IgG受体FcγRⅡB调节实验性自身免疫性脑脊髓炎致神经元损伤及Th17/Treg免疫平衡的作用研究

目的:探究IgG受体FcγRⅡB对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠神经元损伤与Th17/Treg失衡的作用。方法:C57BL/6小鼠随机分组为对照组、EAE组、FcγRⅡB组、EAE+FcγRⅡB组,每组15只,皮下注射MOG35-55肽诱导EAE模型,并给予FcγRⅡB慢病毒液处理;造模后每日称量小鼠体质量,进行神经功能评分,持续30 d;30 d后处死小鼠,HE染色观察脑组织病理形态学变化,LFB染色评估脊髓髓鞘结构变化,免疫荧光染色检测脊髓大脑皮质神经元核抗原(NeuN)和Caspase-3表达,TUNEL染色检测神经元细胞凋亡,ELISA检测血清IL-6、IL-17、IL-10及TGF-β水平,流式细胞术分析脾脏Th17、Treg细胞比例分布,Western blot测定脊髓组织维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)与Forkhead家族转录因子3(Foxp3)蛋白表达。结果:与对照组比较,EAE组小鼠体质量下降,神经功能评分升高,脑组织内炎症细胞浸润明显,脊髓中出现脱髓鞘迹象,NeuN荧光表达强度减弱而Caspase-3荧光表达强度增强,TUNEL阳性着色细胞多,细胞凋亡数增加,血清中IL-6和IL-17水平升高,IL-10和TGF-β水平降低,脾脏内Th17细胞比例升高,Treg比例降低,脊髓组织内RORγt蛋白表达上调,Foxp3蛋白表达下调(P<0.05);与EAE组比较,EAE+FcγRⅡB组小鼠体质量增加,神经功能评分降低,脑组织内炎症细胞浸润减轻,脊髓脱髓鞘现象得到改善,NeuN荧光表达强度增强,Caspase-3荧光表达强度减弱,TUNEL阳性着色细胞较少,细胞凋亡数减少,血清中IL-6和IL-17水平降低,而IL-10和TGF-β水平升高,同时脾脏内Th17细胞比例降低,Treg比例升高,脊髓组织内RORγt蛋白表达下调而Foxp3蛋白表达上调(P<0.05)。结论:FcγRⅡB对EAE小鼠具有神经保护作用,可减轻其脑组织炎症细胞浸润及脱髓鞘现象,作用机制可能与调节细胞因子水平及Th17/Treg细胞免疫平衡有关。

参芪蛭龙汤对膜性肾病模型小鼠肾组织中FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA表达的影响

目的 探讨参芪蛭龙汤对膜性肾病(MN)模型小鼠肾组织中FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA表达的影响。方法 60只SPF级ICR小鼠,6周龄,体重(23±4)g,雌雄各半,按照随机数字表法分为空白组(10只)和造模组(50只)。造模组小鼠注射阳离子化牛血清白蛋白,复制MN小鼠模型。取其中造模成功的40只小鼠按照随机数字表法分为模型组,参芪蛭龙汤高、低剂量组(24、12 g/kg)和雷公藤多苷片组(14 mg/kg),每组10只。给药4周后,处死小鼠。HE、Masson染色观察肾脏组织病理变化;免疫荧光法观察肾组织中FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA蛋白荧光强度;Western blot检测肾脏组织内FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA蛋白表达;RT-PCR检测肾脏组织中FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA mRNA表达。结果 HE染色显示空白组小鼠上皮细胞、基底膜、肾小管及肾间质形态结构均未见明显异常。模型组小鼠肾小球体积增大,肾小球毛细血管袢扩张,血细胞溢出,肾小球系膜增厚,肾小囊腔增大,局部肾小囊腔壁上皮严重破损。与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组小鼠可见肾小球体积减小,基底膜增厚减轻,肾小囊壁上皮未破损或局部破损。Masson染色显示空白组小鼠肾小球基底膜正常。模型组小鼠上皮下大量嗜复红蛋白沉积,可见基底膜基质反应,肾小管空泡样脂肪变性,肾间质淋巴大量增生。与模型组比较,各给药组小鼠病变减轻,以参芪蛭龙汤高剂量组改善更加明显。与空白组比较,模型组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白荧光增强,FcγRⅡB蛋白荧光减弱(P<0.05);与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白荧光减弱(P<0.05),参芪蛭龙汤高、低剂量组FcγRⅡB蛋白荧光增强(P<0.05);与参芪蛭龙汤低剂量组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白荧光减弱,FcγRⅡB蛋白荧光增强(P<0.05)。与空白组比较,模型组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白表达升高,FcγRⅡB蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白表达降低,参芪蛭龙汤高、低剂量组FcγRⅡB蛋白表达升高(P<0.05);与参芪蛭龙汤低剂量组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅡB蛋白表达升高,FcγRⅢA蛋白表达降低(P<0.05)。与空白组比较,模型组FcγRⅠ、FcγRⅢA mRNA表达升高,FcγRⅡB mRNA表达降低(P<0.05);与模型组比较,参芪蛭龙汤高、低剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢAmRNA表达降低,FcγRⅡB mRNA表达升高(P<0.05);与参芪蛭龙汤低剂量组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢA mRNA表达降低,FcγRⅡB mRNA表达升高(P<0.05)。结论 参芪蛭龙汤对MN小鼠的治疗作用与改善肾组织病理改变,减少FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白的表达,增加FcγRⅡB蛋白表达有关,其中高浓度的参芪蛭龙汤效果更好。

FcγRⅡB_1介导的信号传导异常与SLE患者B细胞的过度活化

目的:观察系统性红斑狼疮(SLE)患者B细胞表面功能分子表达的特征及其功能状态,评价以FcγRⅡB1(CD32)为代表的B细胞自身抑制调节机制在SLE发病中的作用。方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离出人外周血单个核细胞(PBMC),并以免疫磁珠法(MACS)分离纯化B细胞。采用荧光分光光度法检测B细胞受不同激活物刺激后细胞内钙([Ca2+]i)的反应。用ELISA法检测B细胞与刺激物共同培养后所分泌IgG的量。采用流式细胞术及间接免疫荧光染色法,检测B细胞膜表面CD32、CD19及IgM的表达水平。结果:(1)以羊抗人μ链的F(ab′)2片段及完整IgG分别刺激SLE患者B细胞时,其[Ca2+]i反应的比值显著低于类风湿性关节炎(RA)患者(P<0.05)及正常人对照(P<0.01)。(2)分别用葡萄球菌A蛋白(SPA)单独刺激与SPA和羊抗人μ链的完整IgG抗体共同刺激SLE患者的B细胞所分泌的IgG的比值,明显低于RA患者及正常人对照组(P<0.05)。(3)SLE患者与RA患者及正常对照组B细胞上CD19、CD32及IgM的表达无统计学意义(P>0.05)。结论:SLE患者B细胞上CD32抑制性信号传导的异常,可能是导致B细胞过度活化的重要机制。

猪Fc_γRⅡb亚型(Fc_γRⅡb1)基因的分子克隆及鉴定

IgG Fc受体(FcγRs)的一个主要效应机制是可结合IgG免疫复合物发生反应。目前已鉴定出的FcγRs有4类:高亲和力的FcγRⅠ(CD64),中等亲和力的FcγRⅠ、FcγRⅡ(CD32),以及低亲和力的FcγRⅢ(CD16)。人FcγRⅡ主要有FcγRⅡa、FcγRⅡb、FcγRⅡc 3个亚型;小鼠有1个亚型FcγRⅡb;牛有2个亚型FcγRⅡb、FcγRⅡc。人、小鼠、牛中FcγRⅡb又包括2个亚型:FcγRⅡb1(b1)和FcγRⅡb2(b2),但有关猪FcγRⅡb亚型的研究鲜有报道。本研究对猪FcγRⅡb亚型(FcγRⅡb1)进行了分子克隆、测序及鉴定,并运用RT-PCR从猪外周血白细胞RNA中扩增出猪FcγRⅡb1cDNA序列。结果发现,猪FcγRⅡb1cDNA序列包含一个951bp的开放阅读框(ORF),可编码316个氨基酸跨膜糖蛋白,包括两个免疫球蛋白(Ig)样胞外结构域,一个跨膜区域,一个带有免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)的胞质尾区。猪FcγRⅡb1cDNA序列与DQ026064同源性为98.3%,其在胞质尾区有一19个氨基酸的插入框。荧光免疫试验结果发现,猪FcγRⅡb1cDNA序列编码的糖蛋白可稳定转染COS-7细胞,结合并激活IgG免疫复合物。猪FcγRⅡb1序列的鉴定为进一步了解猪免疫反应中IgG-FcγR相互作用的分子基础提供参考。

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞FcγRⅡb和血清sCD30水平变化与Th1/Th2细胞漂移关系的研究

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)FcγRⅡb、CD30的表达与辅助T细胞亚型(Th1/Th2)漂移在SLE发病机制中的作用。方法检测了129例SLE患者和30名健康对照者PBMCFcγRⅡb、Th1、Th2细胞以及血清sCD30;FcγRⅡb的检测采用流式细胞术,血清sCD30的检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA),Th1、Th2细胞的检测采用免疫组化染色方法。结果SLE患者与健康对照者相比,PBMC FcγRⅡb的表达以及Th1细胞明显降低(P<0.01),而血清sCD30水平以及Th2细胞显著升高(P<0.01)。结论PBMC FcγRⅡb、CD30表达的变化以及Th1/Th2细胞漂移与SLE发病机制有关。

转染FcγRⅡb1基因纠正SLE患者B细胞的过度活化

目的观察转染FcγRⅡb1基因能否纠正SLE患者B细胞的过度活化。方法构建人FcγRⅡb1基因真核载体,通过电穿孔转染SLE患者B细胞。分别采用抗人μ链的F(ab’)2片段[F(ab’)2anti-μ]和抗人μ链的完整IgG(IgG anti-μ)2种抗体刺激B细胞,同时以正常人B细胞作对照。采用分光光度计检测激活B细胞胞内[Ca2+]i反应,3H-TdR掺入法检测B细胞的增殖能力,ELISA法检测B细胞分泌抗体的功能。结果分别以F(ab’)2anti-μ和IgG anti-μ激活SLE患者B细胞后,细胞内[Ca2+]i反应、cmp值及IgG分泌量的比值均显著低于正常人(P<0.01),通过转染FcγRⅡb1基因后,这些比值均显著提高(P<0.01或P<0.05)。结论转染FcγRⅡb1基因能有效纠正SLE患者B细胞过度的活化、增殖及抗体分泌。

FcγRⅡB与系统性红斑狼疮

FcγRⅡB是相对分子质量为40 000的IgG低亲和力受体,FcγRⅡB的胞浆区含有以酪氨酸为基础的抑制小体ITIM(Immunoreceptor Tyrosinesed Inhibition Motif),有抑制淋巴细胞活化的作用。FcγRⅡB表达下降时产生免疫复合物的清除功能障碍,FcγRⅡB表达缺陷是系统性红斑狼疮(SLE)的重要易感因素。

类风湿关节炎患者外周血单核细胞FcγRⅡb表达及其与骨关节损害的相关性分析

目的探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单核细胞FcγRⅡb表达及其与骨关节损害的相关性。方法选取2018年1月至12月本院收治的35例初治RA患者纳入观察组,并以1∶1的比例配对选取同期于本院体检的35例健康成人纳入对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测两组研究对象外周血单核细胞FcγRⅡb mRNA的表达水平,采用酶联免疫吸附测定检测两组研究对象血清可溶性FcγRⅡb(sFcγRⅡb)、与IgG结合的可溶性FcγRⅡb(sFcγRⅡb-IgG)和抗FcγRIIb抗体含量,分析其与RA患者改良Sharp评分的相关性。结果观察组患者外周血单核细胞FcγRⅡb mRNA表达水平、血清sFcγRⅡb、抗FcγRⅡb抗体水平均显著低于对照组(均P<0.05),血清sFcγRⅡb-IgG水平显著高于对照组(P<0.05)。RA患者外周血单核细胞FcγRⅡb mRNA表达水平、血清sFcγRⅡb、抗FcγRⅡb抗体水平与改良Sharp评分均呈显著负相关(均P<0.05)。结论RA患者外周血单核细胞FcγRⅡb mRNA表达水平降低与骨关节损害显著相关,或可作为判断RA病情严重程度的生物标志物。

类风湿关节炎患者外周血B细胞FcγR Ⅱb表达

目的探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血B细胞亚群FcγRⅡb的表达及其临床意义。方法流式细胞仪检测20例初治RA患者及年龄性别匹配的15名健康对照者外周血B细胞FcγRⅡb的表达;评估其与RA病情指标的相关性。统计学分析采用独立样本t检验及Pearson相关分析。结果 RA患者记忆性B细胞亚群百分率[(18.30±8.94)%]低于健康对照组[(32.31±13.67)%],差异有统计学意义(t=3.665,P=0.001);初始B细胞亚群百分率[(78.11±9.00)%]高于健康对照组[(64.24±13.23)%],差异有统计学意义(t=-3.691,P=0.001);RA患者外周血CD19+CD27+记忆性B细胞表面FcγR IIb平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)[(7 571.95±4 494.53)%]显著低于健康对照组[(13 304.87±6 568.19)%],差异有统计学意义(t=3.068,P=0.004);RA患者外周血记忆性B细胞表面FcγRⅡb的MFI与RA患者的Ig G水平呈负相关(r=-0.732,P=0.007)。结论 RA患者外周血记忆性B细胞FcγR IIb表达低于健康对照,并与RA患者的Ig G水平呈负相关,FcγRⅡb表达异常可能在RA免疫发病机制中起重要作用。

猪FcγR ⅡB多种剪接异构体的基因克隆与序列分析

目的:研究猪FcγRⅡB受体基因选择性剪接的多样性。方法:根据GenBank中猪FcγRⅡB(swFcγRⅡB)cDNA基因序列(DQ026064),应用Primer5.0软件设计合成了一对特异性引物,应用RT-PCR技术,从不同个体的猪肺泡巨噬细胞中扩增FcγRⅡB基因并进行测序分析,在GenBank中查找猪FcγRⅡBDNA序列(NW-001886241.1),并用相关软件分析其外显子组成。结果:共克隆出6个转录体,其中转录体2,4在信号肽部分都有一个丙氨酸的缺失。转录体5,6是两个新型的FcγRⅡB转录体,转录体5胞外区只有一个Ig结构域,转录体6是一个只含有一个Ig结构域的推导性可溶性Fc受体。结论:猪FcγRⅡB的表达因RNA选择性剪接方式不同而呈现出多样性。

人FcγR Ⅱ b1基因真核载体的构建、表达及其对B细胞增殖的影响

目的构建人FcγRⅡb1基因的真核表达载体并转染人B细胞,观察其在B细胞的表达及其对细胞增殖的影响。方法分离健康人外周血B细胞,提取总RNA并逆转录为cDNA,采用PCR技术扩增出含有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的人FcγRⅡb1基因片段,将双酶切产物通过T4 DNA连接酶定向插入pIRES2-EG FP真核载体相应位点中,经酶切及双向测序鉴定其序列的正确性。通过电穿孔法将pIRES2-EGFP-FcγRⅡb1重组载体转入人B细胞中,采用荧光显微镜及流式细胞术检测转染效率及细胞表面FcγRⅡb1分子的表达水平,采用3H-TdR掺入法检测转染FcγRⅡb1基因对B细胞增殖能力的影响。结果酶切及测序鉴定pIRE S2-EGFP-FcγRⅡb1重组质粒基因序列完全正确,重组质粒转染细胞的效率为15.5%,转染细胞表面FcγRⅡb1分子的表达水平显著增高,并显著抑制了B细胞增殖能力。结论成功构建了pIRES2-EGFP-FcγRⅡb1真核表达载体,并赋予了FcγRⅡb1分子发挥免疫抑制功能的作用。

上调巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能

目的构建大鼠FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,观察其对巨噬细胞的作用。方法以大鼠肝脏mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒四环素(Tet)顺式应答元件(TRE),构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒调节质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和调节病毒,测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度。表达病毒和调节病毒共感染巨噬细胞,经梯度浓度强力霉素(DOX)诱导,免疫荧光技术检测巨噬细胞FcγRⅡB表达,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达。经不同浓度DOX诱导后的腹腔巨噬细胞分别检测吞噬和趋化功能。结果重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确。表达和调节病毒滴度均达到106转导单位/m L。巨噬细胞被病毒感染后经DOX诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示,FcγRⅡB能够在巨噬细胞表达;实时荧光定量PCR和Western blot结果显示FcγRⅡB表达水平与DOX浓度呈正相关。巨噬细胞的吞噬和趋化功能与FcγRⅡB表达呈负相关。结论调节巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能。

上调小鼠骨髓来源树突状细胞FcγRⅡb表达可抑制其抗原提呈功能

目的构建FcγRⅡb慢病毒载体,感染小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC),观察BMDC抗原提呈功能变化。方法小鼠骨髓细胞中提取RNA,反转录后进行PCR扩增得到FcγRⅡb目的基因,将FcγRⅡb基因插入慢病毒表达载体TRE中构建FcγRⅡb重组慢病毒载体。HEK293T细胞包装慢病毒,体外进行小鼠BMDC的诱导培养及鉴定。将慢病毒感染BMDC后,实时定量PCR检测BMDC中FcγRⅡb mRNA水平,Western blot法检测BMDC中FcγRⅡb蛋白水平,流式细胞术分析BMDC表面分子CD80、CD86、CD40、MHCⅡ的变化。结果成功构建FcγRⅡb重组慢病毒载体,经酶切、PCR鉴定及测序鉴定成功。体外诱导培养BMDC,可见细胞表面大量树枝样突起形成。包装慢病毒感染BMDC后,FcγRⅡb mRNA和蛋白水平均较未感染BMDC增高。流式细胞术分析感染后BMDC表面分子CD80、CD86、CD40、MHC II的表达量均较未感染BMDC下降。结论DC上FcγRⅡb的过表达能够下调其抗原提呈功能。

含人FcγRⅡB基因慢病毒的制备及其在HT-1080细胞中的表达

目的构建FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,并鉴定其在细胞中的表达。方法以人mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒TRE,构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒可诱导质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和可诱导病毒,分别测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度。表达病毒和可诱导病毒共感染HT-1080细胞,经梯度浓度强力霉素(Dox)诱导,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,免疫荧光染色检测HT-1080细胞FcγRⅡB表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达。结果重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定,测序结果显示插入片段碱基序列与GenBank提供FcγRⅡB基因序列同源性100%。表达病毒滴度达106TU/mL,可诱导病毒滴度达105TU/mL,感染性良好。HT-1080细胞被病毒感染后经Dox诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示FcγRⅡB能够在HT-1080细胞中表达;实时荧光定量PCR和Western blot法结果显示FcγRⅡB表达水平与诱导剂浓度正相关。结论成功制备了FcγRⅡB慢病毒,感染HT-1080细胞后可实现FcγRⅡB的诱导表达。

FcγRⅡB在重症肌无力中的表达及其与抗AChR抗体的关系

目的探讨免疫球蛋白IgG的Fc段受体ⅡB(FcγRⅡB)在重症肌无力(myasthenia gravis,MG)发病中的作用。方法采用逆转录-聚合酶链技术和流式细胞术,检测26名血清乙酰胆碱受体(AChR)抗体阳性MG患者和26名正常对照组外周血B淋巴细胞中FcγRⅡBmRNA和FcγRⅡB蛋白的表达水平,ELISA检测血清AChR抗体水平,分析三者之间的关系。结果 MG组外周血B细胞中FcγRⅡBmRNA的表达明显低于正常对照组(P<0.01),但在眼肌型患者和全身型患者的表达无统计学差异(P>0.05)。MG患者外周血B细胞上FcγRⅡB的表达低于对照组(P<0.05)。IgG型AChR抗体水平与B细胞中FcγRⅡB1mRNA和FcγRⅡB2mRNA表达水平呈负相关(P<0.01),与FcγRⅡB的表达亦为负相关(P<0.05)。结论 MG中B细胞上FcγRⅡB在转录和蛋白水平表达均降低,负调控作用减弱,造成B细胞过度活化,产生大量抗AChR自身抗体,可能是MG发病的一个重要环节。

牙周炎及不良妊娠结局与FcγRⅡB基因多态性的关系

牙周炎是不良妊娠结局(adverse pregnancy outcomes,APO)的危险因素,两者都与FcγRⅡB基因多态性有关,推测牙周炎与APO有关的背后机制是FcγRⅡB基因多态性的作用。本文就牙周炎、APO及FcγRⅡB基因多态性的关系作一综述,并为后续牙周炎与不良妊娠结局相关机制的研究提供依据。

化疗可增加肺鳞状细胞癌患者外周血中FcγRⅡB含量

目的检测肺鳞状细胞癌患者化疗前后外周血单核细胞和B细胞膜表面FcγRⅡB表达水平、血清中可溶性FcγRⅡB(s FcγRⅡB)及其抗体的含量。方法免疫荧光技术检测鳞状细胞癌患者化疗前后单核细胞和B细胞膜表面FcγRⅡB的表达和定位、实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA水平,Western blot法检测s FcγRⅡB蛋白水平;ELISA检测鳞状细胞癌患者化疗前后、健康人血清中s FcγRⅡB总量、与Ig G结合的s FcγRⅡB(s FcγRⅡB-Ig G)、抗FcγRⅡB自身抗体的含量变化。结果与健康人相比,鳞状细胞癌患者化疗前单核细胞和B细胞FcγRⅡB的水平、s FcγRⅡB总量及抗FcγRⅡB自身抗体的含量明显降低,化疗后高于化疗前;s FcγRⅡB-Ig G含量高于健康人,化疗后低于化疗前。结论鳞状细胞癌患者FcγRⅡB含量减少,化疗后FcγRⅡB表达有所增加。

小鼠FcγRⅡB基因重组腺病毒的构建及其对巨噬细胞分泌IL-10的影响

利用Ad-Max腺病毒载体系统包装含小鼠FcγRⅡB基因的重组腺病毒;采用改进的半数组织细胞感染量(TCID50)方法测定腺病毒滴度;以感染复数(MOI)为500的病毒量感染永生化小鼠骨髓来源的巨噬细胞(iBMDM),荧光显微镜观察细胞中GFP的表达,并用流式细胞术检测FcγRⅡB基因在细胞中的表达;ELISA检测FcγRⅡB蛋白对脂多糖(LPS)刺激后iBMDM细胞分泌IL-10的影响。结果表明:重组腺病毒质粒pHBAd-MCMV-GFP-FcγRⅡB构建成功;在HEK293细胞中成功包装和扩增了重组腺病毒和空载体腺病毒,滴度分别为1×1010和2×1010 pfu·mL-1;腺病毒感染iBMDM细胞72 h后,约60%的细胞表达GFP;流式细胞术结果显示,FcγRIIB膜蛋白在iBMDM细胞上高表达;ELISA结果显示,FcγRⅡB提高LPS刺激后iBMDM细胞上清液中IL-10含量。这一研究提示FcγRⅡB能抑制巨噬细胞炎症反应。

CpG ODN对哮喘小鼠肺组织FcεRⅠ、FcγRⅡb表达的影响

目的观察CpG ODN对哮喘小鼠肺组织FcεRⅠ、FcγRⅡb表达的影响,探讨其诱导免疫耐受的相关机制。方法将48只清洁级雄性Balb/c小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松(DXM)治疗组(C组)、CpG ODN治疗组(D组),每组12只。以卵白蛋白(OVA)作用建立小鼠哮喘模型。收集支气管肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)计数细胞总数并分类,取肺组织作病理,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织中FcεRⅠ、FcγRⅡb mRNA的表达。结果 (1)电镜观察肺组织超微结构:B组显示支气管及血管周围有较多炎性细胞浸润,肺泡隔内嗜酸粒细胞浸润,C组和D组与B组相比明显减轻。(2)BALF中炎症细胞表达变化:与B组相比,C组、D组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)绝对值以及EOS占细胞总数的百分比(EOS%)均显著减少(P<0.01)。(3)RT-PCR结果:C组、D组FcεRⅠmRNA表达均显著低于B组(P<0.01),C组、D组FcγRⅡb mRNA表达均显著高于B组(P<0.01)。(4)相关分析:小鼠肺组织FcεRⅠ和FcγRⅡb表达呈显著负相关(P<0.01,n=40)。结论 CpG ODN能降低哮喘小鼠肺组织FcεRⅠ的表达,增加FcγRⅡb的表达,具有改善气道炎症和诱导免疫耐受的作用。