死亡结构域相关蛋白的核-质定位对乳腺癌MCF-7细胞功能的影响

目的研究死亡结构域相关蛋白(death domain-associated protein,DAXX)在乳腺癌细胞MCF-7中的表达及核-质定位,并探讨这两者对MCF-7细胞功能的影响。方法通过构建LV-DAXX-RNAi-GFP干扰与LV-DAXX-GFP过表达慢病毒质粒,转染MCF-7细胞,敲低和过表达DAXX。采用核-质分离法与免疫荧光法验证DAXX在MCF-7细胞中的表达与核-质定位,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,MTT法检测细胞增殖情况。结果核-质分离法与免疫荧光法均证实DAXX主要定位在MCF-7细胞核,转染LV-DAXX-GFP慢病毒质粒主要上调了MCF-7细胞质内DAXX的表达,而转染LV-DAXX-RNAi-GFP慢病毒质粒则主要下调了DAXX在MCF-7细胞核内的表达;流式细胞术证实下调DAXX的核内表达可以使MCF-7细胞凋亡率上升,细胞增殖受抑,并将细胞阻滞在S期,而上调DAXX的细胞质内表达对MCF-7的细胞凋亡、细胞周期和细胞增殖均无显著影响。结论DAXX在乳腺癌MCF-7细胞中主要定位在细胞核,DAXX表达于细胞核或者细胞质可能对MCF-7细胞功能有着相反的作用。

肺腺癌转移相关转录本1、Fas相关死亡结构域蛋白、雌激素相关受体α在乳腺癌中的表达及与患者临床分期和预后的关系

目的探讨肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)、Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)、雌激素相关受体α(ERRα)在乳腺癌中的表达及与患者临床分期和预后的关系。方法选取122例乳腺癌患者,取其乳腺癌组织及相应癌旁组织,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MALAT1的相对表达量,免疫组化法检测FADD、ERRα蛋白的表达情况。比较不同临床分期及预后乳腺癌患者乳腺癌组织中MALAT1、FADD、ERRα的表达情况。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估MALAT1、FADD、ERRα单独及联合检测对乳腺癌患者预后的预测价值。结果乳腺癌组织中MALAT1的相对表达量、ERRα阳性表达率均明显高于癌旁组织(P﹤0.01),FADD阳性表达率明显低于癌旁组织(P﹤0.01)。Ⅲ~Ⅳ期乳腺癌患者乳腺癌组织中MALAT1的相对表达量、ERRα阳性表达率均明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P﹤0.01),FADD阳性表达率明显低于Ⅰ~Ⅱ期患者(P﹤0.01)。随访1年,死亡23例,生存99例,生存率81.15%(99/122),死亡乳腺癌患者乳腺癌组织中MALAT1的相对表达量、ERRα阳性表达率均明显高于生存患者(P﹤0.01),FADD阳性表达率明显低于生存患者(P﹤0.01)。ROC曲线显示,MALAT1、FADD、ERRα联合检测预测乳腺癌患者预后的AUC为0.872(95%CI:0.813~0.941),高于各指标单独检测。结论MALAT1、FADD及ERRα在乳腺癌组织中异常表达,可能与患者临床分期、预后有关,上述因子联合检测对乳腺癌患者预后的评估价值较高。

雌激素抑制Fas相关死亡结构域蛋白保护缺血性脑损伤

目的:研究缺血性皮质Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)mRNA和蛋白表达,以探讨雌激素神经保护作用的分子机制。方法:研制卵巢切除小鼠雌激素替代模型;一侧大脑中动脉线栓(MCAO)小鼠模型;缺血2 h再灌6 h后取两侧大脑皮质,用RT-PCR、Western blot等方法观察其FADD mRNA和蛋白水平、Caspase-3活性及其雌激素的影响。结果:①雌激素抑制缺血侧皮质升高的FADD mRNA[(49.67+0.68)%vs(67.36±0.2)%,P<0.01]和蛋白表达水平[(37.50±1.68)%vs(67.46+1.41)%,P<0.01],具有显著性统计学意义。②与正常侧相比,缺血侧皮质Caspase-3活性增强(45175±601vs35993±643,P<0.01),雌激素抑制其活性(39 556±432vs45 175±601,P<0.05)。结论:雌激素可部分抑制FADD保护缺血性脑损伤。

股骨颈骨折后不同时期股骨头内细胞凋亡与Fas相关死亡结构域蛋白的表达

目的:研究股骨颈骨折后的不同时期股骨头软骨细胞、骨细胞凋亡以及Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)的表达。方法:采用光镜观察、免疫组织化学和原位末端标记法对31例新鲜股骨颈骨折(新鲜骨折组)、21例陈旧股骨颈骨折(陈旧骨折组)、28例股骨颈骨折后坏死(坏死组)患者的股骨头骨细胞和软骨细胞进行组织学观察、FADD蛋白及细胞凋亡检测。结果:3组患者的标本均可见不同程度的软骨、骨细胞空陷窝化、FADD的表达及凋亡。其中,坏死组软骨细胞FADD蛋白的表达及细胞凋亡(分别为0.3176±0.0413和22±6)较新鲜骨折组和陈旧骨折组明显增强,差异有统计学意义(P<0.05),陈旧骨折组(分别为0.1338±0.0278和8±2)与新鲜骨折组(分别为0.1046±0.0215和6±2)比较差异无统计学意义。陈旧骨折组骨细胞FADD蛋白的表达及细胞凋亡(分别为0.2515±0.0379和34±7)与新鲜骨折组(分别为0.1923±0.0314和25±5)比较差异无统计学意义,与坏死组(分别为0.4584±0.0756和50±9)相比差异有统计学意义(P<0.05);新鲜骨折组骨细胞FADD蛋白的表达及细胞凋亡较坏死组明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:FADD的表达与股骨颈骨折后软骨细胞、骨细胞的凋亡关联密切,对于股骨颈陈旧骨折如能及时正确地进行保头治疗,可以减少股骨头坏死的发生。

非小细胞性肺癌中Fas相关死亡结构域蛋白的表达及意义

目的 :探讨Fas相关死亡结构域蛋白 (Fas associateddeathdomainprotein ,FADD)在非小细胞性肺癌(non smallcelllungcancer,NSCLC)中的表达及意义。方法 :免疫组化SP法检测 6 2例NSCLC及 1 3例癌旁正常肺组织FADD蛋白表达 ,TUNEL法检测NSCLC中癌细胞凋亡。结果 :NSCLC中 ,FADD蛋白阳性表达率为 80 .6 %(5 0 / 6 2 ) ,低于正常肺组织 (1 0 0 % ,1 3/ 1 3) ,但两者差异无显著性 (χ2 =1 .73,P >0 .0 5 )。癌组织中FADD表达多呈中度或强阳性 (36 / 6 2 ) ,正常肺组织FADD表达多呈弱阳性 (1 1 / 1 3) ,癌组织FADD表达程度高于非癌肺组织 (χ2 =7.84 5 ,P <0 .0 5 )。NSCLC中FADD表达与肿瘤的分化程度有关 ,低分化的肿瘤FADD表达减少 (P <0 .0 5 ) ,但与患者性别、年龄、肿瘤分期及是否转移无关 (P >0 .0 5 )。所有标本均可检测到癌细胞的凋亡 ,FADD表达水平与癌细胞凋亡程度之间呈显著正相关 (rs=0 .380 ,P <0 .0 1 )。结论 :FADD表达异常在NSCLC的发展中可能起着重要作用 。

Fas相关死亡结构域蛋白荧光真核表达载体的构建及其鉴定

目的:构建真核表达载体pEGFP-N1-FADD并检测其在结肠癌细胞株SW480中的表达.方法:设计人FADD特异性引物,从人结肠癌细胞SW480细胞提取总RNA,通过RT-PCR方法获取人FADD全长cDNA,定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1.应用PCR、酶切和DNA测序进行鉴定,确认后转染人结肠癌细胞SW480.G418抗性筛选获得FADD稳定表达细胞克隆,应用Westernblot检测FADD的表达水平.结果:测序及酶切鉴定证明获得人全长FADD基因,FADD基因正确插入pEGFP-N1中,在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白在SW480细胞中的稳定表达,Westernblot检测结果显示稳定转染pEGFP-N1-FADD的细胞FADD表达水平增高,是未转染细胞的2.34倍.结论:成功构建真核表达载体pEGFP-N1-FADD,并且在SW480细胞中稳定表达.

稽留流产绒毛组织中Fas相关死亡结构域蛋白和Livin的表达

目的:探讨稽留流产绒毛组织中Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)及凋亡抑制蛋白家族成员Livin的表达。方法:采用免疫组化和RT-PCR方法检测30例稽留流产患者绒毛组织中FADD及Livin蛋白和mRNA的表达,并以30例正常早孕绒毛组织作对照。结果:稽留流产绒毛组织中FADD蛋白阳性表达率和mRNA相对表达量均高于对照组(86.7%vs60.0%,χ2=5.455,P=0.020;(1.195±0.264)vs(0.685±0.274),t=7.221,P=0.002)。稽留流产绒毛组织中Livin蛋白阳性表达率和mRNA相对表达量均低于对照(63.3%vs90.0%,χ2=5.963,P=0.015;(0.933±0.188)vs(1.630±0.305),t=10.660,P<0.001)。结论:FADD过表达和Livin低表达诱导的滋养层细胞凋亡的增加可能参与了稽留流产的发生。

Fas相关死亡结构域蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其与癌细胞凋亡的关系

目的研究Fas相关死亡结构域(FADD)蛋白在膀胱移行细胞癌(TCCB)中的表达,并探讨其与TCCB中癌细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化方法SP法检测68例TCCB及13例正常膀胱黏膜组织FADD蛋白表达。原位末端标记(TUNEL)法检测TCCB细胞的凋亡。结果正常膀胱黏膜FADD呈阳性表达,在TCCBⅠ级(G1)、Ⅱ级(G2)、Ⅲ级(G3)和浅表性(Tis～T1)、浸润性(T2～T4)肿瘤的阳性表达率分别为84.6%、48.3%、19.2%和65.6%、25.0%;FADD的阳性率在3组不同组织学分级的TCCB中差异有显著性意义(P<0.05),在两组不同临床分期的TCCB中差异有非常显著性意义(P<0.01),在复发组与未复发组分别为36.8%和53.3%,差异无显著性意义(P>0.05)。所有标本均可检测到细胞的凋亡,FADD蛋白表达水平与癌细胞凋亡程度呈显著正相关(rs=0.49,P<0.01)。结论FADD表达异常在TCCB的发展中可能起着重要作用,FADD表达水平与TCCB细胞凋亡密切相关。

膀胱尿路上皮癌Fas相关死亡结构域蛋白表达及意义

目的研究Fas相关死亡结构域(FADD)蛋白在膀胱尿路上皮癌(BUC)组织的表达,并探讨其与肿瘤生物学行为之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测68例BUC及13例正常膀胱黏膜组织FADD蛋白表达。原位杂交法检测其中34例BUC组织FADD mRNA表达水平。结果正常膀胱黏膜FADD蛋白呈阳性表达。FADD的阳性率在不同组织学分级、不同临床分期的BUC组织中差异均有极显著性(χ2=15.38、11.34,P<0.01);复发组与未复发组FADD的阳性率分别为36.84%和53.33%,差异无显著意义(2χ=1.85,P>0.05)。BUC组织中FADD mRNA阳性率为44.12%,FADD蛋白阳性率为47.06%,两者差异无统计学意义(χ2=0.06,P>0.05)。结论FADD表达异常在BUC的发展中可能起着重要作用,FADD阳性表达与BUC病理分级、浸润关系密切,但与BUC复发无关。

Fas相关死亡结构域蛋白在乳腺癌中表达的临床病理研究

目的探讨Fas相关死亡结构域蛋白在乳腺癌中表达的临床病理特点。方法选择2013年2月~2017年2月我院收治的行乳腺肿瘤手术治疗患者的人体石蜡包埋组织标本148例,其中乳腺良性病变26例(A组),无淋巴结转移乳腺癌58例(B组),淋巴结转移乳腺癌64例(C组)。所有标本均实施免疫组化检查,分析Fas相关死亡结构域蛋白表达。结果 Fas相关死亡结构域蛋白表达于乳腺癌癌细胞胞浆内和乳腺良性病变上皮细胞内。B组中Fas相关死亡结构域蛋白表达较弱,染色范围较小,染色深度均较低;A组、C组中Fas相关死亡结构域蛋白表达较弱,染色深度强。A、B、C三组Fas相关死亡结构域蛋白阳性表达率分别为88.5%(23/26)、46.6%(27/58)、65.6%(42/64),A组高于B组、C组,差异有统计学意义(P<0.05)。在乳腺癌患者中,淋巴结转移、确诊年龄与Fas相关死亡结构域蛋白表达有关(P<0.05),但临床分期、组织学类型与Fas相关死亡结构域蛋白表达无关(P>0.05)。结论 Fas相关死亡结构域蛋白与乳腺癌淋巴结转移、确诊年龄有着密切的关系,但与临床分期、组织学类型无关,需引起高度关注。

Fas相关死亡域蛋白在增生性瘢痕组织中原位表达及意义

目的探讨Fas相关死亡域蛋白(FADD)在增生性瘢痕(HS)各个时期的表达变化以及与HS演变的关系。方法采用原位杂交与图像分析系统相结合的方法,定量观察FADD在HS各个时期的表达变化。结果FADD在HS成熟期的表达量是增殖期的2倍,是消退期的5倍;FADD阳性信号主要见于表皮棘层、真皮网状层,以及部分血管。结论FADD表达与增生性瘢痕演变密切相关。

死亡结构域相关蛋白及其在宫颈病变中的研究进展

宫颈癌对妇女健康构成严重威胁,人乳头瘤病毒感染与宫颈病变及宫颈癌的发生密切相关。关于宫颈癌发生发展的机制仍在研究中。近年研究发现一种多功能核蛋白,即死亡结构域相关蛋白(death domain associated protein,Daxx),其与细胞内蛋白或病毒蛋白相互作用,参与调节细胞凋亡、转录调控、抗病毒等细胞活动,在不同途径中发挥不同的生理或病理作用。通过对Daxx功能及其作用机制的研究有助于进一步阐明宫颈癌发生发展的机制,有助于发现新的预防和治疗方法。综述Daxx的一般特性和研究现况及其在宫颈病变的研究进展。

Fas相关死亡域蛋白在肝细胞凋亡研究中的意义

Fas相关死亡域蛋白 (FADD)为近年发现的凋亡相关蛋白 ,文章从介绍FADD的基因组结构、蛋白质分子结构、基本生物功能等入手 ,进一步概括总结与FADD相关的肝细胞凋亡的研究进展 。

Fas相关死亡域蛋白表达与增生性瘢痕演变的关系(英文)

目的探讨Fas相关死亡域蛋白(FADD)在增生性瘢痕(HS)各个时期的表达变化以及与HS演变的关系。方法采用原位杂交与图象分析系统相结合的方法,定量观察FADD(2份,取自同一部位样本)在HS增殖期、成熟期和消退期的表达分布及表达量。结果FADD在HS成熟期的表达量犤面度(9.36±0.92),平均光密度(1154±68)〗是增殖期犤面度(4.72±0.35),平均光密度(552±32)〗的2倍,是消退期犤面度(1.88±0.12),平均光密度(218±16)〗的5倍;FADD阳性信号主要见于表皮棘层、真皮网状层,以及部分血管。结论FADD表达与增生性瘢痕演变密切相关。

死亡结构域相关蛋白和E2启动子结合因子在儿童急性白血病中的表达及其临床意义

目的探讨死亡结构域相关蛋白(Daxx)和E2启动子结合因子-1(E2F1)在急性白血病(AL)患儿骨髓细胞中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(streptavidin peroxidase,SP)法,分别检测40例AL患儿和20例非恶性血液病儿童Daxx和E2F1的表达情况。结果 (1)AL组患儿骨髓细胞Daxx和E2F1阳性表达率分别为40%和57.5%,均显著高于对照组的10%(P<0.05)和20%(P<0.01);Daxx表达水平在急性髓细胞白血病组(58.8%)明显高于急性淋巴细胞白血病组(26.1%,P<0.05);E2F1在两组患儿中的阳性表达率差异无显著性(P>0.05)。(2)Daxx表达阴性者的完全缓解率高于阳性者(P<0.05),但E2F1表达阳性者与阴性者的完全缓解率相比差异无显著性(P>0.05)。(3)AL患儿Daxx与E2F1的表达水平有相关关系(P<0.05)。结论 Daxx和E2F1在儿童急性白血病中高水平表达,在儿童急性白血病的发生发展过程中可能存在某种协同作用,可能与儿童AL的疗效及预后相关。

Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白在结直肠癌中的表达意义

目的探讨结直肠癌Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(FLIP)(S)mRNA的表达水平及其临床意义。方法建立检测FLIP(S)mRNA荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR),用该方法检测结直肠癌组织及其癌旁正常组织FLIP(S)mRNA表达水平。结果 FLIP(S)mRNA在结直肠癌组织和癌旁正常组织都有表达,在结直肠癌组织表达水平为0.23±0.19,明显高于癌旁正常组织0.13±0.10(P<0.05)。FLIP(S)mRNA表达水平与结直肠癌组织学分级密切相关(P<0.05),肿瘤分化程度越低,FLIP(S)mRNA的表达水平越高。结论 FLIP(S)在结直肠癌组织中表达升高;在分化越低组织中其表达水平越高;为揭示结直肠肿瘤的发生、发展提供新的理论依据,并为结直肠癌的有效治疗提供新的思路。

死亡结构域相关蛋白的研究进展

死亡结构域相关蛋白（death domain-associated protein，DAXX）是一种多功能的核蛋白，可定位于核质、核仁、胞质、早幼粒细胞白血病蛋白核体和异染色质。DAXX能与Fas死亡结构域结合，激活c-Jun氨基端激酶通路诱导的细胞凋亡。DAXX也具有抗凋亡作用。DAXX不仅在凋亡通路中扮演非常重要的角色，同样也参与到多种疾病如白血病、肿瘤的调控等，在其中发挥重要的作用。

阿霉素诱导Jurkat白血病细胞凋亡及上调Fas配体和Fas相关死亡域(英文)

目的研究阿霉素诱导白血病细胞凋亡的剂量及时间关系,探索其相关的分子机制。方法分别以0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L的阿霉素处理人类Jurkat白血病细胞61、22、44、8 h。其中一份样本在加入0.2 mg/L阿霉素前用zVAD-fmk(苄氧羰-缬氨酰-丙氨酰-天冬氨酰-氟甲基酮)预处理。应用AnV/PI双染细胞,在流式细胞仪上分析AnV/PI双阳性的凋亡细胞。采用Western Blot技术检测FasL和FADD(Fas相关死亡域)的表达。结果6 h时所有剂量的阿霉素诱导的凋亡细胞无显著差异(P>0.05),在12 h,只有1.0 mg/L诱导细胞明显凋亡。当细胞与0.2和0.5 mg/L的阿霉素共同培养24 h或36 h,观察到调亡细胞显著增加(P<0.001)。在zVAD-fmk存在的情况下,当细胞与阿霉素一同培养时,由阿霉素诱导的细胞凋亡完全受到抑制(P<0.001)。随着阿霉素作用时间增加,FasL和FADD表达水平相应增加。结论在阿霉素诱导的白血病细胞凋亡中,阿霉素以剂量和时间依赖方式诱导细胞凋亡;上调FasL可能启动FasL信号通路的激话,而caspase是最终的执行者。

替米沙坦对猪心动过速性心肌病心肌细胞Fas/FasL、FADD、Bcl-2/Bax、caspase-3蛋白的影响

目的 研究替米沙坦对猪心动过速性心肌病（tachycardiomyopathy,TCM）心肌细胞Fas/FasL、Fas相关死亡结构域（Fas-associated death domain,FADD）、Bcl-2/Bax、caspase-3蛋白的影响,探讨替米沙坦对心肌细胞的保护作用及其作用机制.方法 18头家猪随机分为3组（每组n=6）：快速右心房起搏组（TCM组）,实验猪植入永久起搏器,起搏频率500次/min;快速右心房起搏加替米沙坦组（TCM＋TS组）,起搏器植入前3天至起搏2周后,每日给予替米沙坦（1.5 mg·kg-1·d-1）混于饲料中喂服;对照组,实验猪未植入起搏器也未服药.每周记录1次心电图,实验前后经胸心脏超声观测猪左心室舒张末期内径（LVEDD）和左心室射血分数（LVEF）.2周后处死动物,取左心室组织,Western blot技术检测Fas/FasL、FADD、Bcl-2/Bax、caspase-3蛋白含量,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测fas、caspase-3 mRNA转录水平.结果 TCM组较对照组左心室心肌细胞Fas/FasL、FADD、Bcl-2/Bax、caspase-3蛋白表达量均明显增高（P〈0.05）,TCM＋TS组较TCM组Fas/FasL、FADD、Bcl-2/Bax、caspase-3蛋白表达量均明显降低（P〈0.05）.TCM组较对照组左心室心肌细胞fas及caspase-3 mRNA表达明显增高（P〈0.05）,TCM＋TS组较TCM组fas及caspase-3 mRNA表达明显降低（P〈0.05）.Fas与caspase-3蛋白表达呈明显正相关（r=0.987,P〈0.01）;fas与caspase-3 mRNA表达呈明显正相关（r=0.950,P〈0.01）.结论 替米沙坦通过抑制Fas/FasL通路相关蛋白的表达,进而减少细胞凋亡,延缓TCM病情进展.