幽门螺杆菌感染通过核因子κB信号通路调控Fas相关因子1表达的相关机制

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染对敲除核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路上IKKβ、p65基因后过表达Fas相关因子1(Fas-associated factor 1,FAF1)胃癌细胞的影响,进一步明确H.pylori致癌的相关机制.方法:构建针对IKKβ、p65的siRNA慢病毒载体(LV-IKKβ-RNAi、LV-p65-RNAi),转染过表达FAF1的HGC-27细胞,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法检测转染前后IKKβ、p65、FAF1 mRNA和蛋白表达.应用CCK8法检测转染后细胞增殖能力的变化.用H.pylori培养滤液感染基因敲除细胞,用RT-PCR和Western blot法检测H.pylori感染前后IKKβ、p65、FAF1 mRNA和蛋白表达.结果:成功将LV-IKKβ-RNAi、LV-p65-RNAi和阴性对照(LV-NC-RNAi)转染入过表达FAF1胃癌细胞,转染后72 h,LV-IKKβ-RNAi和LV-p65-RNAi组IKKβ和p65 mRNA和蛋白表达显著低于LV-NC-RNAi组和未转染组(均P<0.01);转染前后各组间FAF1 mRNA和蛋白表达无显著差异(P>0.05).LV-IKKβ-RNAi组和LV-p65-RNAi组细胞增殖能力升高(P<0.01).H.pylori感染后LV-IKKβ-RNAi组和LV-p65-RNAi组IKKβ、p65 mRNA和蛋白表达与感染前相比无显著差异(P>0.05),而LV-NC-RNAi组和未转染组IKKβ、p65 mRNA和蛋白表达都显著高于感染前(P<0.01).H.pylori感染后LV-IKKβ-RNAi组和LV-p65-RNAi组FAF1 mRNA和蛋白表达与感染前相比无显著差异(P>0.05),而LV-NC-RNAi组和未转染组FAF1 mRNA和蛋白表达显著低于感染前(P<0.01).结论:H.pylori感染可能通过介导NF-κB信号通路下调抑癌因子FAF1的表达,进而导致胃癌的发生.

FAF1 mRNA在胃癌组织中的表达及其与幽门螺杆菌感染的相关性

目的:探讨FAF1 mRNA在胃癌组织中的表达水平及其临床意义以及与幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)感染的相关性.方法:应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对40例胃癌患者及相应正常胃黏膜组织中的FAF1mRNA进行定量检测,以β-actin为内参照.H.pylori采用HE染色、甲苯胺蓝染色和Warthin-Starry银染法进行检测.结果:胃癌组织中FAF1 mRNA的表达明显低于相应正常胃黏膜组织(0.27±0.12vs0.48±0.08,P<0.05).高、中分化的胃癌组织FAF1mRNA表达值明显高于低、未分化的胃癌组织(0.39±0.06vs0.19±0.06,t=9.966,P<0.01).有远处转移的胃癌组织FAF1 mRNA表达值低于无远处转移的胃癌组织(0.25±0.11vs0.34±0.14,t=-2.753,P<0.01),而FAF1 mRNA表达水平在浸润深度、有无淋巴结转移、肿瘤大小及临床分期不同的胃癌组织中无显著性差异.FAF1 mRNA表达量在H.pylori阳性胃癌组织中明显低于H.pylori阴性(0.18±0.06vs0.29±0.12,P<0.05).FAF1表达量在H.pylori阳性正常胃黏膜组织中与H.pylori阴性比较无显著差异(0.49±0.08vs0.47±0.11,t=0.6515,P>0.05).结论:FAF1基因的表达异常可能与胃癌的发生发展有关,H.pylori感染可能通过下调FAF1基因的表达而发挥致癌作用.

Fas相关因子1的研究进展

Fas相关因子1（Fas-associated factor 1,FAF1）是一种细胞内蛋白质,在不同细胞中可存在于细胞核、核仁及核周细胞质中。FAF1是一种进化上保守的蛋白质,约74 kD,由650个氨基酸组成,含有多个功能结构域,包括Fas作用结构域（Fas-interacting domain,FID）、

低氧训练对大鼠骨骼肌缺氧诱导因子-1α蛋白和血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的:探讨低氧训练对大鼠骨骼肌缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的影响。方法:选用健康雄性SD大鼠72只,随机分为9组。采用递增负荷跑台训练及低氧、超低氧两种不同程度的递增低氧刺激,在运动中和运动后给予低氧处理。应用免疫组织化学、原位杂交、计算机显微图像分析等方法,检测HIF-1α、VEGFmRNA在骨骼肌组织中的定位及含量。采用相关分析方法,分析低氧训练骨骼肌HIF-1α蛋白表达对骨骼肌VEGF转录的促进作用。结果与结论:低氧和运动训练可增加骨骼肌组织HIF-1α蛋白和VEGFmRNA含量,低氧训练骨骼肌组织HIF-1α蛋白表达的增加对VEGF基因转录具有促进作用。

Fas、cFLIP及TGF-β_1在宫颈鳞癌组织中的表达及意义

目的研究凋亡相关因子(Fas)、细胞型Fas相关死亡结构域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白(cFLIP)及转化生长因子β_1(TGF-β_1)在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织和宫颈鳞癌组织中的表达,以及与宫颈鳞癌临床病理和分期的关系,探讨3者在宫颈鳞癌发生、发展中的作用,同时也为寻找宫颈癌的诊断和治疗新靶点提供理论依据。方法采用免疫组织化学法检测59例宫颈鳞癌、45例子宫颈上皮内瘤变(CIN)和15例正常宫颈组织中cFLIP、Fas及TGF-β_1的表达,并进行相关临床病理因素分析。结果在宫颈病变由良性到恶性的发展过程中,Fas和TGF-β_1的表达水平逐渐降低(P<0.05),cFLIP的表达水平逐渐升高(P<0.05)。在宫颈鳞癌发展过程中,Fas与cFLIP表达呈负相关(P<0.05),Fas与TGF-β_1的表达呈正相关(P<0.05)。结论Fas、TGF-β_1表达下调,以及cFLIP表达上调在宫颈鳞癌的发生、发展中发挥重要作用。

人胃癌组织FAF1 mRNA和蛋白表达研究

目的:探讨FAF1表达在人胃癌发生发展中的作用。方法:应用实时荧光定量PCR(FQ-RT-PCR)和免疫组化方法,对40例胃癌患者癌组织、癌旁组织及相对正常组织中FAF1mRNA和蛋白的表达进行分析。结果:FAF1mRNA在胃癌组织中的表达水平(0.27±0.12),明显低于在癌旁组织(0.40±0.06)及正常组织(0.48±0.08)中的表达水平(P<0.01),而在癌旁组织中的表达水平明显低于正常组织中的表达水平(P<0.01)。胃癌组织的FAF1蛋白的阳性表达率(37.50%)明显低于癌旁组织(62.50%,P<0.05)和正常组织(72.50%,P<0.01)。结论:FAF1表达的减少在胃癌的发生发展过程中起着重要作用。

白细胞介素-1家族细胞因子等位基因对相关细胞因子的产生及全身感染预后的影响

目的 探讨白细胞介素-1(IL- 1)家族细胞因子基因多态性中等位基因对细胞因子m RNA表达、蛋白质合成以及全身感染预后的影响。方法 选择全身感染患者及健康志愿者各6 0例。分离健康志愿者外周血单核细胞,体外培养并给予脂多糖(L PS)刺激,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)分析细胞因子IL -1α、IL -1β、IL 1ra m RNA表达,酶联免疫吸附法(EL- ISA)检测细胞因子浓度。盐析法提取所有受试者基因组DNA,行IL- 1A(内合子6 ,VNTR) ,IL- 1B(5 11,RFL P)及IL- 1RN (内合子2 ,VNTR)基因多态性分析。结果 与健康志愿者比较,全身感染患者中等位基因IL -1RN2携带者显著增多,而IL- 1A2、IL -1B2及IL 1RN2携带者病死率增加。体外研究表明,等位基因IL RN2较IL 1RN 1携带者外周血单核细胞在受L PS刺激时细胞因子IL- 1ra分泌及m RNA表达显著增加,而IL- 1A、IL- 1B各等位基因不影响相应细胞因子表达。结论 遗传因素可能是导致全身感染患者发生不同程度炎症反应的重要原因。等位基因IL- 1RN2通过上调细胞因子IL- 1ra表达,影响全身感染患者预后,可能是全身感染的高危遗传学标志。

不同浓度幽门螺杆菌对胃癌细胞增殖凋亡及FAF1 mRNA表达的影响

目的研究不同浓度幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)感染对人胃癌细胞HGC-27生长及Fas相关因子1(fasassociated factor 1,FAF1)m RNA表达的影响,探讨Hp致胃癌发生的分子机制。方法人胃癌细胞HGC-27与不同浓度Hp标准菌株NCTC11637共培养24 h,根据感染复数(细胞/细菌比)分为1∶1共培养组、1∶50共培养组、1∶100共培养组、1∶200共培养组及对照组(未与Hp共培养),采用噻唑蓝(MTT)比色法测定0 h、12 h、24 h、48 h的OD值,绘制细胞生长曲线。共培养24 h后以流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(q RT-PCR)技术检测HGC-27细胞FAF1 m RNA的相对表达量,比较不同浓度Hp感染前后FAF1 m RNA表达的变化。结果经革兰氏染色及生化实验证实培养细菌为Hp。与对照组相比,共培养12 h时,1∶50共培养组细胞增殖活性升高(P<0.05),1∶1共培养组、1∶100共培养组及1∶200共培养组细胞增殖活性低于对照组(P<0.05);共培养24 h、36 h、48 h时,各共培养组细胞增殖活性均低于对照组(P<0.05)。共培养24 h时,1∶1共培养组及1∶50共培养组细胞凋亡率及FAF1 m RNA的相对表达量与对照组比较,差异无统计学意义(P均>0.05);1∶100共培养组及1∶200共培养组细胞凋亡率明显升高,FAF1 m RNA的相对表达量较对照组明显降低(P<0.05)。结论 Hp感染可导致胃癌细胞增殖凋亡失衡,下调胃癌细胞FAF1 m RNA的表达,FAF1m RNA的表达量与Hp的感染浓度有关,FAF1 m RNA的表达下调可能是Hp致胃癌发生的机制之一。

补肾健脾化瘀方对去势大鼠股骨骨髓ERRα和PGC-1α mRNA表达的影响

目的探讨补肾健脾化瘀方对去势大鼠股骨骨髓组织中雌激素相关受体α(ERRα)和过氧化物酶体增殖物活化受体γ协同刺激因子-1α(PGC-1α)mRNA表达的影响。方法 40只7月龄SD雌性大鼠随机分成假手术组、模型组、中药组(补肾健脾化瘀方)、阿伦膦酸钠组。治疗12w后,小动物双能X线检测左侧股骨骨密度,HE染色观察胫骨近端骨形态,QPCR检测骨髓组织中ERRα、PGC-1αmRNA表达水平检测。结果模型组骨密度低于假手术组(P<0.05);中药组与阿伦膦酸钠组骨密度高于模型组(P<0.05),而假手术组、中药组与阿伦膦酸钠组之间无统计学差异。与假手术组相比,模型组骨髓组织中ERRαmRNA表达水平上升(P<0.05),PGC-1αmRNA表达水平下降(P<0.05)。予以药物干预后,与模型组相比,中药组骨髓组织中ERRαmRNA表达水平下降(P<0.05),PGC-1αmRNA表达水平上升(P<0.05);而阿伦膦酸钠组骨髓组织中ERRαmRNA表达水平下降(P<0.01),PGC-1αmRNA表达水平虽呈现增高的趋势,但无统计学差异(P>0.05)。结论补肾健脾化瘀方可能是通过提高骨髓组织中PGC-1αmRNA表达水平,降低ERRαmRNA表达水平,从而提高去势大鼠骨密度。

Fas/FasL在宫颈癌组织中的表达及意义

肿瘤不仅是增殖和分化异常的疾病,同时也是凋亡异常的疾病,肿瘤常表现出细胞增生亢进及凋亡减少。Fas/FasL系统是凋亡相关基因[1,2]。Fas,又名CD95或APO-1,属于肿瘤坏死因子受体（TN-FR）和神经生长因子受体（NGFR）家族。人Fas基因定位于第10号染色体长臂2区（10q24.1）,包含8个内含子和9个外显子。Fas配体（Fasl）,又称CD95L,

TRAF1/TRAF2 mRNA在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的研究肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF1/TRAF2)mRNA在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及与SLE疾病活动指数(SLE DAI)是否相关。方法14例正常人和20例活动期SLE患者(SLE活动指数以SLE DAI为判断标准),取静脉血分离PB MC,采用RT PCR半定量法,检测TRAF1 和TRAF2 mRNA表达。结果TRAF1 mRNA在SLE患者PBMC的表达较正常人为高,但与SLE DAI指数无相关性。TRAF2与正常人比较无差异。结论TRAF1/TRAF2基因可能在SLE的发病机制中起重要作用。

芒果苷对淋巴瘤Raji细胞增殖、侵袭及相关基因Tiam1表达的影响

目的:观察芒果苷对人淋巴瘤Raji细胞增殖、侵袭能力及T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)表达的影响,以探讨芒果苷抗淋巴瘤的初步作用机制。方法:用MTT法检测芒果苷对人淋巴瘤Raji细胞增殖的影响,用Transwell侵袭实验检测芒果苷对Raji细胞侵袭能力的抑制作用,用RT-PCR法检测芒果苷作用Raji细胞后对Tiam1的mRNA表达的影响。结果:MTT法发现,不同浓度的芒果苷分别与Raji细胞共同孵育72 h后,芒果苷对Raji细胞增殖抑制作用具有明显的剂量和时间依赖性。Transwell侵袭实验发现,用不同药物浓度的芒果苷作用Raji细胞24 h后,可抑制Raji细胞穿透Transwell小室,随着药物浓度的增加其穿透滤膜的细胞数明显具有剂量依赖性。分别用不同浓度的芒果苷作用Raji细胞24 h后,发现Tiam1的mRNA表达量明显减少,且呈明显的量效关系。结论:芒果苷能抑制人淋巴瘤Raji细胞的增殖和侵袭,其机制可能与同细胞侵袭有密切关系的Tiam1的mRNA表达下调有关。

血浆外泌体LncRNA BLACAT1和E-cadherin mRNA表达水平对乳腺癌早期诊断的价值研究

目的 分析血浆外泌体长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,LncRNAs)膀胱癌相关转录因子1(bladder cancer associated transcript-1,BLACAT1)和E钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA在乳腺癌早期诊断中的价值。方法 对江油市人民医院自2019年1月~2020年9月确诊的96例乳腺癌患者血液样本进行分析,并以75例在该院进行体检的健康女性血液样本作为对照组。qRT-PCR检测血浆外泌体中LncRNA BLACAT1和E-cadherin mRNA表达水平,分析二者表达水平分别与患者临床病理特征之间的关系,Pearson法分析乳腺癌患者血浆外泌体中LncRNA BLACAT1和E-cadherin m RNA表达的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析LncRNA BLACAT1和E-cadherin mRNA对乳腺癌患者诊断的敏感度和特异度。结果 与健康对照者相比,乳腺癌患者血浆外泌体LncRNA BLACAT1表达水平显著升高(2.02±0.57vs 0.99±0.03),差异有统计学意义(t=15.622,P=0.000),而E-cadherin mRNA表达水平显著降低(0.65±0.18 vs1.00±0.04),差异有统计学意义(t=16.514,P=0.000)。血浆外泌体LncRNA BLACAT1表达水平与乳腺癌患者TNM分期、淋巴结转移、分化程度有关(χ^(2)=5.046~12.879,均P<0.05),而与患者年龄、肿瘤大小、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)无关(χ^(2)=0.107~2.959,均P>0.05);E-cadherin mRNA表达水平与乳腺癌患者TNM分期、ER和PR、分化程度有关(χ^(2)=6.485~19.513,均P>0.05),而与患者年龄、肿瘤大小和淋巴结转移无关(χ^(2)=0.142~1.289,均P>0.05)。乳腺癌患者血浆外泌体中LncRNA BLACAT1与E-cadherin mRNA水平呈显著性负相关(r=-0.274,P=0.007)。血浆外泌体中LncRNA BLACAT1和E-cadherin mRNA单独诊断时的曲线下面积(AUC)分别为0.839和0.808,敏感度分别为69.80%和60.00%,特异度分别为89.70%和88.50%,截断值分别为2.08(95%CI:0.759~0.919,P<0.05)和0.48(95%CI:0.719~0.897,P<0.05);联合诊断的AUC为0.941(95%CI:0.896~0.985),敏感度和特异度分别为92.30%和85.60%。结论 血浆外泌体中LncRNA BLACAT1和E-cadherin mRNA联合检测可显著提高乳腺癌患者诊断的敏感度,对早期乳腺癌的诊断和后续治疗具有重要意义,二者有望成为未来乳腺癌诊断的有效指标。

幽门螺杆菌感染对人胃癌细胞HGC-27和人胃黏膜上皮细胞GES-1FAS相关因子1表达的影响

目的 探讨Fas相关因子l（FAF1）基因表达与幽门螺杆菌感染（Hp）及胃癌发生之间的关系.方法 人胃癌细胞株HGC-27、人胃黏膜上皮细胞GES-1 8×105个与Hp标准菌株NCTC11637共培养24h,按细胞/细菌比分为3组：空白对照组、1∶100和1∶200共培养组,每组实验设3个复孔,采用噻唑蓝（MTT）比色法490 nm波长处测量吸光度值计算细胞存活率,流式细胞仪检测l×104个细胞凋亡率,荧光实时定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测细胞FAFl mRNA相对表达量,扩增片段长度为164 bp.结果 HGC-27和GES-1细胞与Hp共培养后,细胞增殖均减少,凋亡率增加.与各自空白对照组比较,FAFl mRNA在HGC-27细胞1∶100和1∶200共培养组表达量明显降低（0.67 ±0.20比0.99 ±0.27,F=11.51,P＜0.05;0.44 ±0.30比0.99±0.27,F=11.51,P＜0.01）;FAFl mRNA在GES-1细胞1∶100共培养组表达量明显升高（1.61 ±0.77比0.99 ±0.41,F=14.45,P＜0.05）,1∶200共培养组表达量明显降低（0.36 ±0.22比0.99±0.41,F=14.45,P＜0.05）.与GES-1细胞空白对照组、1∶100和1∶200共培养组比较,FAF1 mRNA在HGC-27相应各组表达量均明显降低（0.33 ±0.16比0.99 ±0.41,t =4.74,P＜0.01;0.17±0.12比1.08 ±0.53,t=5.28,P＜0.01;0.39 ±0.24比0.98±0.23,t=5.67,P＜0.01）.结论 Hp感染下调FAF1基因表达,导致细胞增殖和凋亡失衡,诱发胃癌的发生.

KLF5转录因子抑制TRAIL诱导PC-3前列腺癌细胞凋亡的分子机制

目的探究通过抑制KLF5表达促进TRAIL诱导的前列腺癌PC-3细胞凋亡的分子机制。方法在TRAIL诱导下,使用MTT实验、流式细胞实验、Western blot及qRT-PCR检测KLF5敲低组与对照组的PC-3细胞在细胞活性、凋亡比例及凋亡相关标志物的表达。结果在PC-3细胞中抑制KLF5表达后,TRAIL诱导下的细胞凋亡明显增加,TRAIL受体DR4、DR5表达上升,凋亡抑制因子c-FLIP蛋白表达下调,但是其mRNA表达水平不变。结论抑制KLF5,可以通过上调TRAIL受体、下调c-FLIP蛋白表达的途径,促进TRAIL诱导的前列腺癌PC-3细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。使用小干扰RNA或小分子药物抑制KLF5表达,可能是潜在的激素非敏感前列腺癌治疗手段。

肿瘤坏死因子α介导肝细胞凋亡其相关死亡区蛋白及mRNA的表达

目的 研究凋亡调节基因 Ｆａｓ相关死亡区蛋白（ＦＡＤＤ） ｍＲＮＡ及蛋白在肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ α）介导的凋亡肝细胞中的表达及意义。方法 尾静脉注射ＴＮＦα于Ｄ－氨基半乳糖（ＧａｌＮ）致敏的ＢＡＬＢ／ｃ／小鼠，造成暴发性肝衰竭模型，用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记技术、电镜及琼脂糖凝胶电泳检测肝组织ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ观察肝细胞凋亡，分别用免疫组织化学和ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＦＡＤＤ ｍＲＮＡ和蛋白的表达情况。结果ＴＮＦ α可介导ＧａｌＮ致敏小鼠肝细胞凋亡、坏死，最终肝功能衰竭死亡，细胞凋亡率分别为 ０（１．５ｈ）， ０．３％（３．５ｈ），３．１５％（６ｈ）和３．１９％（９ｈ），肝组织中ＦＡＤＤ蛋白表达阳性率分别为０、２％（１．５ｈ），３．３％（３．５ ｈ），１４．２％（６ｈ）和１６．７％（９ｈ），各时间点ＦＡＤＤ ｍＲＮＡ表达的相对单位（ＦＡＤＤ积分值／β－ａｃｔｉｎ积分值）不同，分别为０．４８（正常对照组）、０．６４（３．５ ｈ），０．５９（６ｈ）和０．６５（９ｈ）。结论 ＴＮＦα可通过上调ＦＡＤＤ表达引发肝细胞凋亡的级联过程。

糖皮质激素治疗反应性与丝切蛋白-1 mRNA表达水平的相关性

糖皮质激素（简称激素）抵抗性哮喘（SRA）属于难治性哮喘范畴,是临床医师面临的一大难题.丝切蛋白-1（cofilin-1）作为肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白（ADF/cofilin）[1]家族的一员,除了具有肌动蛋白解聚因子等作用外,还可以影响激素受体的分布和功能,SRA患者外周血丝切蛋白-1的表达明显比激素敏感性哮喘（SSA）患者高,这提示其作为激素治疗反应性预测因子的可能.