凋亡因子FADD蛋白与Caspase-7蛋白在胃腺癌中的表达及意义

目的:探讨胃腺癌中Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)与半胱氨酸蛋白酶-7蛋白(Caspase-7)的表达及意义。方法:采用免疫组化S P法检测60例胃腺癌组织及50例正常胃黏膜组织F A D D蛋白与C a s p a s e-7蛋白的表达情况,分析二者与胃腺癌临床病理特征的关系,以及胃腺癌组织中二者表达的相关性。结果:FADD蛋白和Caspase-7蛋白阳性产物均为棕黄色颗粒状,主要位于细胞质。胃腺癌组织FADD蛋白和Caspase-7蛋白的阳性表达率均明显低于正常胃黏膜组织(38.3%vs 60.0%,46.7%vs 68.0%,P<0.05)。FADD蛋白、Caspase-7蛋白表达与胃腺癌患者性别、年龄无关(P>0.05),与胃腺癌分化程度、T N M分期、淋巴结转移、浸润深度有关。Spearman相关分析结果显示,胃腺癌FADD蛋白和Caspase-7蛋白表达呈正相关关系(r=0.362,P<0.05)。结论:FADD蛋白与Caspase-7蛋白低表达可能在胃腺癌的发生发展过程中具有协同作用。

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中c-FLIP与外源性凋亡途径的相关性分析

目的:分析类风湿关节炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中Fas相关死亡区样白介素1转换酶抑制蛋白(c-FLIP)与外源性凋亡途径相关蛋白死亡结构域蛋白(FADD)、caspase-8表达水平变化的相关性。方法:选择2014年1月至2015年6月福建医科大学附属漳州市医院类风湿关节炎患者60例,按照类风湿关节炎疾病活动指数将患者分为低、中、高活动度组(分别为22、20和18例)。同时选择健康体检者25名作为健康对照组。采用实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测PBMC中c-FLIP、FADD和caspase-8的mRNA和蛋白表达水平,并采用Pearson检验对c-FLIP与FADD、caspase-8表达的相关性进行分析。结果:类风湿关节炎患者PBMC中c-FLIP、FADD和caspase-8的mRNA表达量均高于健康对照组(均P <0. 05)。其中,中活动度组PBMC中FADD和caspase-8的mRNA表达量高于低活动度组(均P <0. 05),c-FLIP的mRNA表达量与低活动度组相近(P>0. 05);高活动度组PBMC中c-FLIP的mRNA表达量高于中、低活动度组(均P <0. 05),caspase-8的mRNA表达量低于中、低活动度组(均P <0. 05),FADD的mRNA表达量高于低活动度组(P <0. 05)。类风湿关节炎患者PBMC中c-FLIP mRNA水平与FADD mRNA水平呈正相关(r=0. 323,P <0. 05),与caspase-8mRNA水平呈负相关(r=-1. 104,P <0. 05)。中活动度组c-FLIP和FADD蛋白表达量高于健康对照组、低活动度组和高活动度组(P <0. 05或P <0. 01);中、高活动度组caspase-8蛋白表达量高于健康对照组和低活动度组(P <0. 05或P <0. 01),且高活动度组caspase-8蛋白表达量高于中活动度组(P <0. 05)。结论:类风湿关节炎患者PBMC中凋亡相关蛋白c-FLIP可能参与了外源性凋亡途径,并可为类风湿关节炎病情评估提供参考。

四妙散调节软骨细胞凋亡与自噬治疗膝骨关节炎大鼠的实验研究

目的:通过膝骨关节炎大鼠模型研究四妙散调节软骨细胞凋亡与自噬治疗膝骨关节炎(KOA)大鼠的作用机制。方法:8周龄SD大鼠27只,随机分为正常对照组、KOA模型组、四妙散组,KOA模型组和四妙散组采用前交叉韧带切除法制作KOA模型,手术6周后四妙散组以四妙散药液灌胃,正常对照组和KOA模型组以生理盐水灌胃。连续灌胃4周后取膝关节软骨组织,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术测定凋亡细胞所占比例,采用荧光定量PCR检测关节软骨组织中凋亡和自噬相关基因表达水平。结果:与正常对照组比较,KOA模型组大鼠关节软骨细胞凋亡率显著升高,关节软骨细胞中凋亡相关蛋白Fadd、Casp3的表达显著升高,自噬相关蛋白LC3的表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与KOA模型组比较,四妙散组大鼠关节软骨细胞凋亡率显著降低,关节软骨细胞中凋亡相关蛋白Fadd、Casp3的表达显著降低,自噬相关蛋白LC3的表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:软骨细胞凋亡是KOA发病中的重要因素,该凋亡可能通过FADD-CASP3途径发挥作用。软骨细胞自噬作用的激活可抑制细胞凋亡,可能是延缓及控制KOA进展的一个新机制,四妙散可能通过该机制发挥治疗作用。

Fas相关死亡结构域蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其与癌细胞凋亡的关系

目的研究Fas相关死亡结构域(FADD)蛋白在膀胱移行细胞癌(TCCB)中的表达,并探讨其与TCCB中癌细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化方法SP法检测68例TCCB及13例正常膀胱黏膜组织FADD蛋白表达。原位末端标记(TUNEL)法检测TCCB细胞的凋亡。结果正常膀胱黏膜FADD呈阳性表达,在TCCBⅠ级(G1)、Ⅱ级(G2)、Ⅲ级(G3)和浅表性(Tis～T1)、浸润性(T2～T4)肿瘤的阳性表达率分别为84.6%、48.3%、19.2%和65.6%、25.0%;FADD的阳性率在3组不同组织学分级的TCCB中差异有显著性意义(P<0.05),在两组不同临床分期的TCCB中差异有非常显著性意义(P<0.01),在复发组与未复发组分别为36.8%和53.3%,差异无显著性意义(P>0.05)。所有标本均可检测到细胞的凋亡,FADD蛋白表达水平与癌细胞凋亡程度呈显著正相关(rs=0.49,P<0.01)。结论FADD表达异常在TCCB的发展中可能起着重要作用,FADD表达水平与TCCB细胞凋亡密切相关。

FADD研究进展

FADD是Fas系统的一个信号连接蛋白,是死亡受体与胞浆成分之间联系的纽带,可将膜表面受体与胞浆中细胞凋亡的终末酶联接起来,从而向胞内传递凋亡信号,介导细胞凋亡,与多种疾病过程有关。同时,FADD在T细胞增殖中也起一定的作用。现就有关FADD与细胞凋亡、T细胞增殖以及在疾病中作用的研究进展加以综述。

FADDdel-GFP真核表达载体的构建及其抗细胞毒效应初步观察

目的 构建融合蛋白FADDdel GFP真核表达载体 pFADDdel GFP ,用该融合基因转染小鼠胰岛瘤细胞 (NIT) ,从而抑制死亡受体介导的细胞内凋亡信号传导 ,以探讨IDDM的发病机制及防治措施。方法 采用基因重组技术将FADDdel定向连接于真核表达载体 pEGFP N1 ,用脂质体将重组子pFADDdel GFP导入哺乳动物细胞NIT并检测其表达 ,采用FACS和MTT法检测特异性T细胞对转染重组子NIT引起的细胞毒效应。结果 转染重组子 pFADDdel GFP的NIT可见绿色荧光蛋白表达 ;pFADDdel GFP转染的NIT对特异性T细胞介导的细胞毒有明显抵抗。结论 成功构建 pFADDdel GFP融合基因并获稳定表达 ;pFADDdel GFP转染NIT可有效抑制死亡受体介导的细胞内凋亡信号传导。

芍药汤对大肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中CD14,FADD,Caspase-8表达的影响

目的:观察芍药汤对大肠湿热型溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠血清中细胞黏附分子-1(ICAM-1),转化生长因子-β1(TGF-β1)含量及病灶结肠组织中白细胞分化抗原14(CD14),Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)与天冬半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)mRNA及蛋白表达的影响。方法:将SPF级Wistar大鼠80只随机分为正常组10只、造模组70只,采用病证结合的方式复制大肠湿热型UC大鼠,即高脂高糖辛辣饮食+2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)结合乙醇复合法造模,造模成功后,按随机数字表法将造模组分为模型组、柳氮磺砒啶(SASP)组及芍药汤低、中、高剂量组,每组14只,给予柳氮磺嘧啶0.2 g·kg^(-1)·d^(-1),芍药汤低、中、高剂量(6,12,24 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,正常组及模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续21 d。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清ICAM-1,TGF-β1含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测结肠组织CD14,FADD,Caspase-8 mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织CD14,FADD,Caspase-8蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中ICAM-1含量明显升高,TGF-β1含量明显降低(P<0.05);CD14,FADD,Caspase-8 mRNA及蛋白相对表达量明显升高(P<0.05)。与模型组比较,芍药汤中、高剂量组及SASP组大鼠血清中ICAM-1含量明显降低,而芍药汤低、中、高剂量组及SASP组大鼠血清中TGF-β1含量明显升高(P<0.05);各干预组CD14,FADD,Caspase-8 mRNA及蛋白表达量明显降低(P<0.05),并以芍药汤高剂量组及SASP组更为明显。结论:芍药汤对大肠湿热型UC大鼠具有一定干预作用,其机制可能与抑制CD14,FADD及Caspase-8 mRNA及蛋白的表达有关。