慢性肾衰外周血淋巴细胞亚群及相关Fas表达的变化

目的探讨慢性肾功能衰竭 (CRF)患者外周血淋巴细胞亚群及相关Fas表达的变化。 方法运用单克隆抗体免疫荧光染色和流式细胞术检测CRF患者外周血淋巴细胞亚群和相关Fas表达的情况。 结果 CRF尿毒症组CD3 + 、CD4 + 、CD8+ 、CD19+ 较健康对照组显著降低 (P <0 .0 5 ) ;尿毒症血透组CD3 + 、CD4 + 较未透析组显著下降 (P <0 .0 5 ) ;尿毒症组CD4 + Fas+ 、CD8+ Fas+ 较正常对照组明显增高 (P <0 .0 5 )。 结论CRF时外周血淋巴细胞减少表明CRF患者体内存在免疫缺陷 ;而与淋巴细胞相关的Fas高表达可能在其中发挥了一定作用。

复方辛夷平喘液对哮喘豚鼠肺内LCA及淋巴细胞Fas表达的影响

目的:观察中药复方辛夷平喘液对实验性哮喘豚鼠肺内LCA及淋巴细胞Fas表达的影响,探讨中药治疗哮喘的机理。方法:实验设空白组、哮喘模型组、中药3个剂量组及对照组。免疫组化法检测豚鼠肺内LCA,流式细胞仪检测外周血淋巴细胞Fas表达。结果:(1)免疫组化见模型组肺泡内有阳性细胞,支气管壁及管周见较多阳性细胞,较空白组明显增高;复方辛夷平喘液各组阳性表达较空白组高,但低于模型组。(2)哮喘模型组淋巴细胞的fas表达较空白对照组下降明显(P<0.01),复方辛夷平喘液各组fas表达水平较模型组均显著提高(P<0.01)。结论:哮喘豚鼠存在肺内LCA高表达、血淋巴细胞fas低表达;复方辛夷平喘液下调LCA表达、上调Fas表达可能是其控制哮喘的作用途径之一。

阿霉素诱导Jurkat白血病细胞凋亡及上调Fas配体和Fas相关死亡域(英文)

目的研究阿霉素诱导白血病细胞凋亡的剂量及时间关系,探索其相关的分子机制。方法分别以0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L的阿霉素处理人类Jurkat白血病细胞61、22、44、8 h。其中一份样本在加入0.2 mg/L阿霉素前用zVAD-fmk(苄氧羰-缬氨酰-丙氨酰-天冬氨酰-氟甲基酮)预处理。应用AnV/PI双染细胞,在流式细胞仪上分析AnV/PI双阳性的凋亡细胞。采用Western Blot技术检测FasL和FADD(Fas相关死亡域)的表达。结果6 h时所有剂量的阿霉素诱导的凋亡细胞无显著差异(P>0.05),在12 h,只有1.0 mg/L诱导细胞明显凋亡。当细胞与0.2和0.5 mg/L的阿霉素共同培养24 h或36 h,观察到调亡细胞显著增加(P<0.001)。在zVAD-fmk存在的情况下,当细胞与阿霉素一同培养时,由阿霉素诱导的细胞凋亡完全受到抑制(P<0.001)。随着阿霉素作用时间增加,FasL和FADD表达水平相应增加。结论在阿霉素诱导的白血病细胞凋亡中,阿霉素以剂量和时间依赖方式诱导细胞凋亡;上调FasL可能启动FasL信号通路的激话,而caspase是最终的执行者。

溴氰菊酯对PC12细胞Fas、FasL、TNFR1蛋白及凋亡的影响

背景与目的 :探讨溴氰菊酯诱导神经细胞凋亡及其神经毒作用机制。 材料与方法 :用免疫细胞化学法定性检测给予不同剂量水平(10 -4mol/L ,10 -5mol/L ,10 -6mol/L)的溴氰菊酯24h后 ,Fas、FasL、TNFR1蛋白在PC12细胞中的表达 ;流式细胞仪定量检测给予溴氰菊酯24h和48h后 ,Fas、FasL、TNFR1蛋白在PC12细胞中的相对表达量阳性细胞率(rateofpositivecells ,RPC)和平均荧光强度(meanfluorescenceintensity,MFI)及PC12细胞的凋亡率。 结果 :①Fas、FasL、TNFR1蛋白在对照组和各剂量组均为阳性表达 ,但镜下未见各蛋白在各组之间的差异表达。流式细胞仪检测发现 :染毒24h后 ,Fas、FasL蛋白在各组的表达没有差异 ,而TNFR1蛋白在中剂量和高剂量组的表达与对照组比较有升高 ;染毒48h后 ,Fas、FasL、TNFR1蛋白在高剂量组表达(MFI分别为42.85±8.4、37.91±1.65、8.09±1.83)与各自对照组比较均有升高。②染毒24h后 ,各剂量组凋亡率没有升高 ;染毒48h后 ,高剂量组凋亡率与对照组凋亡率比较有升高。③染毒48h组细胞凋亡率与溴氰菊酯浓度、Fas、Fasl蛋白含量有直线相关关系。 结论 :溴氰菊酯可能通过死亡受体Fas诱导PC12细胞凋亡。

热、放射诱导的SHG-44细胞凋亡与Fas/FasL、Caspase-3表达关系

目的 了解热疗联合放射对SHG 4 4细胞凋亡的影响及凋亡相关基因Fas/FasL和Caspase 3的变化。 方法 采用流式细胞仪 (FCM )检测对照组、单纯放射 (2Gy)组、放射 (2Gy) +42℃加热 (加热时间 4 0分钟 )组细胞凋亡的改变 ,并用RT PCR法检测Fas/FasL和Caspase 3的表达。结果 空白对照组、单纯放射组、放射 +热疗组凋亡比率分别为 2 0 2 %、2 9 3%和 5 9 1 %;Fas在三个实验组中均表达 ,但FasL和Caspase 3仅在单纯放射组、放射 +热疗组中表达。 结论 凋亡是热杀灭脑胶质瘤细胞SHG 4 4的主要方式 ,凋亡与Fas/FasL、Caspase 3有关。

2-甲基萘[2,3-b]呋喃-4,9-酮(FNQ3)对肺腺癌细胞株(A549)细胞Fas受体表达和细胞凋亡的影响

目的探讨2-甲基萘[2,3-b]呋喃-4,9-酮(FNQ3)对A549细胞表面Fas受体表达和细胞凋亡的调节效应。方法给A549细胞投与FNQ3,从药物的浓度依赖性及投药的时间依赖性两方面来观察药物对A549细胞表面Fas受体表达及诱导凋亡的作用。用半定量RT-PCR法检测FasmRNA,用流式细胞仪检测A549细胞表面的Fas受体表达和细胞凋亡。结果A549细胞表面Fas受体表达和A549细胞FasmRNA及细胞凋亡敏感度都随着药物浓度和投药时间的增加而增加。在研究药物浓度依赖性时,FNQ3浓度为2.5μg/ml时FasmRNA产量相对较高,为75000分子/μl;A549细胞表面Fas受体表达相对较多;细胞凋亡率达到37.26%(P<0.01)。在研究药物时间依赖性时,FNQ3(0.5μg/ml)投药时间为7天时,FasmRNA产量相对较高,为150000分子/μl;A549细胞表面Fas受体表达相对较多;细胞凋亡率30.45%(P<0.02)。结论FNQ3作为1种抗肿瘤药物能够诱导A549肿瘤细胞表面Fas受体表达,并上调由Fas受体介导的细胞凋亡。

大肠腺癌Fas-FasL表达及其浸润淋巴细胞FasL的表达和临床病理研究

目的:探讨大肠腺癌Fas-FasL表达及其浸润淋巴细胞FasL表达的临床病理意义。方法:采用免疫组织化学方法分别检测40例大肠正常粘膜上皮、20例良性增生息肉、44例腺瘤和50例腺癌(含各分期)的Fas-FasL的表达,结合流式细胞仪检测大肠腺癌组织细胞的凋亡率。结果:免疫组织化检测40例正常粘膜上皮、20例增生性息肉、44例腺瘤、25例高分化腺癌、15例中分化腺癌、10例低分化腺癌,Fas表达逐渐下调,FasL逐渐上调。大肠腺癌组织、腺瘤与正常粘膜上皮的Fas-FasL阳性率表达均有显著性差异(P<0·05),正常粘膜上皮与增生性息肉的Fas-FasL阳性率表达无显著性差异(P>0·05),不同分化程度的大肠腺癌组织中Fas-FasL的表达均无显著性差异(P>0·05)。流式细胞仪检测50例大肠腺癌组织细胞凋亡率显示,在Fas蛋白阳性组中,浸润淋巴细胞FasL表达量与癌细胞凋亡指数呈正相关(P<0·05)。Fas蛋白阴性组中大肠腺癌凋亡指数与浸润淋巴细胞FasL表达无相关性(P>0·05)。结论:①Fas和FasL从正常粘膜上皮到腺瘤至癌变均有上调或下调的表达,推测Fas-FasL系统在大肠粘膜上皮癌变过程中可能起重要作用。②大肠腺癌细胞免疫逃避的机制之一可能是不表达或是低表达Fas。

伴放线放线杆菌诱导T淋巴细胞通过Fas-FasL途径的细胞凋亡的研究

目的 :检测与Aa诱导T淋巴细胞凋亡有关的Fas(CD95 )介导的细胞凋亡途径。方法 :选取 10名全身及牙周组织健康受试者 ,分离外周血单核细胞 (PBMC) ,Aa体外刺激PBMC ,用特殊的单克隆抗体 (Fas、FasL)标记 ,并进行流式细胞仪检测。结果 :Fas和FasL的表达量明显上调。实验组Fas:2 4h - 2 7.2 2 %± 4 .10 ,96h - 6 8.2 6 %± 3.14 ;FasL :2 4h 6 .18%± 1.37,96h - 2 2 .6 4 %± 2 .82。用抗Fas单克隆抗体阻滞Fas-FasL相互作用导致明显的T细胞凋亡减少 ,百分比为 2 2 .72 %± 3.5 4 ,未加抗体的为 5 1.4 7%± 3.75。 (P <0 .0 0 0 5 ,但残余的细胞凋亡活动比阴性对照仍高。结论 :Aa诱导T淋巴细胞主要通过Fas -FasL途径凋亡 ,在细胞凋亡的分子机制上得到了数据证明 。

鼻咽癌患者外周血单个核细胞Fas和FasL的表达及其意义

目的:研究凋亡相关基因Fas和FasL在鼻咽癌患者诱导化疗前后外周血单个核细胞中表达水平的变化,探讨其在鼻咽癌发生、发展中的作用及意义。方法:采用流式细胞仪对38例鼻咽癌患者诱导化疗前后及15例正常健康对照组外周血单个核细胞中的Fas和FasL表达进行检测,并结合临床资料进行分析。结果: ( 1 )鼻咽癌患者外周血单个核细胞中Fas、FasL的表达明显高于正常健康对照组(P<0.05);Ⅲ+Ⅳ期患者的表达明显高于Ⅱ期患者(P<0.05)。(2)T3+4期患者外周血单个核细胞Fas表达明显高于T1+2期患者(P<0.05),而其FasL的表达稍高于T1+2期患者(P>0.05)。(3)N1 期患者的Fas表达明显高于N0 期患者(P<0.05),而其FasL的表达稍高于N0 期患者(P>0.05);N2+3期患者的Fas表达明显高于N1期(P<0 .05),而其FasL表达稍高于N0 期和N1 期(P>0.05)。(4)鼻咽癌患者经诱导化疗后,其Fas表达明显增高(P<0.05),FasL表达稍有增高(P>0.05)。结论:外周血单个核细胞Fas、FasL表达水平与鼻咽癌发生、增殖、局部转移有关,对其进行检测可作为鼻咽癌的诊断及病期判断的辅助指标。

系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞凋亡及Fas、FasL的表达

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞凋亡及Fas、FasL的表达情况。方法分离活动期SLE患者(SLE组)19例和正常者(健康对照组)10例的外周血淋巴细胞，在植物血凝素(PHA)刺激72h后，采用流式细胞仪检测其凋亡及：Fas、FasL的表达。结果SLE组患者外周血淋巴细胞凋亡率明显高于健康对照组(P<0．01)，Fas表达明显多于健康对照组(P<0．01)，FasL表达与健康对照组差异不明显(P>0．05)。结论SLE患者外周血淋巴细胞存在凋亡及凋亡相关蛋白表达的紊乱。

口腔颌面部肿瘤细胞Fas和Apo2.7表达及临床意义

目的探讨口腔颌面部恶性肿瘤细胞凋亡因子Fas和Apo2.7的表达及临床意义。方法对56例不同临床期别及组织学类型的口腔颌面部恶性肿瘤细胞Fas和Apo2.7表达进行了流式细胞学定量研究并进行其分布分析。结果56例口腔颌面部恶性肿瘤Fas及Apo2.7表达含量变化范围分别为12.17%±5.49%和15.12%±7.31%,其中Fas表达含量高于阳性界值者36例,占64.29%;Apo2.7表达含量高于阳性界值者38例,占67.86%。其中Fas和Apo2.7表达同时阳性者34例,占60.71%,同时阴性者14例,占25.00%。不同组织学类型卵巢癌细胞Fas及Apo2.7表达无显著性差异(P>0.05);Fas及Apo2.7表达与组织学分型无显著相关。Fas及Apo2.7表达与临床分期和预后也有一定的关系,Ⅱ及Ⅲ期口腔颌面部恶性肿瘤组织细胞Fas及Apo2.7含量均明显低于Ⅰ期;恶性组肿瘤Fas及Apo2.7表达同时阴性者3年和5年生存率比Fas及Apo2.7表达同时阳性者显著下降。结论对口腔颌面部恶性肿瘤组织细胞Fas及Apo2.7的检测,有助于预测病情进展程度和淋巴结转移的趋势以及评估预后。

苦参碱对宫颈癌HeLa细胞的作用

目的:观察不同浓度的苦参碱对宫颈癌HeLa细胞的作用。方法:浓度分别为0.5,1.0,1.5,2.0 g/L的苦参碱体外培养HeLa细胞24,48,72 h后,分别用MTT法观察苦参碱对HeLa细胞的生长抑制作用、AnnexinV-PI双标染色用流式细胞仪检测苦参碱对HeLa细胞凋亡的影响。结果:不同浓度(0.5,1.0,1.5,2.0 g/L)的苦参碱具有抑制宫颈癌HeLa细胞增殖的作用,呈明显的时间、剂量依赖性。各浓度和时间之间比较具有显著差异性(P<0.01)。FCM检测结果显示苦参碱作用后,细胞的凋亡率增加,呈现随时间和剂量依赖性。各浓度和时间之间比较也具有显著差异性(P<0.01)。结论:苦参碱对人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有明显的抑制作用,能诱导细胞凋亡的凋亡。

高温阻滞HeLa细胞于G_1期并引起G_1期细胞凋亡

目的 探讨高温阻滞 HeLa细胞周期进程及其与细胞凋亡的关系。方法 HeLa细胞经培养增殖后分为37 ℃、40 ℃、43 ℃和45 ℃共4个温度组。每组分别在0 .5、1、2和4 h共 4 个时间点取材, 经 PI染色在流式细胞仪上检测4种温度条件下, 4个时间段时HeLa细胞的凋亡指数和在各细胞周期时相中的指数。结果 37 ℃时, 60%的细胞处于G1期, S期及G2/M期的HeLa细胞分别为17%和18%, 约5%细胞凋亡。40 ℃时, 细胞周期受到抑制,G1期的HeLa细胞明显增加, 达73%, S及G2/M期的细胞分别为9%和15%, 凋亡细胞占3%。43 ℃时, 不但细胞周期受阻, 而且凋亡细胞极明显地增加, 达 19%, G1 期细胞为 61%, S期细胞为 9%, G2/M期细胞为 11%。45 ℃时, 细胞凋亡数和在细胞周期各时相的细胞数与40 ℃时的分布相似。结论 温度升至40 ℃时对HeLa细胞的增殖活动有明显的抑制, 使HeLa细胞滞留于G1期。43 ℃时除了细胞周期受抑制外, 凋亡细胞明显增加, 这可能是由于细胞周期受阻和高温启动了凋亡机制而诱发了细胞凋亡, 凋亡的细胞主要为 G1期的细胞。45 ℃以上的高温对 HeLa细胞的杀伤失去对周期时相的选择性, 均等地杀伤细胞周期各时相的细胞。

白藜芦醇对HeLa细胞蛋白质组影响的研究

[目的]应用双向电泳及质谱技术研究白藜芦醇(Resveratrol,Res)对宫颈癌HeLa细胞蛋白质组的影响。[方法]经磺基罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法筛选对宫颈癌HeLa细胞有效的白藜芦醇浓度,流式细胞仪检测有效白藜芦醇浓度对HeLa细胞周期和凋亡的影响。HeLa细胞经白藜芦醇处理后,提取细胞总蛋白,应用双向电泳技术建立蛋白质组图谱,筛选白藜芦醇处理前后差异在2倍以上的蛋白质作为差异蛋白,进行质谱鉴定和生物信息学分析。[结果]50μmol/L以上浓度白藜芦醇24小时对HeLa细胞的活性产生影响,将细胞阻滞在S期,诱导HeLa细胞的早期凋亡,并呈剂量依赖性。通过差异蛋白质组分析筛选出12个差异蛋白质,包括原肌球蛋白、细胞核糖核蛋白C、锌指蛋白、钙连接蛋白、微管蛋白β、热休克蛋白70、α烯醇化酶、丙酮酸激酶、雌激素受体β、氨基甲酰磷酸合成酶,HeLa细胞经白藜芦醇处理后这些蛋白表达量均增加。[结论]白藜芦醇可能通过参与调节细胞的转移分化、凋亡、能量代谢等过程而起到抗肿瘤作用。

紫杉醇诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的 研究紫杉醇对人宫颈癌Hela细胞的作用。方法 将紫杉醇处理Hela细胞后,用MTT法测定宫颈癌Hela细胞的生长抑制率。光镜下观察细胞凋亡形态的改变。流式细胞仪和原位末端标记技术检测细胞周期及细胞凋亡率,流式细胞仪检测bcl- 2水平,TRAP法测定端粒酶活性的变化。结果 0 0 1～1μmol/L的紫杉醇能引起Hela细胞的凋亡。表现为Gz/M期阻滞,且呈时间依赖性及剂量依赖性。紫杉醇在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调和bcl- 2表达水平下降。结论 紫杉醇诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,并抑制端粒酶活性,bcl- 2参与了紫杉醇诱导的宫颈癌细胞凋亡过程中端粒酶活性的调控。这一机制将为临床治疗提供理论依据。

抗人精浆蛋白单链抗体基因在HeLa细胞中的表达和活性鉴定

目的 在HeLa细胞中表达抗人γ 精浆蛋白 (γ Sm)单链抗体 (scFv)基因 ,并进行亲和活性测定。方法 在已经构建抗人γ SmscFv基因基础上 ,将基因克隆入真核分泌表达载体 pSecTag2 B中 ,并转染HeLa细胞进行表达。表达产物纯化后 ,用流式细胞仪进行亲和活性测定。结果 表达产物经SDS PAGE和Western印迹实验证实为约30ku的特异蛋白条带 ,纯化后经流式细胞仪检测可以特异性地结合PC 3细胞。结论 获得了可与PC 3细胞特异结合的抗人γ SmscFv 。

天然生物膜对长波紫外线氧化损伤Hela上皮细胞的保护作用

①目的 探讨天然生物膜对长波紫外线 (UVA)辐射所致Hela上皮细胞氧化损伤的保护作用及其机制。②方法 建立UVA对Hela上皮细胞氧化损伤模型。Hela上皮细胞实验设计分为 4组 ,未损伤组、UVA损伤对照组、UVA +10 g/L生物膜组、UVA +10 g/L维生素C组。MTT法测定细胞活性 ;流式细胞仪测定细胞的凋亡和死亡率 ;酶法测定抗氧化酶活性和MDA的含量及总抗氧化能力。③结果 离体条件下生物膜能显著增加Hela上皮细胞的活性 ,减少细胞的凋亡和死亡率 ;提高细胞上清液中谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶 (SOD)的活性 ,降低丙二醛 (MDA)的含量 ,且呈量效关系。④结论 生物膜在体外有抗UVA氧化损伤的作用。其作用机制可能是通过提高抗氧化酶含量、清除自由基等 ,以减轻细胞损伤而发挥其保护作用的。