期刊文献+
共找到10篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
定点突变对BPI_(23)-Fcγ1重组抗菌蛋白表达和复性率的影响 被引量:4
1
作者 安云庆 柯岩 +1 位作者 靖学芳 杨贵贞 《首都医科大学学报》 CAS 2002年第3期197-201,共5页
为提高BPI2 3 Fcγ1重组抗菌蛋白在原核表达系统中的表达和复性率 ,采用定点突变法改造 pBV BPI60 0 Fcγ1 70 0 重组表达载体 ,转化E .coliDH5α后 ,通过温控诱导表达。结果表明 :①突变后BPI2 3 Fcγ1重组抗菌蛋白表达量比突变前... 为提高BPI2 3 Fcγ1重组抗菌蛋白在原核表达系统中的表达和复性率 ,采用定点突变法改造 pBV BPI60 0 Fcγ1 70 0 重组表达载体 ,转化E .coliDH5α后 ,通过温控诱导表达。结果表明 :①突变后BPI2 3 Fcγ1重组抗菌蛋白表达量比突变前提高约 1 0 % ;②表达时间提前约 1h ;③抗菌活性未受影响 ; 展开更多
关键词 定点突变 pBV-BPI600-fcγ1700重组表达载体 BPI23-fcγ1重组抗菌蛋白
下载PDF
重组BPI_(23)-Fcγ1融合蛋白在CHO细胞中的表达 被引量:6
2
作者 徐俊杰 徐静 +1 位作者 童贻刚 王海涛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期587-589,共3页
The fusion gene of BPI 23 and human Fcγ1 was obtained by PCR method,and the expression plasmid was constructed to express recombinant BPI 23 \|Fcγ1 fusion protein in CHO cells.After transfection with the plasmid and... The fusion gene of BPI 23 and human Fcγ1 was obtained by PCR method,and the expression plasmid was constructed to express recombinant BPI 23 \|Fcγ1 fusion protein in CHO cells.After transfection with the plasmid and selection by methotrexate,the cell lines expressing the fusion protein were obtained.The recombinant protein was purified using cation\|exchange chromatography and its bioactivity was proved with bactericidal assays. 展开更多
关键词 杀菌/通透性增加蛋白 BPI23-fcγ1融合蛋白 表达 CHO细胞 重组
下载PDF
CONSTRUCTION, EXPRESSION AND BIOLOGICAL ASSESSMENT OF BPI_(23)-Fcγ1 RECOMBINANT PROTEIN PROKARYOTIC EXPRESSION VECTOR 被引量:7
3
作者 安云庆 管远志 +1 位作者 柯岩 杨贵贞 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2002年第3期140-147,共8页
关键词 pBV BPI600 fcγ1700 recombinant expression vector BPI23 fcγ1 recombinant protein Objective. To construct pBV BPI600 fcγ1700 recombinant expression vector to transform it into Escherichia coli DH5α and to induce the expression of BPI2
下载PDF
BPI_(m23)-Fcγ1重组抗菌蛋白在CHO细胞中的表达及其对耐药菌的作用
4
作者 靖学芳 吕喆 +4 位作者 李晨 刘振龙 孙明洁 高燕 安云庆 《首都医科大学学报》 CAS 2006年第2期150-154,共5页
目的 在CHO细胞中表达功能性BPIm23-Fcγ1重组抗菌蛋白,检测该种抗菌蛋白对临床常见耐药性革兰阴性菌(G^-菌)(大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌)的抑杀作用。方法 用pSNAV-signal-syn BPIm600-Fcγ1700转染CHO-K1细胞,通过Dot blot筛... 目的 在CHO细胞中表达功能性BPIm23-Fcγ1重组抗菌蛋白,检测该种抗菌蛋白对临床常见耐药性革兰阴性菌(G^-菌)(大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌)的抑杀作用。方法 用pSNAV-signal-syn BPIm600-Fcγ1700转染CHO-K1细胞,通过Dot blot筛选获得高表达BPIm23-Fcγ1目的蛋白的阳性细胞克隆,经PF-CHO培养基扩大培养,获得分泌表达的BPIm23-Fcγ1重组抗菌蛋白。采用离子交换层析、Western blot和ELISA方法纯化、鉴定目的重组蛋白。采用微量细菌定量药敏试验法检测目的抗菌蛋白对耐药性大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌的抑杀作用。结果 获得了高表达BPIm23-Fcγ1目的重组蛋白的阳性细胞克隆,目的蛋白表达量约为25-50mg/L。目的蛋白经Western blot和ELISA方法检测证实确为BPIm23-Fcγ1重组蛋白。该重组抗菌蛋白对耐药和非耐药性大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌具有同等抑杀作用。结论 获得了功能性BPIm23-Fcγ1重组抗菌蛋白,该重组蛋白(O.4mg/L)能有效抑杀耐药性大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌。 展开更多
关键词 BPIm23-fcγ1重组抗菌蛋白 CHO-K1细胞 耐药菌
下载PDF
AAV2-BPI_(700)-Fcγ1_(700)重组病毒导入小鼠对致死量大肠埃希菌感染的保护作用机制 被引量:3
5
作者 郭向华 李晨 +7 位作者 陈庆华 吕喆 李静 彭智 李莉 靖学芳 孔庆利 安云庆 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期150-154,共5页
目的探讨BPI_(700)-Fcγ1_(700)嵌合基因导入,对最小致死量E.coli感染小鼠的保护作用机制。方法采用常规菌落计数法、内毒素和细胞因子检测试剂盒、H-E染色法检测菌落数、内毒素和细胞因子含量及主要器官病理学改变。结果(1)基因导入小... 目的探讨BPI_(700)-Fcγ1_(700)嵌合基因导入,对最小致死量E.coli感染小鼠的保护作用机制。方法采用常规菌落计数法、内毒素和细胞因子检测试剂盒、H-E染色法检测菌落数、内毒素和细胞因子含量及主要器官病理学改变。结果(1)基因导入小鼠血清中的目的基因产物对E.coli具有杀伤作用,可中和内毒素和介导吞噬细胞产生交叉调理吞噬作用;(2)基因导入组小鼠血清、脏器中细菌数明显低于对照组小鼠;(3)基因导入组小鼠血清中内毒素和促炎细胞因子含量显著低于对照组小鼠;(4)对照组濒死小鼠主要脏器血管扩张、淤血明显,与内毒素休克死亡引发的病理学改变相符。结论基因导入组小鼠可通过表达目的基因产物即BPI1-199-Fcγ1嵌合抗菌蛋白,对致死量E.coli感染及其引发的内毒素休克死亡产生抵抗作用。 展开更多
关键词 BPI700-fcγ1 700嵌合基因 菌落形成单位 内毒素 促炎细胞因子
原文传递
AAV2-BPI_(700)-Fcγ1_(700)重组病毒的制备及其转染小鼠后的抗感染作用 被引量:4
6
作者 李晨 郭向华 +7 位作者 陈庆华 吕喆 李静 彭智 李莉 靖学芳 孔庆利 安云庆 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期873-877,共5页
目的通过观测BPI700-Fcγ1700嵌合基因导入小鼠对最小致死量E.coli感染攻击的抵抗作用,探讨基因治疗在细菌感染性疾病中应用的可能性。方法采用RT2PCR检测嵌合基因在转录水平的表达;采用免疫组化和酶联免疫吸附实验检测嵌合基因在蛋白... 目的通过观测BPI700-Fcγ1700嵌合基因导入小鼠对最小致死量E.coli感染攻击的抵抗作用,探讨基因治疗在细菌感染性疾病中应用的可能性。方法采用RT2PCR检测嵌合基因在转录水平的表达;采用免疫组化和酶联免疫吸附实验检测嵌合基因在蛋白水平的表达。结果(1)基因导入小鼠中目的嵌合基因得到表达,在注射部位肌肉组织和血清中可检测到目的嵌合蛋白;(2)在最小致死量E.coli感染攻击后,基因导入小鼠的存活率为31.43%,明显高于对照组小鼠的存活率4.62%;与小剂量头孢呋辛钠联合应用其存活率高达65%。结论BPI700-Fcγ1700嵌合基因导入小鼠对致死量E.coli感染具有较好抵抗作用,提示抗感染基因治疗在细菌感染性疾病,特别是在感染高危人群中具有广阔的临床应用前景。 展开更多
关键词 腺相关病毒(AAV) BPI700-fcγ1 700嵌合基因 最小致死量 革兰阴性菌
原文传递
BPI_(23)-Fcγ1重组融合蛋白在E.coli中的表达 被引量:3
7
作者 柯岩 安云庆 杨贵贞 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期451-455,共5页
目的 构建pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体 ,转化E .coliDH5α诱导表达BPI2 3 Fcγ1抗菌重组蛋白。方法 采用RT PCR技术 ,从HL 6 0细胞和正常人白细胞mRNA中扩增编码BPI2 3 和IgG1Fc(Fcγ1)的基因 ;通过连接反应构建重组克隆载... 目的 构建pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体 ,转化E .coliDH5α诱导表达BPI2 3 Fcγ1抗菌重组蛋白。方法 采用RT PCR技术 ,从HL 6 0细胞和正常人白细胞mRNA中扩增编码BPI2 3 和IgG1Fc(Fcγ1)的基因 ;通过连接反应构建重组克隆载体和重组表达载体 ;转化感受态E .coliDH5α细胞 ,通过温控诱导表达BPI2 3 Fcγ1重组蛋白。结果  (1)RT PCR获得预期的扩增产物BPI60 0bp和Fcγ170 0bp基因片段 ;(2 )成功构建pUC18 BPI180 、pUC18 BPI4 2 0 、pUC18 Fcγ170 0 重组克隆载体 ,DNA测序结果与文献报道一致 ;(3)成功构建pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体 ,酶切图谱分析与预期结果相符 ;(4 )转化感受态E .coliDH5α细胞 ,通过温控诱导表达BPI2 3 Fcγ1重组蛋白 ,表达量约占菌体蛋白总量的 2 0 %~ 30 % ;(5 )复性后重组蛋白具有抗菌活性和结合蛋白A的作用。结论 pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体构建成功 ;在E .coli中得到表达 ,获得具有抗菌活性的BPI2 3 展开更多
关键词 BPI23-fcγ1重组蛋白 聚合酶链反应 抗菌蛋白
原文传递
人IgG1FccDNA的克隆与鉴定
8
作者 安云庆 柯岩 陈金栋 《首都医科大学学报》 CAS 2000年第2期93-96,共4页
根据编码人IgG1Fc(Fcγ1 )的基因序列 ,设计合成 1对与之相匹配的引物。采用RT PCR法 ,从正常人白细胞mRNA中扩增获得预期目的基因Fcγ1 70 0bp基因片段 ,成功构建PUC1 8 Fcγ1 70 0 重组克隆载体 ,酶切、酶谱分析与预期结果相符 ;DNA... 根据编码人IgG1Fc(Fcγ1 )的基因序列 ,设计合成 1对与之相匹配的引物。采用RT PCR法 ,从正常人白细胞mRNA中扩增获得预期目的基因Fcγ1 70 0bp基因片段 ,成功构建PUC1 8 Fcγ1 70 0 重组克隆载体 ,酶切、酶谱分析与预期结果相符 ;DNA测序结果与GenBank报道一致。 展开更多
关键词 IgG1Fe(fcγ1) RT-PCR 克隆 鉴定
下载PDF
Protection of Mice from Lethal Endotoxemia by Chimeric Human BPI-Fcγ1 Gene Delivery 被引量:7
9
作者 Chen Li Jing Li +4 位作者 Zhe Lv Xinghua Guo Qinghua Chen Qingli Kong Yunqing An 《Cellular & Molecular Immunology》 SCIE CAS CSCD 2006年第3期221-225,共5页
To evaluate the potentiality of applying gene therapy to endotoxemia in high-risk patients, we investigated the effects of transferring an adeno-associated virus serotype 2 (AAV2)-mediated BPI-Fcγ1 gene on protecti... To evaluate the potentiality of applying gene therapy to endotoxemia in high-risk patients, we investigated the effects of transferring an adeno-associated virus serotype 2 (AAV2)-mediated BPI-Fcγ1 gene on protecting mice from challenge of lethal endotoxin. The chimeric BPI-Fcγ1 gene consists of two parts, one encods functional N-terminus (1 to 199 amino acidic residues) of human BPI, which is a bactericidal/permeability-increasing protein, and the other encodes Fc segment of human immunoglobulin G1 (Fcγ1). Our results indicated that the target protein could be expressed and secreted into the serum of the gene-transferred mice. After lethal endotoxin challenge, the levels of endotoxin and TNF-a in the gene-transferred mice were decreased. The survival rate of the BPI-Fcγ1 gene-transferred mice was markedly increased. Our data suggest that AAV2-mediated chimeric BPI-Fcγ1 gene delivery can potentially be used clinically for the protection and treatment of endotoxemia and endotoxic shock in high-risk individuals. Cellular & Molecular Immunology. 2006;3(3):221-225. 展开更多
关键词 BPI-fcγ1 AAV2 gene therapy minimal lethal dose (MLD)
原文传递
rAAV2-BF增强两品系小鼠抗致死剂量细菌感染
10
作者 关翔宇 刘振龙 +3 位作者 吕喆 孔庆利 王炜 安云庆 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2010年第9期918-924,共7页
目的通过观测rAAV2-BPI1-199-Fcγ1重组病毒(rAAV-BF)感染对不同品系小鼠的抗细菌感染保护作用。方法采用dot blot、Western blot、免疫组化、改良ELISA方法和内毒素检测试剂盒,检测重组BPI1-199-Fcγ1(rBF)蛋白在CHO细胞和小鼠骨骼肌... 目的通过观测rAAV2-BPI1-199-Fcγ1重组病毒(rAAV-BF)感染对不同品系小鼠的抗细菌感染保护作用。方法采用dot blot、Western blot、免疫组化、改良ELISA方法和内毒素检测试剂盒,检测重组BPI1-199-Fcγ1(rBF)蛋白在CHO细胞和小鼠骨骼肌细胞中的表达及血清中内毒素含量的变化;建立最小致死量(MLD)E.coli致死模型,检测rBF基因转染小鼠对MLDE.coli感染的抵抗作用。结果(1)rBF蛋白在CHO细胞和两品系小鼠骨骼肌细胞中成功表达,血清中rBF蛋白具有中和内毒素和杀伤E.coli的作用;(2)在MLDE.coli腹腔感染后,两品系小鼠rAAV-BF感染组存活率均显著高于空载体对照组小鼠;基因转染组小鼠血清内毒素含量明显低于空载体对照组;rAAV-BF感染与头孢呋辛钠联合应用具有协同抗菌作用,两品系小鼠存活率明显高于单纯rAAV-BF感染组。结论rAAV-BF感染组小鼠对致死性E.coli感染具有抵抗作用。 展开更多
关键词 AAV2-BPI1-199-fcγ1重组病毒 BPI1-199-fcγ1重组蛋白 革兰阴性菌 内毒素 最小致死量
下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部