食管鳞状细胞癌中FBXO32基因表达及其临床意义

目的观察食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中FBXO32基因的表达,探讨该基因在ESCC发生、发展中的作用。方法分别应用RT-PCR及免疫组织/细胞化学法检测食管癌细胞和ESCC组织中FBXO32 mRNA及蛋白表达,观察DNA去甲基化剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycitydine,5-aza-dC)对食管癌细胞系(TE1、TE13、T.TN、Yes-2)FBXO32基因表达的影响。结果 TE13、T.TN、Yes-2细胞株中均未检测到FBXO32 mRNA及蛋白表达,在去甲基化剂作用后,4株食管癌细胞株中FBXO32基因表达均上调。FBXO32 mRNA在ESCC和癌旁正常组织中的表达量分别为0.24±0.15和0.49±0.21,ESCC组织中FBXO32 mRNA表达量明显低于癌旁正常组织(P<0.05),且与患者的淋巴结转移及肿瘤组织的分化程度密切相关。51例ESCC组织中,12例FBXO32基因蛋白表达,阳性率为23.5%,明显低于正常食管黏膜组织(70.5%,P<0.01),且FBXO32与患者的淋巴结转移密切相关。结论 FBXO32基因在ESCC中的异常低表达与ESCC的发生、发展密切相关,且甲基化可能是其表达沉默的机制之一。

中国草原红牛FBXO32基因内含子4多态性对肉质性状的影响

为了研究中国草原红牛F-框蛋白32(FBXO32)基因多态性与肉质性状之间的相关性,试验选取120头中国草原红牛为研究对象,采用PCR产物直接测序法检测FBXO32基因内含子4的多态性,利用SPSS 19.0软件对多态性位点与离心失水率、滴水损失率、压榨水分、肌肉嫩度、肌内脂肪含量、初水分含量、蛋白质含量、大理石花纹评分、熟肉率、眼肌面积、pH;值指标进行相关性分析。结果表明:在FBXO32基因第4内含子g.16336603处检测到一个C/T突变位点,TT型为优势基因型,等位基因T为优势基因,该位点在所测群体中处于哈迪-温伯格平衡状态(P>0.05);CC基因型离心失水率显著低于TT和TC基因型(P<0.05),肌内脂肪含量和大理石花纹评分显著高于TT和TC基因型(P<0.05),pH;值高于TT和TC基因型,其中与TC基因型差异显著(P<0.05);但3个基因型的滴水损失率、压榨水分、肌肉嫩度、初水分含量、蛋白质含量、眼肌面积及熟肉率均差异不显著(P>0.05)。说明FBXO32基因可作为中国草原红牛品种选育标记。

fbxo32基因在traf6缺失斑马鱼肝脏中的表达分析

为了进一步研究fbxo32在肝脏相关疾病中的作用,进行了traf6缺失斑马鱼Danio rerio肝脏的组织切片分析,结果显示斑马鱼traf6缺失个体表现出明显的肝萎缩特征,包括肝脏组织结构松散、肝细胞排列不规则及缺少肝脂肪滴等症状。同时荧光定量实验表明fbxo32 mRNA在检测过的野生型斑马鱼组织中均有一定量的表达,在肝脏中表达量较低而在卵巢中表达量较高。而与野生型斑马鱼相比,fbxo32 mRNA在traf6突变体斑马鱼肝脏中的表达量上调超过100倍。进一步原位杂交结果显示,fbxo32 mRNA的信号主要集中于肝脏细胞,而在血细胞中则没有检测到信号。特别是与野生型斑马鱼相比,fbxo32 mRNA在traf6突变型斑马鱼肝脏中的信号明显增强。实验结果表明traf6缺失能引起fbxo32基因的上调表达,并会导致traf6突变型斑马鱼肝脏发育异常并发生萎缩。

电针对心肌缺血大鼠心肌泛素连接酶Fbxo32的影响

目的观察电针内关穴对心肌缺血大鼠心脏功能及心肌组织中Fbxo32 mRNA表达的影响。方法SD大鼠随机分成生理盐水对照组、模型组和电针组。24 h内大鼠四肢背部皮下2次注射异丙肾上腺素(ISO),造成心肌缺血模型。电针组造模24 h后电针内关穴20 min,连续5 d。生理盐水对照组和模型组予以同等抓取处理。通过心肌酶肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、病理苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠心脏功能变化;基因芯片检测心肌泛素连接酶E3;实时荧光定量PCR(q-PCR)检测心肌组织Fbxo32 mRNA表达。结果电针组与模型组比较,心肌泛素连接酶E3基因有显著差异表达;模型组心肌酶CK-MB、LDH活性、Fbxo32 mRNA表达量均显著高于生理盐水对照组(P<0.01);电针组心肌酶CK-MB、LDH活性、Fbxo32 mRNA表达量均显著低于模型组(P<0.05)。结论电针可改善心肌缺血大鼠心脏功能,其机制可能与下调心肌组织中Fbxo32表达有关。

食管鳞状细胞癌组织中SASH1和FBXO32蛋白的表达

目的:研究食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中SASH1和FBXO32蛋白的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法检测76例ESCC及相应的正常食管黏膜组织中SASH1和FBXO32蛋白的表达。结果:ESCC组织中SASH1与FBXO32蛋白的阳性表达率均低于正常食管黏膜组织(χ2=6.036和4.971,P均<0.05),且二者的表达均与ESCC的分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05),而与年龄、性别无关(P>0.05);ESCC组织中SASH1和FBXO32的表达呈正关联(rP=0.417,P<0.001)。结论:SASH1及FBXO32的低表达在ESCC的发生发展中具有协同作用,联合检测二者在ESCC中的表达对于评估ESCC的发生发展具有重要意义。

藏猪和大约克猪FBXO32基因多态性及表达差异分析

为明确FBXO32基因在高原藏猪与大约克猪肌肉中的表达差异性,选取这2个猪种作为试验动物,采用双脱氧测序技术对藏猪(33头)、大约克猪(32头)FBXO32基因的5′UTR启动子区进行单核苷酸多态性(SNPs)筛选,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测FBXO32基因在藏猪、大约克猪腿肌及背最长肌组织中mRNA的相对表达量。研究结果表明,在FBXO32基因的5′UTR启动子区筛选到了G-257A和A-556G这2个SNPs位点,且SNPs位点在2个猪种群体间的基因型频率有着显著性差异(P<0.05);通过转录因子预测,发现这2个SNPs位点与肌细胞的更新、分化和增殖相关,推测FBXO32基因的SNPs位点是调控肌肉生长的关键位点;藏猪腿肌、背最长肌组织中FBXO32基因的mRNA相对表达量都显著高于大约克猪(P<0.05),由此推测FBXO32基因可以负向调控肌肉生长,这可能是导致高原藏猪生长速度慢的主要原因之一。本研究结果为进一步探究FBXO32基因在猪肌肉生长相关的调控机制提供了必要的理论依据。

甘南牦牛(Bos grunniens)FBXO32基因突变及其与胴体和肉质性状关联分析

为了分析甘南牦牛(Bos grunniens)肌肉萎缩盒蛋白32(F-box protein 32,FBXO32)基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,以及基因型与胴体和肉质性状间的相关性,本研究以593头甘南牦牛为研究对象,采用混池测序和竞争性等位基因特异性PCR(kompetitive allele specific PCR,KASP)技术,检测了甘南牦牛FBXO32基因突变位点及基因型,分析了基因型与甘南牦牛胴体及肉质性状的相关性。结果表明,从甘南牦牛FBXO32基因检测到7个SNP位点,分别是位于5′UTR区的SNP1(g.267A>C)、外显子1区的SNP2(g.326G>T)、外显子8区的SNP3(g.31231G>C),以及3′UTR区的SNP4(g.31352G>A)、SNP5(g.31424C>T)、SNP6(g.31503A>C)和SNP7(g.31504A>G)。其中,SNP1、SNP4、SNP5、SNP6与肌肉嫩度显著相关(P<0.05),SNP3、SNP6、SNP7与失水率显著相关(P<0.05),SNP1、SNP2、SNP3、SNP4、SNP5、SNP7与眼肌面积显著相关(P<0.05),SNP2、SNP5、SNP6与胴体重显著相关(P<0.05)。7个SNP位点构建的9种有效单倍型组合中,单倍型组合H2H2的个体肌肉嫩度小、熟肉率高,单倍型组合H1H2的个体熟肉率高、眼肌面积大、失水率低。FBXO32基因突变位点可作为甘南牦牛胴体及肉质性状潜在分子遗传标记,研究结果丰富了甘南牦牛经济性状分子遗传理论基础。

哺乳仔猪空肠FBX032基因表达及肠上皮形态结构的分析

本研究旨在探讨哺乳仔猪空肠FBXO32基因表达以及空肠上皮细胞形态组织结构的变化。分别采集出生当天(0日龄)、3、8、14和21日龄5个时间点的大约克哺乳仔猪空肠样品作为研究对象,采用实时荧光定量PCR检测FBXO32基因的相对表达量,并在光镜和透射电镜下观察肠上皮细胞形态结构的变化。结果表明,在哺乳仔猪空肠有FBXO32基因表达,与0日龄相比,FBXO32基因在3、14和21日龄的表达水平上调,上调幅度分别为1.16、3.89和11.83倍,在8日龄表达下调,下调为0日龄的53%;光学显微镜观察结果表明,和0日龄相比,哺乳仔猪肠绒毛个数、高度、宽度和隐窝深度显著增加(P<0.05或P<0.01)。透射电镜观察显示,哺乳阶段的仔猪空肠上皮细胞超微结构普遍具有微绒毛整齐度很好,游离核糖体、线粒体和粗面内质网丰富的特征,在3和8日龄时出现部分线粒体轻微肿胀,而在14和21日龄时未见这种现象。以上结果表明哺乳仔猪空肠FBXO32基因表达及形态结构均有显著变化。