RNA干扰Fascin1表达抑制胶质瘤细胞U87MG的侵袭、转移能力

目的:本研究运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术特异性抑制肌动蛋白结合的细胞骨架蛋白Fascin1的表达,并探讨其对胶质瘤细胞U87 MG的侵袭和转移能力的影响及相关分子机制。方法:将针对Fascin1的小干扰RNA(Fascin1-si RNA)和阴性对照si RNA(Negative-si RNA)转染至人胶质瘤细胞株U87 MG中。实验分为3组:空白对照组(未转染的细胞)、阴性对照组(转染neg-si RNA的细胞)、实验组(转染Fascin1-si RNA的细胞)。用transwell小室法检测Fascin1对U87MG细胞的侵袭和转移能力的影响,蛋白印迹法(Western blot)检测U87 MG细胞中Fascin1、p AKT及p STAT3等蛋白的表达。通过添加针对PI3K通路的抑制剂LY294002和针对STAT3通路的抑制剂JSI-124,证实了这两条信号通路在胶质瘤细胞U87MG侵袭、转移方面的作用。结果:相比空白对照组和阴性对照组,实验组细胞的转移能力降低了约(49±5.8)%及(46±5.4)%(P<0.05),侵袭能力降低了约(42±4.9)%和(43±4.8)%(P<0.05);且相关的PI3K/AKT及STAT3等信号通路的磷酸化减少;添加相应的信号通路抑制剂后,细胞的侵袭、转移能力显著降低(P<0.05)。结论:RNAi抑制Fascin1表达能够降低胶质瘤细胞U87 MG的侵袭及转移能力,并可抑制PI3K/AKT和STAT3信号激活,在一定程度上可逆转胶质瘤细胞的转移和侵袭等肿瘤特性。

TGF-β1通过SMAD非依赖途径诱导胃癌细胞fascin1基因表达的研究

目的转化生长因子-β1(TGF-β1)对转移相关基因fascin1表达的作用及机制的研究。方法以胃癌细胞系MKN45为研究对象,采用蛋白质印迹法检测TGF-β1(10 ng/ml)不同作用时间fascin1表达变化。瞬时转染SMAD2和SMAD4的干扰小RNA(siRNA),检测SMAD依赖信号通路在TGF-β1诱导fascin1表达中的作用。应用ERK、JNK和p38信号通路的特异性阻断药,检测SMAD非依赖途径是否参与TGF-β1诱导fascin1表达。结果TGF-β1(10 ng/ml)作用MKN45细胞24、48 h后,fascin1表达水平明显高于未处理前(0 h),差异有统计学意义(P﹤0.05)。RT-PCR和蛋白质印迹瞬时转染SMAD siRNA,SMAD2和SMAD4基因表达下调,而HK几乎不影响SMAD2和SMAD4基因表达。有效地抑制SMAD2和SMAD4表达后,TGF-β1处理对fascin1表达无明显影响。ERK和JNK信号通路的特异性阻断药PD98095和SP600125处理MKN45细胞后,TGF-β1诱导fascin1表达的作用明显降低;而p38信号通路的特异性阻断药SB203580作用前后,TGF-β1对fascin1表达无明显影响。结论TGF-β1可以通过ERK和JNK信号通路调节转移相关基因fascin1的表达。

Fascin1 mRNA和蛋白在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的研究fascin1 mRNA和蛋白在鼻咽癌(NPC)组织中的表达及其临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法分别检测fascin1在鼻咽癌组织中的表达。结果fascin1 mRNA和蛋白在鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为86.7%(26/30)和80.4%(41/51),fascin1的表达与鼻咽癌颈淋巴结转移、临床分期、鼻咽癌患者的预后具有显著相关性(P<0.05),而与EB病毒抗体(VCA-IgA)无相关性(P>0.05)。结论fascin1可能作为鼻咽癌早期区域淋巴结转移潜力的一个检测指标,对评价预后提供一定的参考价值。

不同甲状腺组织中Fascin1蛋白的表达及影响因素

目的探讨不同甲状腺组织中Fascin1蛋白的表达差异、相关因素及对患者生存率的影响。方法选取2005年2月至2013年1月承德医学院附属医院收治的甲状腺癌患者240例(甲状腺癌组)和甲状腺良性病变患者30例(甲状腺良性病变组),比较两组患者Fascin1蛋白的表达、不同临床病理特征下Fascin1蛋白阳性率及Fascin1蛋白阳性表达与阴性表达患者的生存率。结果甲状腺良性病变组和甲状腺癌组的Fascin1蛋白阳性率分别为33.33%和55.42%。Fascin1蛋白阳性表达与淋巴结转移情况、组织学类型及分化程度有关(P<0.05)。Fascin1蛋白阳性表达患者1、3、5年生存率分别为92.48%、76.69%、33.83%;Fascin1蛋白阴性表达患者1、3、5年生存率分别为100.00%、91.59%、76.64%。结论甲状腺癌患者Fascin1蛋白表达异常,其中淋巴结转移、甲状腺滤泡癌及低分化癌患者的阳性率普遍较高,是影响患者预后的重要因素。

Fascin1与E-cadherin在胃癌中的表达与意义

目的探讨Fascin1与E-cadherin在胃癌中的表达情况及与临床病理资料的关系,并分析两者的调控关系及与胃癌细胞侵袭转移的关系。方法免疫组化方法检测胃癌及癌旁组织中Fascin1与E-cadherin的表达情况并分析两种蛋白在胃癌中的表达与临床病理参数的关系及二者表达的相关性,进一步检测人胃癌SGC-7901细胞中Fascin1与E-cadherin的调控作用;细胞实验研究Fascin1与胃癌细胞侵袭迁移的关系。结果Fascin1在胃癌组织中表达显著高于癌旁组织,E-cadherin在胃癌组织中表达显著低于癌旁组织,胃癌中Fascin1与E-cadherin表达呈显著负相关,Fascin1、E-cadherin在胃癌组织中的表达均与性别、年龄无关,均与TNM分期、淋巴结转移、浸润深度相关;细胞实验中Fascin1敲低后,E-cadherin mRNA与蛋白表达水平明显增加;SGC-7901细胞中,Fascin1干扰后,细胞的侵袭迁移能力明显降低。结论Fascin1在胃癌中高表达,E-cadherin在胃癌中低表达,两者均与胃癌转移有关,Fascin1对E-cadherin具有负向调控作用,Fascin1可能参与了胃癌细胞EMT过程进而调节胃癌的转移。

miR-623在膀胱癌中的表达及靶向Fascin1抑制膀胱癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-623在膀胱癌中的表达及通过靶向Fascin1对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:采用实时荧光定量PCR检测正常膀胱上皮组织、膀胱癌组织、正常永生化膀胱上皮细胞系(SV-HUC-1)和膀胱癌细胞系(T24、UMUC3)中miR-623的表达量;采用脂质体瞬时转染miR-623 mimics,划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-623过表达后膀胱癌细胞迁移、侵袭能力的改变;生物信息学预测miR-623的作用靶蛋白。miR-623过表达后Western blot及双荧光素酶报告基因检测其靶点的表达及结合情况;使用Fascin1特异性siRNA观察膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的变化,并同时转染miR-623 inhibitor进行恢复实验。结果:miR-623在膀胱癌中的表达水平显著低于在正常膀胱组织中的表达(P<0.05),在膀胱癌细胞系(T24、UMUC3)中的表达水平显著低于正常膀胱细胞系(SV-HUC-1)(P<0.05);miR-623过表达显著抑制T24和UMUC3细胞的迁移和侵袭能力。生物信息学预测Fascin1为miR-623的靶基因,在T24和UMUC3细胞中过表达miR-623,能够显著降低Fascin1的蛋白水平;荧光素酶报告基因分析结果证实miR-623作用于Fascin1的3'-UTR。下调Fascin1表达能够抑制膀胱癌T24和UMUC3细胞的迁移和侵袭能力,同时抑制miR-623的表达能够提高细胞的迁移和侵袭能力。结论:miR-623在膀胱癌中表达水平降低,是一个抑癌因子;并可能通过靶向Fascin1调节膀胱癌的侵袭和转移能力。

Fascin1基因表达对胃癌细胞系MKN45增殖与凋亡的影响

目的探讨fascin1基因表达对胃癌细胞系MKN45增殖与凋亡的影响及其意义。方法利用RNA interference(RNAi)技术稳定沉默fascin1基因的表达,Western blotting及RT-PCR检测干扰效率,用MTT比色法和平板克隆形成实验检测转染前后细胞体外增殖能力,用流式细胞术(FCM)及Ho-chest33258荧光染色法检测细胞凋亡的变化。结果在稳定转染fascin1干扰质粒后,胃癌细胞系MKN45的fascin1表达明显下降;与未转染组和空白质粒转染组相比,fascin1干扰质粒转染组的增殖能力明显降低,但细胞凋亡变化不明显。结论fascin1的表达与胃癌细胞系MKN45的增殖有关,而与凋亡无明显相关。

Fascin⁃1 mRNA联合肿瘤标志物对结直肠腺癌患者术后淋巴结转移和生存预后的评估价值

目的探讨Fascin⁃1 mRNA联合肿瘤标志物对结直肠腺癌患者术后淋巴结转移和生存预后的评估价值。方法选取2018年2月至2021年7月于淮南东方医院集团总院接受手术治疗患者97例作为研究对象,术后检测患者血清Fascin⁃1 mRNA、糖类抗原199(CA199)、肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)水平,术后随访12个月。根据是否发生淋巴结转移分为淋巴结转移组(n=34)与无淋巴结转移组(n=63),比较两组血清Fascin⁃1 mRNA、CA199与CEA表达水平;根据随访12个月患者生存情况分为死亡组(n=37)与生存组(n=60),比较两组临床资料与Fascin⁃1 mRNA、CA199、CEA水平,进行单、多因素分析,绘制ROC曲线检验Fascin⁃1 mRNA、CA199、CEA对结直肠腺癌患者术后淋巴结转移与生存预后的诊断效能。结果淋巴结转移患者血清CA199、CEA与Fascin⁃1 mRNA表达水平均高于无淋巴结转移患者,差异具有统计学意义(t=4.299、4.271、4.492,P<0.05);死亡组与生存组患者肿瘤大小、TNM分期、术后是否接受化疗、有无淋巴结转移、CA19⁃9、CEA、Fascin⁃1 mRNA水平比较差异具有统计学意义(χ^(2)=5.167、5.167、2.428、9.488,t=4.360、4.497、6.993,P<0.05);多因素logistic回归分析结果显示淋巴结转移、CA19⁃9、CEA、Fascin⁃1 mRNA表达水平为结直肠腺癌患者术后12月生存预后独立影响因素(P<0.05);ROC曲线结果显示Fascin⁃1 mRNA联合CA199、CEA检测均对术后淋巴结转移和生存预后的AUC分别为0.940、0.989,敏感度分别为0.882、0.946,特异度分别为0.857、0.983。结论Fascin⁃1 mRNA、CA199、CEA对结直肠腺癌患者术后淋巴结转移和生存预后具有良好的预测价值,三项指标联合可提高预测价值。

Fascin 1基因在永生化食管上皮细胞癌变中的表达

背景与目的:Fascin1蛋白为一种与F-肌动蛋白结合的55kDa细胞骨架蛋白,从人畸胎瘤中克隆fascin1基因。食管上皮细胞癌变机制至今不甚明了,为此,对永生化食管上皮细胞株SHEE(Shantouhumanembryonicesophagealepithelialcellline)和由SHEE恶性转化而来的食管癌细胞株SHEEmt之间的差异表达基因在蛋白质和mRNA两个水平上进行检测分析,以期为揭示食管鳞状上皮细胞癌变机制提供新思路。方法:采用双向凝胶电泳技术分析SHEE与SHEEmt之间的蛋白质差异表达情况,以基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtimeofflyingmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)对部分差异表达蛋白质点进行鉴定,以逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptionploymerasechainreaction,RT-PCR)对目标基因进行mRNA转录水平上的检测,并对RT-PCR产物进行序列测定分析。结果:在SHEE向SHEEmt的恶性转化中有9个基因出现差异表达,其中fascin1基因在蛋白质水平升高3.64倍,mRNA水平升高16.17倍。结论:fascin1基因可能与SHEE向SHEEmt的恶性转化有关。

成束蛋白1和角蛋白14表达与T1期胃癌伴淋巴结转移的相关性研究

目的探讨消化内镜检查组织成束蛋白1(FSCN1)和角蛋白14(KRT14)表达与T1期胃癌伴淋巴结转移的相关性。方法选择确诊为T1期胃癌患者120例,其中伴淋巴结转移50例为观察组,未发生淋巴结转移70例为对照组。采用免疫组化染色检测组织FSCN1和KRT14阳性表达率,Western-blot法检测组织FSCN1和KRT14相对表达量。结果观察组肿瘤组织FSCN1和KRT14阳性表达率和相对表达量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。组织FSCN1和KRT14表达与肿瘤的分化级别有显著相关性(P<0.05)。结论FSCN1和KRT14表达与早期胃癌的发生和淋巴结转移相关。

FSCN1蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探究成束蛋白1(FSCN1)在胃癌组织中的表达及临床意义。方法82例胃癌组织标本及63例癌旁正常胃黏膜组织标本取自2014年1月至2015年12月于邵阳学院附属第一医院行手术切除治疗的82例胃癌患者,组织标本均经病理检查证实。利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析FSCN1 mRNA在胃癌组织及正常胃黏膜组织中表达的差异,免疫组化法检测胃癌组织及癌旁正常胃黏膜组织中FSCN1蛋白表达水平。利用Kaplan-Meier法分析FSCN1蛋白与胃癌患者累积生存率的关系,多因素Cox回归分析影响胃癌患者预后不良因素。基于Coexpedia数据库分析FSCN1共表达基因互作关系,利用Enrichr在线分析工具进行KEGG通路分析;利用R3.6.3软件中的GSVA包分析胃癌患者FSCN1表达与免疫细胞浸润之间的关系。结果TCGA数据库显示FSCN1 mRNA在胃癌组织中表达显著上调(P<0.05)。FSCN1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率为60.98%(50/82),明显高于正常胃黏膜中的19.05%(12/63)(P<0.05)。FSCN1蛋白表达水平与患者TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)。FSCN1蛋白高表达组和低表达组胃癌患者中位生存时间分别为19.00个月(95%CI:17.42~20.59)、26.00个月(95%CI:22.33~29.67),差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、分化程度低、淋巴结转移、FSCN1蛋白高表达是影响胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。FSCN1互作分析发现,相关性较强的前10个基因分别为APOE、ZYX、HOMER3、AXL、RBM42、ARHGDIA、ITGA3、PMAIP1、COL4A1、TP53。富集分析发现,FSCN1共表达基因富集到的主要通路包括黏着斑、阿米巴病、ECM-受体相互作用、PI3K-Akt信号通路、Hippo信号通路、病毒性心肌炎、细胞间黏附分子等信号通路。Spearman相关性分析显示,FSCN1表达与NK细胞、Tem细胞、浸润性树突状细胞、巨噬细胞、树突状细胞、Th1细胞、肥大细胞、浆细胞样树突状细胞、Tgd细胞、中性粒细胞、NK CD56细胞、滤泡辅助性T细胞均呈正相关(P<0.05),与辅助性T细胞、Th17细胞均呈负相关(P<0.05)。结论FSCN1蛋白在胃癌组织中高表达,可能参与胃癌肿瘤的分化、转移过程,是影响胃癌患者预后的独立危险因素。

Fascin-1在甲状腺癌细胞中表达及其对细胞生物学行为的调控作用

目的 研究聚束蛋白(Fascin)-1在甲状腺癌细胞中表达及其对细胞生物学行为的调控作用。方法 采用实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western印迹法检测人甲状腺癌细胞K1、GTHW3、FTC-133和人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中Fascin-1 mRNA和蛋白水平。用Fascin-1 shRNA重组慢病毒感染甲状腺癌细胞,实时定量PCR和Western印迹检测感染效果。噻唑蓝(MTT)方法测定细胞增殖能力变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Transwell小室检测细胞侵袭能力变化,划痕愈合实验检测细胞迁移能力变化,Western印迹检测细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-9、-2蛋白、活化的Caspase(C-Caspase)-3、-9蛋白水平。结果 人甲状腺癌细胞K1、GTHW3、FTC-133中Fascin-1表达水平均显著高于人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1( P <0.05)。Fascin-1 shRNA重组慢病毒感可以明显下调甲状腺癌细胞中Fascin-1表达。敲低Fascin-1后的甲状腺癌细胞增殖能力降低,细胞凋亡增多,细胞侵袭和迁移能力下降,细胞中MMP-2、-9蛋白水平降低,C-Caspase-3、-9蛋白水平升高。结论 Fascin-1在甲状腺癌细胞中高表达,敲低Fascin-1抑制甲状腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力,并促进甲状腺癌细胞凋亡。

胃癌组织和细胞株FSCN1与Vimentin表达临床意义

目的探讨胃癌组织中肌成束蛋白(FSCN1)与波形蛋白(Vimentin)表达与预后的关系,并分析两者调控关系及与胃癌细胞侵袭转移的关系。方法免疫组化方法检测胃癌及癌旁组织中FSCN1与Vimentin表达情况;检测人胃癌SGC-7901细胞中FSCN1与Vimentin的调控作用;Kmplot生存分析胃癌组织中FSCN1与Vimentin表达与预后的关系;细胞实验研究FSCN1与胃癌细胞侵袭转移的关系。结果胃癌组织FSCN1阳性表达率为37.5%,癌旁组织无表达,差异有统计学意义,P<0.001;胃癌组织Vimentin阳性表达率为62.5%,高于癌旁组织的25.0%,χ;=11.429,P=0.001。胃癌组织中FSCN1与Vimentin表达呈正相关,r=0.384,P<0.001。SGC-7901细胞转染FSCN1-siRNA后,实时荧光定量PCR检测FSCN1 mRNA(F=150.041,P<0.001)与Vimentin mRNA(F=32.309,P=0.001)表达水平降低,差异有统计学意义;蛋白质印迹法检测FSCN1(F=7.494,P=0.023)与Vimentin蛋白(F=32.169,P=0.001)表达水平降低,差异有统计学意义。Kmplot生存分析结果显示,FSCN1与Vimentin高表达者生存时间均低于低表达者。SGC-7901细胞中,FSCN1敲低后,细胞的侵袭(t=8.575,P=0.001)和转移(t=9.714,P=0.001)能力降低。结论FSCN1与Vimentin在胃癌中高表达,与胃癌转移有关,FSCN1对Vimentin具有正向调控作用,FSCN1可能通过诱导胃癌细胞上皮-间质转化进而促进胃癌细胞侵袭转移。