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IgG受体FcγRⅡB调节实验性自身免疫性脑脊髓炎致神经元损伤及Th17/Treg免疫平衡的作用研究 被引量:1
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作者 肖林婷 周少珑 +3 位作者 周辉 蔡奕秋 陈薇 李鹏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1030-1035,1041,共7页
目的:探究IgG受体FcγRⅡB对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠神经元损伤与Th17/Treg失衡的作用。方法:C57BL/6小鼠随机分组为对照组、EAE组、FcγRⅡB组、EAE+FcγRⅡB组,每组15只,皮下注射MOG35-55肽诱导EAE模型,并给予FcγRⅡ... 目的:探究IgG受体FcγRⅡB对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠神经元损伤与Th17/Treg失衡的作用。方法:C57BL/6小鼠随机分组为对照组、EAE组、FcγRⅡB组、EAE+FcγRⅡB组,每组15只,皮下注射MOG35-55肽诱导EAE模型,并给予FcγRⅡB慢病毒液处理;造模后每日称量小鼠体质量,进行神经功能评分,持续30 d;30 d后处死小鼠,HE染色观察脑组织病理形态学变化,LFB染色评估脊髓髓鞘结构变化,免疫荧光染色检测脊髓大脑皮质神经元核抗原(NeuN)和Caspase-3表达,TUNEL染色检测神经元细胞凋亡,ELISA检测血清IL-6、IL-17、IL-10及TGF-β水平,流式细胞术分析脾脏Th17、Treg细胞比例分布,Western blot测定脊髓组织维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)与Forkhead家族转录因子3(Foxp3)蛋白表达。结果:与对照组比较,EAE组小鼠体质量下降,神经功能评分升高,脑组织内炎症细胞浸润明显,脊髓中出现脱髓鞘迹象,NeuN荧光表达强度减弱而Caspase-3荧光表达强度增强,TUNEL阳性着色细胞多,细胞凋亡数增加,血清中IL-6和IL-17水平升高,IL-10和TGF-β水平降低,脾脏内Th17细胞比例升高,Treg比例降低,脊髓组织内RORγt蛋白表达上调,Foxp3蛋白表达下调(P<0.05);与EAE组比较,EAE+FcγRⅡB组小鼠体质量增加,神经功能评分降低,脑组织内炎症细胞浸润减轻,脊髓脱髓鞘现象得到改善,NeuN荧光表达强度增强,Caspase-3荧光表达强度减弱,TUNEL阳性着色细胞较少,细胞凋亡数减少,血清中IL-6和IL-17水平降低,而IL-10和TGF-β水平升高,同时脾脏内Th17细胞比例降低,Treg比例升高,脊髓组织内RORγt蛋白表达下调而Foxp3蛋白表达上调(P<0.05)。结论:FcγRⅡB对EAE小鼠具有神经保护作用,可减轻其脑组织炎症细胞浸润及脱髓鞘现象,作用机制可能与调节细胞因子水平及Th17/Treg细胞免疫平衡有关。 展开更多
关键词 实验性自身免疫性脑脊髓炎 fcγrⅡB 神经元损伤 TH17/TrEG 免疫
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复方双黄连制剂对单核巨噬细胞(RAW264.7)Fc/C3b受体活性和分泌功能的影响
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作者 史晗 戴浩然 +1 位作者 郭彬 刘群 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期52-63,共12页
【目的】探究复方双黄连制剂对巨噬细胞吞噬能力和分泌功能的影响,为复方双黄连的深度开发及畜禽用药的合理选择提供科学依据。【方法】将金银花、黄芩、连翘、穿心莲干燥粉碎后分别制备浸膏,按照比例制备双黄连口服液(金银花∶黄芩∶连... 【目的】探究复方双黄连制剂对巨噬细胞吞噬能力和分泌功能的影响,为复方双黄连的深度开发及畜禽用药的合理选择提供科学依据。【方法】将金银花、黄芩、连翘、穿心莲干燥粉碎后分别制备浸膏,按照比例制备双黄连口服液(金银花∶黄芩∶连翘=1∶1∶2)、复方双黄连口服液(金银花∶黄芩∶连翘∶穿心莲=1∶1∶2∶2)及穿心莲口服液,调节pH为7.0,生药浓度为1 g/mL。3种药物作用于小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,采用CCK-8法检测细胞活力,确定3种药物安全浓度,将药物最大安全浓度以二倍稀释法稀释为3个浓度;采用脂多糖(LPS)和氢化考的松琥珀酸钠(HCSS)作用于RAW264.7细胞模拟机体炎症和免疫抑制状态,3种药物作用于这2种状态的细胞和正常细胞,采用YC、EA玫瑰花环法及中性红吞噬法检测巨噬细胞Fc/C3b受体活性和吞噬能力,采用ELISA法检测巨噬细胞分泌能力。【结果】复方双黄连、双黄连、穿心莲的安全浓度分别为0.625~2.5、3.125~12.5和0.625~2.5 mg/mL。不同浓度复方双黄连、双黄连、穿心莲作用于巨噬细胞,细胞吞噬能力均显著高于空白对照组(P<0.05)。复方双黄连可降低LPS巨噬细胞RAW264.7活跃的吞噬能力,增强HCSS巨噬细胞RAW264.7吞噬能力;不同浓度复方双黄连可使活化的巨噬细胞Fc/C3b受体活性下降,低下的Fc/C3b受体活性增强;不同浓度复方双黄连具有促进巨噬细胞分泌一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)及溶菌酶(LZM)的作用,抑制LPS巨噬细胞NO、TNF-α、IFN-γ及白细胞介素-6(IL-6)的分泌。【结论】复方双黄连可通过活化巨噬细胞Fc/C3b受体活性以增强机体免疫力和抗炎能力,同时对已活化的巨噬细胞分泌功能起到抑制作用,以减少由于免疫功能亢进造成的机体损伤。研究结果为中兽药复方双黄连的深度开发提供了参考依据。 展开更多
关键词 复方双黄连 巨噬细胞fc/C3b受体 吞噬能力 分泌功能
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抑制IgE与肥大细胞FcεRⅠ受体结合防治变应性疾病的研究进展
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作者 赵晶 刘思麟(综述) 彭华(审校) 《医学研究与战创伤救治》 CAS 北大核心 2024年第5期543-548,共6页
变应性疾病是全世界影响最广泛的慢性疾病之一,肥大细胞是Ⅰ型变态反应最主要的终末效应细胞,IgE与其肥大细胞表面高亲和力受体FcεRⅠ的结合是启动肥大细胞级联反应释放炎性介质的关键步骤。阻断或抑制肥大细胞膜上IgEFcεRⅠ的交联,... 变应性疾病是全世界影响最广泛的慢性疾病之一,肥大细胞是Ⅰ型变态反应最主要的终末效应细胞,IgE与其肥大细胞表面高亲和力受体FcεRⅠ的结合是启动肥大细胞级联反应释放炎性介质的关键步骤。阻断或抑制肥大细胞膜上IgEFcεRⅠ的交联,从而影响肥大细胞活化已成为变应性疾病防治的有效策略和研究热点。文章从阻断IgE抗体、IgE-FcεRⅠ结合以及FcεRⅠ受体三个方面就靶向肥大细胞上IgE和FcεRⅠ防治变应性疾病的策略及相关机制进行综述。 展开更多
关键词 IGE fcεr 肥大细胞 变应性疾病
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过敏煎通过IgE/FcεRⅠ途径抑制肥大细胞脱颗粒改善特应性皮炎的作用机制
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作者 高娟 陈桂芳 +4 位作者 谭伟 张洁 饶高雄 王睿睿 张祎 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2024年第9期135-140,I0025,I0026,共8页
目的通过体内外实验,研究过敏煎改善特应性皮炎的作用机制。方法采用2,4-二硝基氯苯(2,4-dimethyl sulfoxide,DNCB)反复刺激皮肤建立特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)模型,给予氯雷他定片及过敏煎低、中、高剂量(1.32、2.64、5.28 g/kg... 目的通过体内外实验,研究过敏煎改善特应性皮炎的作用机制。方法采用2,4-二硝基氯苯(2,4-dimethyl sulfoxide,DNCB)反复刺激皮肤建立特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)模型,给予氯雷他定片及过敏煎低、中、高剂量(1.32、2.64、5.28 g/kg)进行干预,ELISA法检测血清总IgE、IL-4、IL-13水平,IHC法测定皮损组织中IL-4、IL-13的表达水平。体外运用anti-DNP-IgE/DNP-HSA诱导RBL-2H3细胞复制脱颗粒模型,MTS法检测过敏煎对RBL-2H3活力,通过ELISA法检测细胞上清中β-hex酶释放率,Histamine、LTB4、IL-4、IL-13水平,RT-PCR法检测细胞Histamine、IL-4、IL-13mRNA表达,Western blotting法检测p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38/p-38蛋白表达。结果与模型组比较,过敏煎各剂量组显著减轻AD小鼠血清总IgE、IL-4、IL-13水平(P<0.05,P<0.01),减轻AD小鼠皮损组织中IL-4、IL-13表达。明显下调RBL-2H3细胞脱颗粒后β-Hex酶释放率(P<0.05,P<0.01)和Histamine、LTB4、IL-4、IL-13水平(P<0.05,P<0.01),显著减少细胞Histamine、IL-4、IL-13mRNA表达(P<0.01)和p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38/p38蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论过敏煎通过调控Th2型反应和血清中总IgE水平改善特应性皮炎,其作用机制可能是通过IgE/FcεRⅠ途径抑制肥大细胞脱颗粒。 展开更多
关键词 过敏煎 特应性皮炎 IgE/fcεr 肥大细胞 脱颗粒
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人Fcα/μR和Poly Immunoglobulin Receptor多克隆抗体的制备及鉴定
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作者 杨丽君 张伟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期76-79,共4页
目的:制备抗人Fcα/μR和Poly Immunoglobulin Receptor(pIgR)的多克隆抗体。方法:在Escherichia coli中分别表达人Fcα/μR的EC12和pIgR的D1结构域,均以包含体形式存在。从SDS-PAGE中切胶纯化,免疫新西兰兔,制备多克隆抗体。ELISA法检... 目的:制备抗人Fcα/μR和Poly Immunoglobulin Receptor(pIgR)的多克隆抗体。方法:在Escherichia coli中分别表达人Fcα/μR的EC12和pIgR的D1结构域,均以包含体形式存在。从SDS-PAGE中切胶纯化,免疫新西兰兔,制备多克隆抗体。ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体的特异性,抗原柱吸收交叉和纯化多抗。结果:抗体滴度分别是1∶6 4000和1∶25 6000,经Western blot检测特异性良好,抗人Fcα/μR和pIgR的多抗相互没有交叉。结论:在E.coli中成功表达了人Fcα/μR的EC12结构域和pIgR的D1结构域,并制备了无交叉的多克隆抗体,为进一步研究其功能和相互关系奠定基础。 展开更多
关键词 fcαr pIgr 多克隆抗体
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Distribution of Variant Genotypes of Fc gamma Receptor ⅢA in Healthy Chinese Population of Zhengzhou City
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作者 王军 冯建飞 +6 位作者 张利 胡豫 栾斌 岳维海 王宏 朱绍先 徐玉梅 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2003年第3期239-241,共3页
To investigate the distribution of variant genotypes of Fc gamma receptor Ⅲa (FcγRⅢa) in healthy Chinese population of Zhengzhou city, genomic DNA was extracted from peripheral blood of healthy donators The genot... To investigate the distribution of variant genotypes of Fc gamma receptor Ⅲa (FcγRⅢa) in healthy Chinese population of Zhengzhou city, genomic DNA was extracted from peripheral blood of healthy donators The genotypes of FcγRⅢa-158 were determined by nested polymerase chain reaction (PCR) in 137 healthy people in Zhengzhou city The results showed that frequencies of variant genotypes FF, VV and VF were 42 3 %, 48 9 % and 8 8 % respectively The distribution of FcγRⅢa-158 in healthy Chinese population of Zhengzhou city was polymorphic and different from that of African Americans (AA) and Caucasian Americans (CA) 展开更多
关键词 receptor fc alleles POLYMOrPHISM
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THE EFFECT OF FCγ RECEPTOR ON THE PATHOGENESIS OF GRAVES' DISEASE
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作者 蒲丹 郭辉 +2 位作者 雒文田 刘秋月 Aosai Fumie 《Journal of Pharmaceutical Analysis》 SCIE CAS 2004年第2期190-192,共3页
Objective To explore the roles of Fcγ recep tor in the pathogenesis of Graves' disease. Methods Fcγ receptor gene knockout mice(Fcγ R KO m ice) which were rooted in C57BL/6 mice and wild type C57BL/6 mice wer... Objective To explore the roles of Fcγ recep tor in the pathogenesis of Graves' disease. Methods Fcγ receptor gene knockout mice(Fcγ R KO m ice) which were rooted in C57BL/6 mice and wild type C57BL/6 mice were immunized by hTSH receptor expressing cells (DAP3.WT). 1-2×107 DAP3.WT cells were peri toneally injected into mice every two weeks for a total of six times. Two weeks after final immunization, mice were killed for measurement of total thyroxine, T RAb and pathological examination. Results The thyroxine level of the immunized Fcγ recept or gene knockout mice was significantly lower than that of the immunized wild ty pe control mice (2.2±0.31 vs. 3.32± 0.59 g·dL -1, P< 0.05 ),but there was no significant difference between immunized Fcγ R KO mic e and non-immunized wild type control group. The TRAb levels of the immunized F γ R KO mice significantly increased compared to those of the immunized wild type mice (21.75±8.21 vs. 14.11±6.21, P< 0.05). The lymphocyte cel ls infiltration and destruction of thyroid follicles were found in the thyroid gland of the immunized Fcγ R KO mice. Conclusion These results suggest that Fcγ receptor may be involved in the pathogenesis of Graves' disease. 展开更多
关键词 Graves' disease fcγ receptor gene knockou t thyroid gland
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人胎盘滋养层细胞的分离培养及IgG FcγRⅢ在滋养层细胞的表达 被引量:31
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作者 程勇前 聂青和 +2 位作者 周永兴 杜德伟 杨华光 《医学研究生学报》 CAS 2002年第2期105-108,111,共5页
目的 :体外分离培养人胎盘滋养层细胞 ,观察其生物学特性 ,研究IgGFcγRⅢ (CD16)在人胎盘组织中的定位及体外培养的滋养层细胞是否存在CD16,从而为HCV母婴传播机制的研究提供细胞学实验基础。 方法 :采用胰蛋白酶消化法消化人足月胎... 目的 :体外分离培养人胎盘滋养层细胞 ,观察其生物学特性 ,研究IgGFcγRⅢ (CD16)在人胎盘组织中的定位及体外培养的滋养层细胞是否存在CD16,从而为HCV母婴传播机制的研究提供细胞学实验基础。 方法 :采用胰蛋白酶消化法消化人足月胎盘组织 ,以 3 5 %、4 5 %两个Percoll密度梯度进行分离纯化。用ABC免疫组化染色法对足月分娩后的胎盘组织石蜡包埋切片及体外分离培养的胎盘滋养层细胞进行染色。 结果 :胎盘组织中滋养层细胞角蛋白染色阳性 ,血管内皮细胞及基质成分波形蛋白染色阳性 ,经该法分离纯化的细胞角蛋白染色阳性者(滋养层细胞 )占 90 %以上 ,胎盘组织切片的滋养层细胞及体外分离培养的滋养层细胞抗CD16染色阳性 ,阳性信号定位于胞质 ,未见胞核着色。 结论 :改进后的分离方法可以得到较高纯度的滋养层细胞 ,胎盘组织的滋养层细胞和体外分离培养的滋养层细胞均有CD16表达。 展开更多
关键词 滋养层细胞 分离纯化 细胞培养 fc受体 体外实验 表达
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PRRSV感染PAM中猪FcγRⅢ介导的免疫抑制反应 被引量:3
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作者 李娜娜 王冬梅 +4 位作者 杜东颖 秦运杰 夏平安 杨明凡 崔保安 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期731-735,740,共6页
目的:为研究猪FcγRⅢ介导猪繁殖与呼吸综合征病毒( Porcine reproductive and respiratory syndrome virus , PRRSV)的免疫抑制反应。方法:本研究将含有200个TCID50的PRRSV、脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)(100 ng/ml)和纯... 目的:为研究猪FcγRⅢ介导猪繁殖与呼吸综合征病毒( Porcine reproductive and respiratory syndrome virus , PRRSV)的免疫抑制反应。方法:本研究将含有200个TCID50的PRRSV、脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)(100 ng/ml)和纯化鼠抗猪FcγRⅢIgG(550μg/ml)分别处理猪肺泡巨噬细胞( Pulmonary alveolar macrophages cell ,PAM),同时用纯化鼠抗猪FcγRⅢIgG处理PAM细胞后接种PRRSV,并设PAM细胞对照组。各组分别培养12、24、36、48、60、72 h后收集细胞及上清,用已经建立的绝对荧光定量PCR方法检测接毒组不同时间段的PRRSV复制水平,并用相对荧光定量PCR方法检测各组PAM细胞中IFN-α、TNF-α的mRNA转录水平。结果:PRRSV在感染PAM细胞后12~24 h期间可促进IFN-αmRNA转录水平,36~72 h期间抑制IFN-αmRNA转录水平,之后IFN-α的mRNA转录水平恢复正常;TNF-αmRNA转录水平在感染后12~72 h均略微上调。 LPS处理PAM细胞后,IFN-α、TNF-αmRNA转录水平均上调。用纯化鼠抗猪FcγRⅢIgG处理猪PAM细胞后,选择性激活猪PAM细胞表面FcγRⅢ,IFN-α、TNF-αmRNA转录水平显著下调,用PRRSV感染选择性激活猪PAM细胞表面FcγRⅢ后显著抑制抗病毒因子IFN-α、TNF-αmRNA转录水平。结论:FcγRⅢ的选择性激活抑制了宿主细胞的抗病毒因子水平及在PRRSV感染过程中的天然抗病毒免疫反应。 展开更多
关键词 fc受体 fcγr IFN-Α TNF-α Porcine-fcγr
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猪肺巨噬细胞FcγR Ⅲ受体基因的克隆与序列分析 被引量:15
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作者 徐红运 夏平安 +4 位作者 王中明 张凤华 卢高峰 刘玉松 崔保安 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第4期66-71,共6页
为研究猪肺巨噬细胞FcγRⅢ的生物学功能,本研究应用RT-PCR技术从猪肺巨噬细胞总RNA中克隆出猪FcγRⅢ的cDNA序列,并对其进行了分析。结果表明,克隆到的序列长820 bp,包含有1个771 bp完整开放阅读框(ORF),与Gen-Bank中登录的猪FcγRⅢ序... 为研究猪肺巨噬细胞FcγRⅢ的生物学功能,本研究应用RT-PCR技术从猪肺巨噬细胞总RNA中克隆出猪FcγRⅢ的cDNA序列,并对其进行了分析。结果表明,克隆到的序列长820 bp,包含有1个771 bp完整开放阅读框(ORF),与Gen-Bank中登录的猪FcγRⅢ序列(AF237453)的核苷酸同源性为99.9%;与人、牛、马、绵羊、猕猴、狗、猫、小鼠氨基酸同源性分别为61.6%、62.9%、55.3%、62.2%、63.0%、59.0%、61.8%和53.2%;蛋白质分子结构预测结果表明,该分子由信号肽(20个氨基酸)、胞外区(185个氨基酸)、跨膜区(23个氨基酸)和胞内区(28个氨基酸)组成,在胞外区存在2个Ig样结构域。猪肺巨噬细胞FcγRⅢ基因的成功克隆,为进一步研究其结构与功能奠定基础。 展开更多
关键词 猪肺巨噬细胞fcγr 基因克隆 序列分析
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牛IgG2Fc受体(boFcγ2R)胞外区基因原核表达载体的构建及其表达 被引量:4
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作者 席俊 张改平 +5 位作者 何礼洋 朱礼倩 南楠 张利娜 邓瑞广 李学伍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期178-180,共3页
目的:构建牛Fcγ2R胞外区基因的原核表达载体,并在E.coliBL21(DE3)中表达。方法:提取健康成年牛的白细胞总RNA,经RT-PCR扩增牛Fcγ2R胞外区基因片段,并将其克隆到载体pGEM-TEasy,经限制性内切酶EcoRI和NotI双酶切鉴定及序列测定后,再将... 目的:构建牛Fcγ2R胞外区基因的原核表达载体,并在E.coliBL21(DE3)中表达。方法:提取健康成年牛的白细胞总RNA,经RT-PCR扩增牛Fcγ2R胞外区基因片段,并将其克隆到载体pGEM-TEasy,经限制性内切酶EcoRI和NotI双酶切鉴定及序列测定后,再将其亚克隆入原核表达载体pET28a中,构建重组质粒pET-2R,转化E.coliBL21(DE3)经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白。结果:获得682bp的编码牛Fcγ2R胞外区基因片段。以构建的重组质粒pET-2R转化E.coliBL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约为30000的重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coliBL21(DE3)的胞质中,Western blot检测表明该蛋白能和牛IgG2结合。结论:成功地构建了原核表达载体pET-2R,并表达出重组蛋白。为研究牛IgG和受体的相互作用机制及其介导的免疫反应打下了基础。 展开更多
关键词 fcγ2r 胞外区基因 克隆 表达
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FcγR基因在成人牙周炎中的分布 被引量:6
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作者 伏雅莉 曹采方 +1 位作者 王申五 陈智滨 《现代口腔医学杂志》 CAS CSCD 1999年第4期257-260,共4页
目的 探讨FcγR 基因多态性与成人牙周炎(AP) 易感性的关系。方法 提取60 例AP 和36 例健康对照者的静脉血白细胞DNA,分别用PCR+ BstUI酶切和PCR+ 测序检测FcγRIIA 和FcγRIIIB 的基因型,比较各基因型检出率的差别。结果 FcγRIIA ... 目的 探讨FcγR 基因多态性与成人牙周炎(AP) 易感性的关系。方法 提取60 例AP 和36 例健康对照者的静脉血白细胞DNA,分别用PCR+ BstUI酶切和PCR+ 测序检测FcγRIIA 和FcγRIIIB 的基因型,比较各基因型检出率的差别。结果 FcγRIIA 和FcγRIIIB 基因型在重度AP 吸烟者与不吸烟者间的分布无差别,在不吸烟的重度、轻中度AP 和健康组三组间的分布也无差别,FcγRIIA H131 、R131 等位基因频率和FcγRIIIB NA1 、NA2的分布亦无差别。结论 本研究提示中国人中FcγRIIA 和FcγRIIIB 基因型与AP 的遗传易感性无关。 展开更多
关键词 牙周炎 fcΓr 基因型 易感性
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利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立FcγR基因大片段敲除小鼠模型 被引量:4
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作者 吴曦 霍桂桃 +5 位作者 刘甦苏 谷文达 曹愿 柳全明 吕建军 范昌发 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期583-591,共9页
目的使用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除长度约为90kb的小鼠FcγR2b,FcγR3,FcγR4基因簇,为构建FcγR基因人源化小鼠奠定基础。方法使用在线预测软件在FcγR2b,FcγR3外显子区设计sgRNA,在每一位点挑选脱靶效应较低的五个候选sgRNA。通过... 目的使用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除长度约为90kb的小鼠FcγR2b,FcγR3,FcγR4基因簇,为构建FcγR基因人源化小鼠奠定基础。方法使用在线预测软件在FcγR2b,FcγR3外显子区设计sgRNA,在每一位点挑选脱靶效应较低的五个候选sgRNA。通过CRISPR/Cas9活性检测试剂盒检测sgRNA在体外的活性。选取活性较高的sgRNA体外转录,与Cas9mRNA一并注射受精卵。通过PCR检测及测序,得到1只敲除片段为89711bp的基因修饰小鼠,且同时敲除FcγR2b基因5’端,FcγR3基因3’端及FcγR4基因。而且还利用软件预测了8个脱靶可能性最高的位点,并对首建鼠基因组的上述8个脱靶位点全部测序确认。结果结果显示未在预测脱靶位点附近发现小片段插入或缺失。结论建立了利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除基因组超大片段的技术,该技术结合BAC转基因技术,将为建立含有复杂基因族的人源化小鼠提供新的途径。 展开更多
关键词 CrISPr/Cas9 fcγr基因 大片段敲除 小鼠
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FcγRⅡB_1介导的信号传导异常与SLE患者B细胞的过度活化 被引量:4
14
作者 彭克军 肖林生 +1 位作者 费樱 王树人 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期769-771,共3页
目的:观察系统性红斑狼疮(SLE)患者B细胞表面功能分子表达的特征及其功能状态,评价以FcγRⅡB1(CD32)为代表的B细胞自身抑制调节机制在SLE发病中的作用。方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离出人外周血单个核细胞(PBMC),并以免疫磁珠法(M... 目的:观察系统性红斑狼疮(SLE)患者B细胞表面功能分子表达的特征及其功能状态,评价以FcγRⅡB1(CD32)为代表的B细胞自身抑制调节机制在SLE发病中的作用。方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离出人外周血单个核细胞(PBMC),并以免疫磁珠法(MACS)分离纯化B细胞。采用荧光分光光度法检测B细胞受不同激活物刺激后细胞内钙([Ca2+]i)的反应。用ELISA法检测B细胞与刺激物共同培养后所分泌IgG的量。采用流式细胞术及间接免疫荧光染色法,检测B细胞膜表面CD32、CD19及IgM的表达水平。结果:(1)以羊抗人μ链的F(ab′)2片段及完整IgG分别刺激SLE患者B细胞时,其[Ca2+]i反应的比值显著低于类风湿性关节炎(RA)患者(P<0.05)及正常人对照(P<0.01)。(2)分别用葡萄球菌A蛋白(SPA)单独刺激与SPA和羊抗人μ链的完整IgG抗体共同刺激SLE患者的B细胞所分泌的IgG的比值,明显低于RA患者及正常人对照组(P<0.05)。(3)SLE患者与RA患者及正常对照组B细胞上CD19、CD32及IgM的表达无统计学意义(P>0.05)。结论:SLE患者B细胞上CD32抑制性信号传导的异常,可能是导致B细胞过度活化的重要机制。 展开更多
关键词 SLE B细胞 [Ca^2+] fcγrⅡB1(CD32)
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人FcεRIα亚基细胞外区的原核表达及其和IgE结合的机制 被引量:3
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作者 杨丹榕 修清玉 韩焕兴 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1260-1262,共3页
应用两种不同的表达系统对FceR I α亚基的细胞外区进行克隆和表达,表达产物经纯化后用免疫斑点杂交法检测其与IgE结合的能力,探索IgE与其高亲和力受体FceR I α亚基的细胞外区结合的机制。结果两种体系均成功表达出FceRI α亚基的细胞... 应用两种不同的表达系统对FceR I α亚基的细胞外区进行克隆和表达,表达产物经纯化后用免疫斑点杂交法检测其与IgE结合的能力,探索IgE与其高亲和力受体FceR I α亚基的细胞外区结合的机制。结果两种体系均成功表达出FceRI α亚基的细胞外区,pBAD/gⅢA表达的FceR I α亚基的细胞外区能与IgE结合,而PQE30表达的FeaR I α亚基的细胞外区不能与IgE结合。提示FccR I α亚基的细胞外区已足够和IgE结合,无需β、γ亚基的存在,其所具有的一定的空间构型和二硫键的形成在与IgE结合时是必需的,而糖基化位点在与IgE的结合时是非必需的。 展开更多
关键词 fcεrⅠα亚基 细胞外区 IGE 基因表达 过敏反应性疾病
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系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞FcγRⅡb和血清sCD30水平变化与Th1/Th2细胞漂移关系的研究 被引量:4
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作者 卢志明 宋晓斐 +3 位作者 邵松 崔相法 陈国建 赵跃然 《检验医学》 CAS 北大核心 2006年第6期606-609,共4页
目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)FcγRⅡb、CD30的表达与辅助T细胞亚型(Th1/Th2)漂移在SLE发病机制中的作用。方法检测了129例SLE患者和30名健康对照者PBMCFcγRⅡb、Th1、Th2细胞以及血清sCD30;FcγRⅡb的检测... 目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)FcγRⅡb、CD30的表达与辅助T细胞亚型(Th1/Th2)漂移在SLE发病机制中的作用。方法检测了129例SLE患者和30名健康对照者PBMCFcγRⅡb、Th1、Th2细胞以及血清sCD30;FcγRⅡb的检测采用流式细胞术,血清sCD30的检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA),Th1、Th2细胞的检测采用免疫组化染色方法。结果SLE患者与健康对照者相比,PBMC FcγRⅡb的表达以及Th1细胞明显降低(P<0.01),而血清sCD30水平以及Th2细胞显著升高(P<0.01)。结论PBMC FcγRⅡb、CD30表达的变化以及Th1/Th2细胞漂移与SLE发病机制有关。 展开更多
关键词 fcγrⅡb SCD30 TH1/TH2细胞 系统性红斑狼疮
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炭疽毒素受体与人IgG1的Fc段融合蛋白ATR-Fc在CHO细胞中的表达 被引量:4
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作者 高丽华 胡显文 +3 位作者 陈薇 徐俊杰 赵剑 陈惠鹏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期826-831,共6页
ATR_Fc是人炭疽毒素受体(ATR)的胞外区与人免疫球蛋白IgG1的铰链区、CH2区和CH3区组成的融合蛋白。表达该蛋白是为了获得结合PA的抗体样分子,通过阻断PA与细胞受体的结合,而阻止炭疽致死毒素和水肿因子进入细胞内,可作为预防和治疗炭疽... ATR_Fc是人炭疽毒素受体(ATR)的胞外区与人免疫球蛋白IgG1的铰链区、CH2区和CH3区组成的融合蛋白。表达该蛋白是为了获得结合PA的抗体样分子,通过阻断PA与细胞受体的结合,而阻止炭疽致死毒素和水肿因子进入细胞内,可作为预防和治疗炭疽感染的生物制品。将编码炭疽毒素受体N端1_227氨基酸的基因和编码Fc段的基因连接,插入到pcDNA3.1的HindⅢ和NotⅠ位点得到表达ATR_Fc融合蛋白的真核表达载体pcDNA3.1ATR_Fc,并用脂质体方法将该载体转染至CHO_K1细胞中,用G418筛选并获得ATR_Fc表达水平为10~15μg(106cells·d)的基因工程CHO细胞系ATR_Fc_1D5。采用蛋白A纯化重组蛋白,并用ELISA法鉴定ATR_Fc与PA的亲和性,表明ATR_Fc可与PA特异性结合。 展开更多
关键词 炭疽毒素受体 fc融合蛋白 重组CHO细胞 抗体类分子 抗毒素
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FcγRⅡb与狼疮性肾炎病理活动的相关性 被引量:2
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作者 聂英坤 张凤山 +1 位作者 朱绿松 祖元刚 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期351-351,共1页
关键词 fcγr b 肾炎 狼疮
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PCR克隆高GC含量牛Fcγ2R cDNA 被引量:2
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作者 乔松林 张改平 +6 位作者 王丽 张红 张华 付彦峰 郭军庆 王选年 夏春 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2005年第5期67-69,共3页
根据已发表的牛Fcγ2RcDNA序列设计1对引物,采用改进的RT -PCR技术从牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增出了GC含量为6 4%的牛Fcγ2RcDNA分子,克隆片段全长795个核苷酸,含有一个完整的开放阅读框,编码2 6 5个氨基酸,和已报道的序列相比存在3... 根据已发表的牛Fcγ2RcDNA序列设计1对引物,采用改进的RT -PCR技术从牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增出了GC含量为6 4%的牛Fcγ2RcDNA分子,克隆片段全长795个核苷酸,含有一个完整的开放阅读框,编码2 6 5个氨基酸,和已报道的序列相比存在3个碱基突变。 展开更多
关键词 牛IgG fcγ2r 克隆
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抗猪FcγRⅡb多抗阻断猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体依赖增强作用研究 被引量:6
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作者 蒋志政 张改平 +6 位作者 刘明阳 乔松林 刘永晖 王蕊 万博 鲍登克 王爱萍 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第4期139-142,145,共5页
为验证猪FcγRⅡb在抗体依赖增强(ADE)作用中的功能,从猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清中提取IgG并制备F(ab′)2片段,将104 TCID50的PRRSV病毒与80μg/mL的F(ab′)2片段或抗PRRSV阳性血清(中和效价1/5.9,经128倍稀释)混合,共同... 为验证猪FcγRⅡb在抗体依赖增强(ADE)作用中的功能,从猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清中提取IgG并制备F(ab′)2片段,将104 TCID50的PRRSV病毒与80μg/mL的F(ab′)2片段或抗PRRSV阳性血清(中和效价1/5.9,经128倍稀释)混合,共同感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)和Marc-145细胞,发现亚中和滴度的阳性血清能显著增强病毒对PAM的感染,但不能增强病毒对Marc-145细胞的感染;而F(ab′)2片断不能增强病毒感染;用兔抗猪FcγRⅡb多抗孵育PAM细胞,再用上述病毒与阳性血清复合物感染PAM,结果阳性血清对病毒感染的增强作用受到明显抑制。表明猪FcγRⅡb能够介导PRRSV ADE作用。 展开更多
关键词 抗体依赖增强(ADE) 阻断 IgGfc受体 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PrrSV) 感染
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