RNA干扰Fbxw8基因对人结肠癌细胞增殖能力的影响

目的探讨靶向抑制Fbxw8基因对结肠癌SW480细胞增殖的影响。方法 RNA干扰(RNAi)方法下调SW480细胞中Fbxw8的表达。通过Real-time PCR、western blotting方法分别检测Fbxw8 mRNA和蛋白表达变化;CCK-8、细胞克隆形成实验及BrdU掺入法检测下调Fbxw8对SW480细胞的增殖、DNA合成能力的影响。Western blotting检测下调Fbxw8对SW480细胞增殖相关基因表达的影响。结果 Fbxw8 siRNAs显著降低SW480细胞Fbxw8mRNA和蛋白的表达,CCK-8结果显示:与对照组(0.78±0.11)相比,两对Fbxw8 siRNAs均可显著抑制细胞的生长(0.46±0.07、0.49±0.03,P<0.05);细胞克隆形成实验显示与对照组相比,Fbxw8 siRNAs组细胞的克隆形成数目及大小显著降低。BrdU掺入实验显示与对照组(0.83±0.12)相比,Fbxw8 siRNAs均能显著下调DNA的合成能力(0.47±0.06、0.56±0.09,P<0.05);同时伴随着细胞周期蛋白cyclin E的下调而p27的表达升高。结论 Fbxw8 siR NA可以通过下调cyclin E、上调p27的表达而有效抑制SW480细胞增殖,为结肠癌的基因治疗提供新的候选靶点。

靶向抑制Fbxw8对前列腺癌细胞增殖能力的影响

目的探讨Fbxw8对人前列腺癌DU145细胞增殖及对增殖相关基因cyclinA、cyclinB、CDK1、p21和p27表达的影响。方法 RT-PCR和Western blot法验证Fbxw8 siRNAs的干扰效率;利用CCK-8检测法检测细胞的增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期分布情况;Western blot法检测细胞增殖相关蛋白CDK1、CDK2、cyclinA、cyclinB、P21、P27的表达。结果 Fbxw8 siRNAs显著下调DU145细胞中Fbxw8mRNA及蛋白水平的表达(P<0.01);Fbxw8 siRNAs显著抑制DU145细胞增殖活力,其中72 h抑制最明显(P<0.05);流式细胞术分析显示,Fbxw8 siRNAs可阻滞细胞于G2/M期,G2/M期细胞百分数由15.32%(control siRNA)增加到29.03%(Fbxw8 siRNA 1)和28.39%(Fbxw8 siRNA 2);Western blot结果显示,Fbxw8 siRNAs可促进周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21、p27的表达,同时下调G2/M期调控蛋白CDK1、CDK2、cyclin A及cyclin B1的表达。结论靶向抑制DU145细胞中Fbxw8的表达可显著抑制细胞的增殖,使阻滞细胞于G2/M期,并且可能是通过下调CDK1、CDK2、cyclin A及cyclin B1的表达,上调P21、P27的表达实现的。

FBXW8对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的探讨FBXW8(F-box and WD repeat domain containing 8)对肝细胞癌(肝癌,HCC)细胞系HepG2和Huh7细胞增殖和迁移能力的影响以及潜在的分子机制。方法通过瞬时转染方法将过表达FBXW8的重组质粒转染HCC细胞系HepG2和Huh7;小干扰RNA(siRNA)瞬时转染HepG2和Huh7以敲低FBXW8;蛋白免疫印迹(Western印迹)检测HepG2和Huh7中FBXW8蛋白的表达水平,以验证过表达和敲低FBXW8的效果;实时定量PCR检测上皮间充质转化(EMT)相关分子的mRNA表达水平;CCK-8法检测FBXW8对HCC细胞增殖能力的影响;Transwell法评价FBXW8对HCC细胞迁移能力的影响;Log-rank检验比较FBXW8高表达和低表达组HCC患者的生存期差异。结果过表达FBXW8可显著抑制HepG2和Huh7细胞的增殖和迁移能力;而敲低FBXW8则可显著促进HepG2和Huh7细胞的增殖和迁移能力。过表达FBXW8可显著抑制HepG2和Huh7的EMT过程;敲低FBXW8则显著促进HepG2和Huh7的EMT过程;临床相关性分析显示,与癌旁组织相比,FBXW8在HCC组织中显著下调表达,且其低表达与HCC患者的不良预后显著相关。结论FBXW8可抑制HCC细胞的增殖、EMT过程和迁移能力,是一种新的潜在的HCC抑癌基因。