脑组织Fas凋亡途径的影响,探讨脑健胶囊抗脑缺血后神经保护的作用机制。方法将SD大鼠随机分为补阳还五汤组、脑健胶囊组、模型组和假手术组共4组,每组25只。除假手术组和模型组给予等体积无菌蒸馏水以外,其余两组在大脑中动脉线检法复制局灶性脑缺血大鼠模型(MCAO)造模后给药,将各组大鼠分别存活1、3、7、14、28 d时取脑组织及腹主动脉采血。运用免疫组化法和Elisa法检测脑组织及血清中Fas相关死亡域蛋白(FADD)、Caspase-8、Caspase-3因子表达。结果脑缺血后大鼠均有神经功能障碍,经过治疗后,脑健胶囊能显著改善其神经功能缺失症状,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论脑健胶囊通过抑制缺血后脑组织FADD、Caspase-3、Caspase-8的表达,从而起到保护缺血后脑组织作用,减轻脑组织损伤。

双重酶标法检测溃疡性结肠炎凋亡上皮细胞Fas的表达

目的:探讨Fas/FasL介导的结肠上皮细胞凋亡在溃疡性结肠炎(UC)发病机制中的作用。方法:明确诊断的35例UC病人和15例对照人群的活检标本分别进行Fas、FasL的免疫组化染色,采用M30 Cytodeath特异性地检测结肠上皮细胞早期凋亡;对Fas及M30的表达进行相关性分析。观察连续切片和双重酶标染色中Fas和M30的共表达关系。结果:UC组上皮细胞表达Fas、FasL及M30的水平均比对照组明显增高(P<0.01);Fas与M30的表达有相关性(P<0.05);通过连续切片分别染色Fas与M30,以及双重酶标法同时染色Fas与M30,发现UC病变肠道凋亡的上皮细胞均为Fas表达阳性的细胞。结论:Fas/FasL介导的结肠上皮细胞过度凋亡可能是UC上皮层破坏的机制之一。

针灸对去卵巢大鼠骨组织TGF-β_1 mRNA、VEGF mRNA表达及凋亡基因Fas的影响

目的:探讨针灸对去卵巢大鼠骨质疏松症的作用机制和环节。方法:骨组织TGF-β_1 mRNA、VEGF mRNA采用原位杂交,凋亡基因Fas采用免疫组织化学检测。结果:模型组TGF-β_1、VEGF光度低于假手术组(P<0.05),针刺组、艾灸组、雌二醇组TGF-β_1、VEGF光度高于模型组(P<0.05);骨组织FAS蛋白光度,模型组高于假手术组(P<0.01),针刺组、艾灸组和雌二醇组低于模型组(P<0.05～0.01);成骨细胞内FAS蛋白阳性表达率模型组高于假手术组(P<0.01),雌二醇组低于模型组(P<0.01);破骨细胞内FAS蛋白阳性表达率针刺组、艾灸组和雌二醇组高于假手术组(P<0.05～0.01)。结论:针灸能有效调节破骨细胞内Fas基因的表达;能激活TGF-β_1、VEGF活性,使TGF-β_1 mRNA、VEGF mRNA表达增加。

Fas凋亡抑制分子FAIM 1表达缺失诱发单纯性肥胖的初步研究

利用肥胖患者血液和肥胖动物模型研究Fas凋亡抑制分子FAIM 1与单纯性肥胖的关系,为揭示单纯性肥胖发生的分子机理和诊治肥胖提供新的实验基础。检测40例单纯性肥胖患者和17例正常者血液白细胞的FAIM 1蛋白的表达量,分析FAIM 1与单纯性肥胖的相关性。为进一步揭示FAIM 1与单纯性肥胖发生、发展的内在关系,利用高脂饲料建立肥胖模型,并测定肥胖组和对照组大鼠的体重和血糖水平;造模成功的肥胖组大鼠和对照组大鼠禁食12h,麻醉心脏取血,分析血脂中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)的变化;取肥胖组和对照组大鼠的附睾脂肪垫和肾周脂肪,分析重量变化;取肥胖组和对照组大鼠,利用Western-blot检测FAIM 1及胰岛素受体β(IRβ)的表达变化。实验结果表明:与正常者相比,单纯性肥胖患者血液白细胞的FAIM 1表达量平均减少36.4%;与对照组相比,肥胖组大鼠血清TC、TG和LDL-C分别增加37.1%、25.6%和39.1%,而HDL-C则降低33.3%;肥胖组大鼠附睾脂肪垫和肾周脂肪分别是对照组的1.85倍和2.24倍;与对照组相比,肥胖组大鼠肝脏FAIM 1、IRβ的表达量分别降低45.9%和32.6%,与临床血液样本的检测结果一致。研究表明,FAIM 1表达与单纯性肥胖发生具有显著的负相关性,FAIM 1可成为单纯性肥胖诊断和治疗的新靶点。

雷公藤内酯醇诱导T淋巴细胞凋亡时Fas／FasL的表达

目的:检测Fas/FasL在雷公藤内酯醇诱导的T淋巴细胞凋亡中的表达。方法:培养人T淋巴细胞,10、20、30μg/L的雷公藤内酯醇分别刺激细胞4、8、16h,流式细胞仪DNA分析、FITC-Annexin Ⅴ binding/PI染色检测细胞凋亡,Western blot分析检测Fas/FasL蛋白的表达。结果:雷公藤内酯醇以剂量和时间依赖的形式诱导T淋巴细胞凋亡,雷公藤内酯醇诱导T淋巴细胞凋亡的同时伴随有Fas和FasL表达的上调,同样,雷公藤内酯醇诱导Fas和FasL表达呈现剂量和时间依赖性。结论:雷公藤内酯醇以剂量和时间依赖的形式诱导人T淋巴细胞凋亡,雷公藤内酯醇诱导T淋巴细胞凋亡的信号通路可能是通过Fas/FasL途径激活的。

黄芩苷通过调节Fas/FasL信号通路减轻小鼠癫痫持续状态神经细胞凋亡的机制

目的探讨黄芩苷通过调节Fas/FasL信号通路减轻小鼠癫痫持续状态(SE)神经细胞凋亡的机制。方法45只雄性ICR小鼠按随机数字表法分为三组:对照组、SE组、黄芩苷治疗组。采用腹腔注射海人酸建立小鼠癫痫模型,对照组注入等量的生理盐水,黄芩苷治疗组腹腔注射100 mg/kg的黄芩苷。通过原位末端标记法(TUNEL)染色观察小鼠海马CA1区神经细胞的凋亡;免疫组化观察海马组织中Fas、FasL的表达与分布;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测海马组织中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-8 mRNA的含量;免疫印迹试验检测Fas、FasL和caspase-8蛋白的表达量。结果黄芩苷治疗组海马CA1区神经细胞的凋亡数明显低于SE组,差异有统计学意义(P<0.05);同时,黄芩苷治疗组海马中caspase-3、caspase-8mRNA和Fas、FasL、caspase-8蛋白的含量均低于SE组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芩苷能够减轻小鼠癫痫发作后海马神经细胞的凋亡,其机制可能与抑制Fas/FasL信号通路及降低其下游的caspase-8、caspase-3的表达有关。

可溶性细胞凋亡蛋白Fas在自身免疫性甲状腺疾病患者循环血中的表达

目的:探讨Graves病(GD)和桥本甲状腺炎(HT)患者循环血可溶性细胞凋亡蛋白Fas(sFas)的变化特征及其临床意义。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和放射免疫分析法(RIA)分别检测52例GD、30例HT患者血清sFas和甲状腺激素水平,并进行相关性分析,30例年龄与性别相匹配的健康者作为正常对照。结果:GD患者血清sFas水平为(2.48±1.05)ng/ml,显著高于对照组的(1.34±0.41)ng/ml(P<0.01),且与促甲状腺激素受体抗体(TRAb)呈正相关(r=0.595,P<0.01);HT患者血清sFas水平为(0.99±0.32)ng/ml,显著低于对照组(P<0.01),与甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺微粒体抗体(TMAb)呈负相关(r=-0.375、0.393,P<0.05)。结论:自身免疫性甲状腺疾病(AITD)患者体内存在sFas异常表达,并在AITD的发病机制中发挥着重要作用。

自身免疫性甲状腺疾病甲状腺组织中凋亡调控蛋白Fas/FasL、Bcl-2/Bax的表达及意义

目的探讨凋亡调控蛋白Fas/FasL、Bcl-2/Bax在Graves病(GD)和桥本氏病(HT)中的表达及意义。方法取外科手术切取的GD及HT病人甲状腺组织标本,颈部手术时取正常甲状腺组织作为对照;采用免疫组织化学方法检测甲状腺标本Fas/FasL、Bcl-2/Bax的表达和分布状况。结果(1)Fas/FasL在GD和HT甲状腺滤泡上皮细胞表达均较正常对照组增高(P<0.01)。(2)在GD甲状腺滤泡上皮细胞Bcl-2及Bax表达明显高于HT组及正常对照组,以Bcl-2表达强度显著高于同组Bax(P<0.01),而在HT,Bcl-2表达强度与正常对照组比较差异无统计学意义。(3)GD与HT相比较,GD甲状腺滤泡细胞及浸润淋巴细胞Fas,Bcl-2抗原表达均强于HT,但其浸润淋巴细胞表达强度明显低于同组甲状腺滤泡细胞(均P<0.05)。结论Fas/FasL高表达和Bcl-2的低表达可能引起HT甲状腺滤泡上皮细胞的凋亡。在GD,Fas、Bax诱导细胞凋亡的作用可能被高表达Bcl-2对抗,从而致甲状腺体积增大、功能亢进。此外,Bcl-2与Bax表达强度的比值对于凋亡的调控有重要影响作用。

甲状腺癌组织中凋亡相关蛋白Fas,FasL,Bcl-2和Bax的表达及意义

目的研究凋亡相关蛋白Fas,FasL,Bcl-2和Bax在甲状腺癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学,采用TUMEL法,检测34例甲状腺癌及10例结节性甲状腺肿、9例甲状腺腺瘤组织病理标本中的细胞凋亡指数(ApoptosisIndex,AI);并用通用型二步法对凋亡相关蛋白Fas,FasL,Bcl-2和Bax的表达进行检测。结果(1)对照组细胞平均AI(%)为12.39±2.21,甲状腺癌细胞平均AI(%)为20.17±2.68,即肿瘤组的细胞凋亡指数高于对照组,二者有显著性差异(t=4.138>t(0.05),P<0.05)。(2)甲状腺癌组织中Fas,FasL,Bcl-2和Bax蛋白表达显著高于对照组。(3)Fas,FasL,Bcl-2和Bax蛋白表达的阳性率与其病理类型、临床分期无明显关系(P>0.05)。结论甲状腺癌组织中有较高水平细胞凋亡,Fas,FasL,Bcl-2和Bax的表达均明显增强,并且通过参与调节细胞凋亡而与甲状腺癌的发生有关,但与病理类型、临床分期无明显关系。

白头翁汤含药血清对口腔扁平苔藓上皮细胞增殖、凋亡及Fas/FasL信号通路的影响

目的探究白头翁含药血清对口腔扁平藓上皮细胞增殖、凋亡及Fas/FasL信号通路的影响。方法选取人口腔黏膜角质形成细胞(HOK)用脂多糖诱导建立口腔扁平藓细胞模型,分别比较空白组(正常培养)、脂多糖组(10μg/ml脂多糖)、低剂量组(10μg/ml脂多糖+2.5%的白头翁汤含药血清培养)、中剂量组(10μg/ml脂多糖+5.0%的白头翁汤含药血清培养)、低剂量组(10μg/ml脂多糖+10.0%的白头翁汤含药血清培养)细胞的增殖、凋亡及炎性因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α]的表达;对5组细胞中凋亡诱导配体(FasL)受体(Fas)、FasL蛋白和mRNA进行检测。结果脂多糖组细胞分泌的炎性因子较空白组显著增加(P<0.05);低剂量组、中剂量组和高剂量组细胞中炎性细胞表达较脂多糖组均显著降低,且呈逐渐递减趋势(P<0.05)。与空白组相比,脂多糖组细胞的增殖能力明显下降,凋亡率显著升高(P<0.05);低、中、高剂量组细胞的增殖能力较脂多糖组得到明显回升,凋亡率较脂多糖组明显回降(P<0.05)。与空白组相比,脂多糖组细胞中Fas和FasL蛋白和mRNA表达显著增加(P<0.05);与脂多糖组相比较,低、中、高剂量组细胞中Fas和FasL蛋白和mRNA表达均明显回降,呈逐渐递减趋势(P<0.05)。结论白头翁含药血清可调节口腔扁平藓上皮细胞的生物学活性,促进口腔黏膜角质形成细胞增殖,抑制其凋亡,降低炎性水平,其作用机制可能与调控Fas、FasL蛋白有一定相关性。

Fas/FasL途径在氟暴露致PC12细胞凋亡中的作用

为了探讨Fas/FasL途径在氟暴露致PC12细胞凋亡中的作用及其机制,采用含20、40、80、160mg/L NaF培养液处理PC12细胞.结果表明,所有剂量Na F处理12、24、36、48h,PC12细胞活性升高;上述不同剂量Na F处理24h后,与对照组比,PC12细胞的活性氧水平、细胞凋亡率、细胞内Fas/FasL信号转导通路Fas和Fas L、Caspase8、FADD、Caspase3基因和蛋白表达水平均呈显著上升(P<0.05),而Bid基因和蛋白表达水平显著下降(P<0.05),且呈氟暴露剂量依赖性.结果提示Fas/FasL途径在氟暴露致PC12细胞凋亡中起重要作用,其中FADD可能是Fas/FasL凋亡途径中的重要靶分子.

Fas介导的淋巴细胞凋亡在系统性红斑狼疮发病中的作用研究进展

研究表明 :系统性红斑狼疮 (SLE)患者存在淋巴细胞凋亡的异常 ,其中Fas介导的淋巴细胞凋亡异常尤其是一研究热点。本文从影响Fas介导的凋亡的主要因素这一角度出发 ,综述了Fas介导的淋巴细胞凋亡在SLE发病中的作用研究进展。

通过Fas／FasL途径诱导肿瘤细胞凋亡的天然黄酮和生物碱类化学成分研究进展

天然药物因其作用广、疗效好、毒副作用小等特点及现代人回归自然的心态而成为抗肿瘤药物研究的热点。早期的化学家或天然药物研究人员对化学或天然产物的研究多半局限在普通的药理活性筛选，随着科学技术的进步，学科之间的交叉渗透发展，对天然抗肿瘤药物或天然活性成分抗肿瘤作用机理的研究不断深入，许多抗肿瘤药物或活性化学成分的作用靶点、作用通路等得以阐述，其中Fas及其配体FasL是近年来研究最为深入的有关细胞凋亡的膜表面分子。大量研究发现许多天然药物可增加肿瘤细胞Fas的表达，启动Fas／FasL途径，从而起到诱导肿瘤细胞调亡的作用。黄酮和生物碱类为天然产物中分布广泛、研究深入和生物活性显著的两种类型化合物，为了更深入地研究这两种类型的化合物，现将通过Fas／FasL途径诱导肿瘤细胞凋亡的天然黄酮和生物碱类化学成分作一文献综述，旨在为这两类成分的抗肿瘤活性及其机理的深入研究提供参考。

异硫氰酸丙烯酯对大鼠肝细胞凋亡的影响

为研究异硫氰酸丙烯酯对细胞活性的影响,试验以20mg·L-1的内毒素(LPS)和1.25×10-5mol·L-1的异硫氰酸丙稀酯(AITC)分别或共同处理大鼠肝细胞3h后,用AnnexinV/PI双染色,流式细胞术分析细胞凋亡;反转录酶聚合酶链反应(RT-RCR)分析FasL和Caspase-8的表达情况。结果表明,AITC能有效抑制LPS(20mg·L-1)诱导的肝细胞凋亡,且在此过程中,FasL、Caspase-8的表达量均有减少。结果提示AITC可以通过Fas途径抑制LPS诱导的肝细胞凋亡,其作用有可能导致肿瘤的发生。

小儿胃炎及十二指肠溃疡胃窦组织的增殖与凋亡免疫组化检测

目的:分析小儿慢性胃炎、十二指肠溃疡胃窦组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡Fas基因配体(Fas-L)的免疫组化表达,探讨它们的表达在小儿慢性胃炎、十二指肠溃疡发病机制中的意义。方法:分析83例胃镜活检胃窦黏膜组织。设立5组实验对象,A组,慢性浅表性胃炎,HP(+);B组,慢性浅表性胃炎,HP(-);C组,十二指肠溃疡,HP(+);D组,十二指肠溃疡,HP(-);E组,正常对照组,HP(-)。应用免疫组化EnVision法,对每例组织分别进行PCNA、Fas-L染色,比较各组阳性细胞数差异。结果:PCNA的表达在A组高于B组(P<0.05);Fas-L的表达在各组间差异无显著性。结论:在小儿慢性胃炎及十二指肠溃疡中,HP感染促进胃窦黏膜腺上皮细胞的增殖。

真核表达质粒pBK-Fas的构建及转染舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑瘤效应

目的研究Fas基因转染对舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑制作用,构建Fas基因真核表达质粒pBK-Fas并将其转导入舌鳞癌Tca8113细胞,为舌鳞癌的Fas基因治疗提供实验基础。方法采用RT-PCR反转录成cDNA扩增Fas基因全长,亚克隆到真核表达载体pBK-CMV内,构建出重组真核表达质粒pBK-Fas,酶切鉴定并测序。脂质体法将pBK-Fas转染入Tca8113细胞,RT-PCR检测FasmRNA表达及半定量分析,琼脂糖凝胶电泳检测Fas转染细胞凋亡,流式细胞仪检测Fas蛋白表达。通过细胞生长曲线描记和软琼脂集落形成实验研究Fas基因的体外抑瘤效应。结果PCR扩增后的产物在约1008bp处出现明显的特异性条带,重组质粒pBK-Fas经酶切和测序鉴定,表明均含有大小正确的Fas基因片段。经检测Fas基因转染能提高FasmRNA表达水平、Fas蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数。Fas基因转染能提高Fas蛋白的表达强度,由转染前的34.01±4.76上升到转染后的55.72±7.33,差异有统计学意义(P<0.01)。Fas转染细胞株在Fas抗体作用下能够有效启动Fas介导的细胞凋亡途径。MTT法检测细胞增殖抑制率的结果显示PBK-Fas转染组Tca8113细胞的增殖抑制作用最明显,表明Fas基因转染能增加舌鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制率,结果与细胞生长曲线测定(计数法)结果具有一致性。软琼脂集落形成实验结果显示,与未转染细胞相比,重组质粒转染的Tca8113细胞群体倍增时间延长,克隆形成能力降低。结论Fas基因片段被成功插入真核表达载体pBK-Fas质粒的多克隆位点。Fas基因转染能有效的抑制体外培养的舌鳞癌Tca8113细胞的生长。

五味子乙素对H_2O_2损伤人肝细胞Fas通路的影响

目的建立H2O2诱导氧化的L02人肝细胞模型,从细胞凋亡调控因子FAS、具有死亡功能区的Fas相关蛋白（fas associateddeath domain protein,FADD）和Caspase-8的表达变化来研究五味子乙素（Sch B）对L02细胞的可能作用机制。方法用实时荧光定量PCR法检测FAS、FADD和Caspase-8 mRNA的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测FAS蛋白含量,Westernblotting检测FADD蛋白变化和分光光度法检测Caspase-8活性。结果在5~15μmol/L剂量范围内,Sch B可剂量依赖性抑制H2O2引起的FAS、FADD的表达和Caspase-8的活化。结论 Sch B可部分抑制H2O2诱导的L02细胞凋亡,其作用机制可能是通过影响了FAS-FADD-Caspase-8通路。

克仑特罗对COPD大鼠膈肌细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨克仑特罗对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠膈肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Fas表达的影响。方法将雄性SPF级W istar大鼠随机分为A、B、C三组,各组再分为造模前、造模2周、造模4周三个亚组。A组正常喂养;B、C组用气管注入脂多糖(LPS)加烟熏法造模;C组在造模基础上给予克仑特罗干预。用磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记及免疫组化法检测各组膈肌细胞凋亡率及Fas表达率。结果4周后,经肺HE切片证明B、C组造模成功。随时间推移,A组各亚组间细胞凋亡阳性率及Fas表达率无统计学差异,B、C组造模2周、4周亚组显著高于同期A组(P均<0.01),B、C组各亚组间无统计学差异;C组造模2周、4周亚组细胞凋亡阳性率显著低于同期B组(P<0.05)。结论烟雾、LPS在COPD形成过程中参与膈肌细胞凋亡调控,克仑特罗可能通过抑制氧化应激反应和下调Fas表达减少膈肌细胞凋亡,对COPD所致的膈肌疲劳有一定治疗作用。