复发性流产患者子宫蜕膜细胞凋亡蛋白Fas、抑制凋亡蛋白Bcl-2表达的相关性研究

目的:探讨子宫蜕膜细胞凋亡蛋白Fas、抑制凋亡蛋白Bcl-2与复发性流产患者的相关性。方法:选择20例复发性流产患者作为研究组,以下称RAS组,同期正常计划外受孕者20例作为对照组。采用免疫组织化学方法测定各组子宫蜕膜细胞Fas、Bcl-2蛋白的表达。根据阳性表达率和表达强度进行量化评分,并进行相关性分析。结果:RAS组Fas的表达为(4.67±0.59)明显高于对照组(1.31±0.66)(P<0.001),而Bcl-2的表达为(1.76±0.51)明显低于对照组(4.89±0.41)(P<0.001),且两者的表达呈明显负相关(r=-0.61,P<0.05)。结论:①子宫蜕膜细胞Bcl-2低表达、Fas高表达与复发性流产患者的发生有关。②Fas与Bcl-2在子宫蜕膜细胞中的表达失衡可能是复发性流产患者发生的原因之一。

miR-9-5p靶向TIMP2诱导多发性骨髓瘤细胞自噬和凋亡的机制

目的探究miR-9-5p和组织金属蛋白酶抑制因子2(TIMP2)相互作用对多发性骨髓瘤(MM)细胞自噬和凋亡的影响机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测初诊MM和复发MM各9例患者骨髓样本中miR-9-5p和TIMP2的表达水平,分析两者表达水平的相关性。U266细胞分为miR-对照组、miR-9-5p组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-TIMP2组、miR-9-5p+pcDNA3.1组、miR-9-5p+pcDNA3.1-TIMP2组。采用流式细胞术、免疫荧光染色、蛋白质印迹实验检测过表达miR-9-5p和TIMP2对U266细胞自噬和凋亡的影响;双萤光素酶报告实验验证miR-9-5p和TIMP2的靶向关系。结果与初诊MM患者相比,复发MM患者miR-9-5p表达水平升高,TIMP2表达降低;miR-9-5p和TIMP2表达水平呈负相关(P<0.05)。与miR-对照组相比,miR-9-5p组MAP1LC3B-Ⅱ的表达水平降低,MAP1LC3B-Ⅰ和SQSTM1的表达水平增加,细胞凋亡率降低(P<0.05)。与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-TIMP2组MAP1LC3B-Ⅱ的表达水平升高,MAP1LC3B-Ⅰ和SQSTM1的表达水平降低,细胞凋亡率增加(P<0.05)。生物信息学和双萤光素酶报告实验证实TIMP2是miR-9-5p的靶基因。结论miR-9-5p靶向TIMP2抑制MM细胞的自噬和凋亡,从而促进MM的发生发展。

MDM2抑制剂RG-7388诱导弥漫性大B淋巴瘤细胞凋亡和周期阻滞

目的探讨MDM2抑制剂RG-7388对弥漫性大B淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法用2、4和8μmol/L RG7388处理DLBCL细胞株SUDHL2和HBL1,CCK8法和EdU法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染和Caspase 3/7-Glo^(TM)酶活法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,蛋白质印迹法检测细胞周期和凋亡相关蛋白表达变化。结果RG7388抑制SUDHL2和HBL1细胞的IC50分别为3.36和3.76µmol/L,且RG7388的抑制作用呈剂量依赖性。不同浓度RG7388处理SUDHL2和HBL1细胞,G_(1)期细胞和凋亡细胞比例均显著高于对照组(均P<0.05)。随着RG7388浓度增高,Caspase 3/7酶活性逐渐增加,p53、p27、p21、PARP表达增加,Mcl-1和Bcl-x_(L)表达下调(均P<0.05)。结论MDM2抑制剂RG7388抑制DLBCL细胞增殖,通过p53通路引起G_(1)期细胞阻滞并诱导细胞凋亡。

儿童神经母细胞瘤中FAIM2的表达及临床意义

目的:探索Fas细胞凋亡抑制分子2(FAIM2)在儿童神经母细胞瘤中的表达及与其临床病理因子的关系。方法:筛选2020年1月—2022年12月就诊于山东大学齐鲁医院并经病理检查证实为神经母细胞瘤的标本33例,收集其临床资料并随访其预后情况,通过免疫组织化学法检验FAIM2蛋白在33例神经母细胞瘤组织内的表达情况,研究FAIM2的表达与神经母细胞瘤患者各项临床及病理学因子的关系,分析其对预后的影响。结果:在神经母细胞瘤组织中FAIM2蛋白的表达与肿瘤转移有相关性,其中有转移的神经母细胞瘤中FAIM2表达低于无转移病例,差异有统计学意义(P<0.05);而FAIM2的表达与肿瘤组织学类型、肿瘤大小、发病年龄、临床危险度、ki-67阳性指数、乳酸脱氢酶及神经元特异性烯醇化酶水平无明显相关。FAIM2阴性表达的神经母细胞瘤生存时间短于阳性,差异有统计学意义(P<0.05);FAIM2阴性表达和骨髓浸润是影响神经母细胞瘤患者预后的危险因素(P<0.05)。结论:FAIM2在有转移的神经母细胞瘤病例中表达水平降低,并且与患者预后密切相关,提示其可能是参与儿童神经母细胞瘤发展和转移的重要分子生理学机制。

一氧化氮和Fas在T-2毒素诱导的软骨细胞凋亡中的作用研究

目的探讨T-2毒素致软骨细胞凋亡与一氧化氮（NO）和Fas凋亡途径的关系。方法采用MTT法检测T-2毒素对软骨细胞存活率的影响；Annexin V／PI法和电镜观察研究T-2毒素致人软骨细胞凋亡的作用；用Griess重氮化法，测定T-2毒素作用于软骨细胞培养上清液中NO含量；Western Blotting检测T-2毒素对人软骨细胞表达一氧化氮合酶（iNOS）和Fas蛋白的影响。统计分析T-2毒素诱导人软骨细胞凋亡与其分泌NO、iNOS和Fas蛋白的相关性。结果T-2毒素在浓度为1～2000ng／mL的范围内，对软骨细胞存活率的作用呈较典型的浓度依赖关系和时间依赖关系，而且随着作用时间的延长，浓度依赖关系更为明显；T-2毒素可引起软骨细胞发生凋亡的典型电镜形态改变，并使早期凋亡率和晚期凋亡率明显增加，在一定范围内呈浓度依赖性；T-2毒素刺激软骨细胞分泌NO和表达iNOS蛋白；T-2毒素使凋亡相关蛋白Fas表达增多；软骨细胞分泌NO和表达iNOS蛋白和Fas蛋白量与T-2毒素诱导人软骨细胞凋亡率均有正相关性。结论T-2毒索引起的软骨细胞凋亡与T-2毒素刺激软骨细胞分泌NO和表达iNOS蛋白增多有关，并与凋亡相关蛋白Fas表达增多有关。

全脑缺血再灌注后Fas、TNFR1蛋白的表达与细胞凋亡的关系及Bcl-2过度表达对其的影响

目的通过观察全脑缺血再灌注后大鼠海马回Fas、TNFR1蛋白的表达与细胞凋亡及Bcl-2过度表达时对其表达的影响,探讨全脑缺血再灌注后Bcl-2过度表达对Fas、TNFR1介导凋亡的影响及可能机制。方法健康雄性SD大鼠90只,随机分成3组:假手术组(PO组)、缺血再灌注组(IR组)和Bcl-2过度表达组(BT组)。采用4-VO法建立SD大鼠全脑缺血再灌注模型,应用HE染色、免疫组化和TUNEL方法检测Bcl-2、Fas和TNFR1在CA1及CA3区的表达及细胞凋亡。结果 HE染色显示:IR组CA1区缺血48 h后神经元数目减少,排列紊乱,间质水肿;CA3区少数细胞结构不清。BT组变化不明显。免疫组化染色显示:Fas在IR组中CA1区6 h达高峰,BT组强度弱于IR组(P<0.05)。TNFR1在IR组CA1区24 h达到高峰,BT组强度弱于IR组(P<0.05)。两者PO组CA1、CA3区表达为阴性。细胞凋亡检测:IR组在缺血再灌注后6h,CA1、CA3区凋亡细胞开始增加,24～48 h为高峰。BT组弱于IR组(P<0.05)。结论 Fas和TNFR1蛋白在全脑缺血再灌注后海马CA1区及CA3区都有表达,只是表达强弱及细胞分布不同,提示死亡受体参与了全脑缺血再灌注损伤。Bcl-2过度表达能减弱Fas和TNFR1蛋白在全脑缺血再灌注后的表达,明显减少凋亡细胞数,提示Bcl-2过度表达对全脑缺血再灌注损伤有保护作用。

温心胶囊对大鼠实验性缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Fas蛋白表达的影响

目的 :探讨临床有效中药复方温心胶囊防治冠心病心肌缺血的分子作用机制。方法 :采用盐酸异丙肾上腺素连续多点皮下注射制备大鼠心肌缺血模型。运用透射电镜技术及TUNEL法 ,观察温心胶囊对缺血损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响 ,并运用免疫组化的方法观察其对细胞凋亡相关基因Bcl 2、Fas蛋白表达的影响。结果 :异丙肾上腺素所致心肌缺血损伤可明显诱导大鼠心肌细胞发生凋亡 ,显著引发Fas基因蛋白表达增强 ,并轻度引发Bcl 2基因蛋白表达增强 ,温心胶囊可显著下调Fas基因的蛋白表达 ,上调Bcl 2基因的蛋白表达 ,明显抑制和阻断心肌细胞发生凋亡。结论 :通过调节缺血心肌Bcl 2、Fas基因的蛋白表达从而抑制和阻断细胞凋亡的发生 ,可能是中药复方温心胶囊防治冠心病心肌缺血损伤的分子作用机制之一。

Fas途径参与大黄酸诱导HK-2细胞凋亡

探讨大黄酸对人肾小管上皮细胞系HK-2的毒性作用及毒性作用机制。以Hg Cl2为阳性对照,通过MTT法检测细胞活力,LDH释放实验检测细胞毒性,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,Real-Time q PCR检测Fas,Fas L,FADD,caspase-3,caspase-8的mRNA表达,Western blot检测Fas,Fas L,胞浆Cyt-c,caspase-3,caspase-8,caspase-9蛋白表达。实验结果显示:大黄酸可剂量依赖性地抑制HK-2细胞活力,增加LDH释放和细胞凋亡率,使Fas,Fas L,FADD,caspase-3,caspase-8的mRNA表达显著性上调,Fas,Fas L,胞浆Cyt-c蛋白表达量显著升高,caspase-8原型表达显著降低,caspase-3,caspase-8裂解片段表达显著增加,caspae-9表达无变化。结果证明:大黄酸体外对HK-2细胞具有毒性作用,其毒性作用机制可能是通过Fas途径诱导HK-2细胞凋亡。

尖锐湿疣Fas、bcl-2、Ki-67的表达与细胞凋亡的关系

目的 探讨尖锐湿疣 ( CA)细胞凋亡与调节和增殖的关系及其意义。方法 采用 TUNEL 法对2 8例 CA患者的角质形成细胞凋亡进行了原位检测 ,并用免疫组化法观察了 Fas、bcl- 2及 Ki- 6 7的阳性表达。结果 本组病例中的 2 4例 ( 85 .7% )有凋亡细胞检出 ,2 8例 ( 10 0 % )有 Fas和 Ki- 6 7阳性表达 ,但 bcl- 2仅 8例 ( 2 8.6 % )有中、低度的表达。其凋亡指数 ( AI)、Fas、bcl- 2及 Ki- 6 7阳性表达与病情严重度之间无明显关系 ( P>0 .0 5 )。AI与Fas表达呈显著正相关 ( r=0 .86 6 ,P=0 .0 0 0 ) ,与 bcl- 2及 Ki- 6 7呈显著负相关 ( r=- 0 .416 ,P=0 .0 18;r=- 0 .475 ,P=0 .0 0 6 )。结论 CA中角朊细胞的凋亡可能在限制病毒的繁殖上起重要作用 ,Fas对凋亡具上调作用 ,bcl- 2有抑制作用 ,Ki- 6

白塞病皮损中淋巴细胞凋亡和Fas、bcl-2的表达

为探讨白塞病Fas、bcl-2和细胞凋亡在皮损中的表达及其在发病机理中的作用,对19例白塞病(活动期12例,非活动期7例),用TUNEL法原位检测皮损淋巴细胞凋亡;用免疫组化法观察Fas、bcl-2阳性表达。结果表明活动期白塞病淋巴细胞凋亡及Fas有弱的表达,bcl-2有较强表达;非活动期Fas及凋亡表达增强,bcl-2仅有弱的表达,两组Fas、bcl-2及凋亡指数(AI)的表达有显著差异(P=0.001,P=0.002,P=0.009)。两组淋巴细胞的AI与Fas表达呈正相关(r=0.772,P=0.000);与bcl-2表达呈负相关(r=-0.889,P=0.000)。Fas介导的淋巴细胞凋亡的缺陷可能是白塞病发病的重要原因bcl-2有抑制凋亡的作用。

消渴停对胰岛B细胞凋亡及相关基因Bcl-2、Fas蛋白表达的影响

目的:探讨消渴停降血糖的疗效和机理。方法:采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射所致糖尿病大鼠模型,应用HE染色、免疫组化、原位杂交和透射电镜技术,观察消渴停对胰岛B细胞凋亡的影响。结果:消渴停具有预防胰岛B细胞凋亡,刺激胰岛B细胞分泌胰岛素和抑制Fas蛋白表达的作用。结论:消渴停具有抑制Fas基因诱导胰岛B细胞凋亡的作用。

细胞凋亡信息分子Fas、FasL和NF-κB在氟化物作用后破骨样细胞凋亡过程中的表达

目的研究氟化物作用后破骨细胞样细胞凋亡过程中细胞凋亡配体Fas、FasLFasLigand和核因子NF-κB的表达变化。方法在培养基中分别加入不同浓度的氟化钠培养破骨样细胞,以免疫组织化学染色方法观察细胞的Fas、FasL和NF-κB表达。结果Fas、FasL在破骨样细胞表达量随培养基中氟化钠浓度增高而增高;NF-κB的表达量随培养基中氟化钠浓度增高而降低,两者均具有剂量依赖关系。结论在氟化钠所致的破骨细胞凋亡过程中,Fas,Fas-L的表达随氟化物浓度增高而加强;而核因子NF-κB的表达随氟化物浓度增高而减弱,两者都具有剂量依赖关系。

雷公藤甲素对哮喘豚鼠嗜酸粒细胞凋亡及Fas,Bcl-2 mRNA表达的影响

目的 :观察雷公藤甲素 (triptolide ,TP)对体外不同密度嗜酸粒细胞 (eosinophils ,Eos)凋亡及Fas ,Bcl 2mRNA表达的影响 ,探讨其促进哮喘时Eos凋亡的机制。方法 :卵蛋白激发豚鼠哮喘 4 8h后行支气管肺泡灌洗 ,分离不同密度Eos。加入TP10 - 7～ 10 - 4mol·L- 1,以原位杂交检测Eos的Fas及Bcl 2mRNA表达 ,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 :TP干预 2 4h ,可见细胞凋亡增加 ,FasmRNA表达增加 ,Bcl 2mRNA表达降低 ,呈剂量依赖性。Fas表达与Eos凋亡呈正相关 ,而Bcl 2的表达与Eos凋亡呈负相关。结论 :TP可促进Fas表达 ,抑制Bcl 2表达 ,促进Eos凋亡。Fas表达增加及Bcl

尖锐湿疣细胞凋亡与Fas、bcl-2的表达

为探讨尖锐湿疣(CA)细胞凋亡与Fas、bcl-2表达的意义，对28例CA用TUNEL法原位检测角质形成细胞凋亡；用免疫组化法，观察Fas及bcl-2的阳性表达。24例(85.7％)有凋亡细胞，28例(100％)Fas阳性，bcl-2仅8例(28.6％)有中低度的表达。其凋亡指数(AI)、Fas及bcl-2阳性细胞指数与病情严重无显著性差异(P >0.05)。AI与Fas呈显著正相关(r=0.8491,P< 0.001)，与bcl-2呈显著负相关(r=－0.4304,P< 0.01)。结果提示CA中角质形成细胞的凋亡可能在限制病毒的繁殖上起重要作用，Fas对凋亡具上调作用，bcl-2有抑制作用。

FAS,FASL及Bcl-2在化疗药物诱导RMA细胞凋亡过程中的表达

本研究通过测定RMA细胞Fas ,FasL和Bcl 2表达的变化 ,探讨其在细胞凋亡过程中的作用。在培养的小鼠T淋巴瘤RMA细胞系中加化疗药物地塞米松 (DEX)、足叶乙甙 (VP 16 )、三氧化二砷 (As2 O3 )及维甲酸 (ATRA)以及培养细胞中先分别与细胞因子IL 2 ,IL 6或GM CSF共同培养后再加入上述药物 ,观察对细胞凋亡的影响及细胞凋亡过程中Fas,FasLmRNA ,Fas及Bcl 2抗原的表达。DEX和VP 16能上调Fas和FasL表达 ,促进细胞凋亡 ,Bcl 2表达无变化。ATRA可下调Bcl 2表达 ,但不影响Fas和FasL系统 ,也未观察到有细胞凋亡。As2 O3 可以诱导细胞凋亡 ,但Fas,FasL及Bcl 2表达均无变化。提示不同药物对一种细胞可能通过不同的信号途径诱导凋亡 ,而Fas系统诱导的细胞凋亡需要Fas和FasL共同参与。单独用IL 2 ,IL 6或GM CSF虽然使Fas蛋白增加 ,但不引起细胞凋亡 ;如同时并用IL 2和IL 6则Fas和FasL表达均上升 ,并诱导细胞凋亡。上述细胞因子与化疗药物并用时可减低药物量 ,促进药物的凋亡诱导作用。在无FasL表达情况下 ,抗Fas单克隆抗体能诱导RMA细胞凋亡。实验结果表明 ,细胞因子与化疗药物可协同作用诱导细胞凋亡 ,Fas FasL系统参与DEX和VP 16诱导的RMA细胞凋亡过程 。

PML基因诱导角质形成细胞凋亡及其Fas,Fasl和Bcl-2表达

目的探讨PML基因在银屑病发病机制中的作用。方法通过流式细胞仪及Annexin V法检测经PML基因转染的角质形成细胞凋亡;采用免疫组织化学、基因探针杂交测定经PML基因作用后的角质形成细胞Fas,Fasl和Bcl-2表达。结果 PML基因上调角质形成细胞Fas及Fasl表达(P<0.01),抑制Bcl-2基因表达,诱导角质形成细胞凋亡。结论 PML基因可能通过上调角质形成细胞Fas抗原及Fasl表达,抑制Bcl-2基因表达,进而诱导角质形成细胞凋亡而参与银屑病的发病。

肺纤维化鼠细胞凋亡及Fas/Bcl-2动态变化

目的探讨细胞凋亡及Fas/Bcl-2在肺纤维化发病中的作用。方法选取SD大鼠48只,随机分为对照组、模型组,每组各24只,应用博莱霉素(5 mg/kg)气管内注入建立实验性大鼠肺纤维化模型,对照组注入等量生理盐水,各组动物于7、14、28天随机处死8只,取肺组织采用HE染色观察病理变化,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡、RT-PCR和免疫组织化学法分别检测肺组织Fas/Bcl-2 mRNA以及蛋白的表达。结果实验性大鼠肺纤维化发病过程中,呈现典型的肺泡炎(7天)、肺泡炎与纤维化并存(14天)及稳定的肺纤维化(28天)等表现;同时间段模型组肺组织细胞凋亡指数、Fas mRNA及蛋白表达均显著高于对照组(P<0.01)。Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著低于对照组(P<0.01);模型组细胞凋亡从7天开始逐步升高,第28天达最高峰,Fas蛋白与Fas mRNA表达趋势与细胞凋亡相同;模型组Bcl-2蛋白与Bcl-2 mRNA表达在第7天开始下降,第14天达最低峰,第28天略有回升(P<0.05),但仍低于对照组(P<0.01)。结论肺泡及支气管上皮细胞凋亡与肺纤维化的形成有关,可能是肺纤维化的发病机制之一;Fas mRNA及蛋白表达上调和Bcl-2 mRNA及蛋白表达下调,可能引起肺上皮细胞的凋亡从而导致肺纤维化增生。

在Fas诱导Bel-7402细胞凋亡中p38MAPK调节Bcl-2的表达

目的:探讨p38MPAK是否参与Fas和AD诱导Bel-7402细胞的凋亡过程,以及p38MPAK和bcl-2的关系,进一步揭示p38MAPK的凋亡途径.方法:在Fas和AD作用24h后,用MTT法检测Bel-7402细胞的活力,用Western-blot和RT- PCR法检测p38MAPK,p-p38MAPK和Bcl-2 expression,用免疫荧光法对p-p38MAPK进行细胞定位.结果:随着Fas浓度的增加,Bel-7402细胞的活力明显抑制,p38MAPK和p-p38MAPK表达明显增高(P<0.01),且p-p38MAPK由胞质易位到胞核.Bcl-2的表达明显降低(P<0.01),并且这种降低趋势被p38MAPK抑制剂SB203580所阻止.结论:p38MAPK参与Fas诱导的凋亡途径,以磷酸化形式激活后抑制Bcl一2的表达,进而促进细胞凋亡.

芪桂益脉灵预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡基因Fas及Bcl-2表达的影响

目的观察芪桂益脉灵(QGYML)对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响,探讨其预适应样心肌保护作用。方法取Wistar大鼠56只,随机分为7组,假手术组(8只)大鼠开胸暴露左冠状动脉,但不作结扎,空白对照组(8只)不做处理,其余40只大鼠结扎冠状动脉左前降支造成急性心肌梗死(AMI)模型,造模成功后,分别给QGYML(大、小剂量,即1g/kg、2g/kg和0、6g/kg)、异山梨酯(消心痛)和生理盐水,连续灌服7d。采用免疫组织化学法测定Bcl-2和Fas的表达。结果消心痛组和QGYML大剂量组、小剂量组Bcl-2基因表达均上调,Fas蛋白表达均下调,与缺血再灌注组比较均有统计学意义。结论QGYML能明显抑制AMI后大鼠心肌细胞凋亡,下调Fas蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,具有抗心肌缺血损伤的作用。

Fas、bcl-2和caspase8在去甲斑蝥素诱导食管癌细胞凋亡中的作用及机制

目的探讨去甲斑蝥素诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡过程中Fas、bcl-2、caspase8凋亡调节基因的相互关系及可能的作用机制。方法流式细胞术分析去甲斑蝥素作用后细胞凋亡及增殖的变化,应用免疫细胞化学技术检测用药前后凋亡相关基因Fas、bcl-2、caspase8表达的变化。结果去甲斑蝥素诱导的人食管癌Eca-109细胞发生形态改变。流式细胞仪分析结果发现,食管癌Eca-109细胞在DNA组方图上出现典型的亚二倍体峰即凋亡峰,在细胞周期中的分布也发生了明显的变化。免疫细胞化学结果显示,去甲斑蝥素作用后食管癌Eca-109细胞Fas、caspase8蛋白表达明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论去甲斑蝥素能抑制食管癌Eca-109细胞增殖并诱导凋亡,其作用可能与上调Fas、caspase8蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达有关。