小鼠FcγRⅡB基因重组腺病毒的构建及其对巨噬细胞分泌IL-10的影响

利用Ad-Max腺病毒载体系统包装含小鼠FcγRⅡB基因的重组腺病毒;采用改进的半数组织细胞感染量(TCID50)方法测定腺病毒滴度;以感染复数(MOI)为500的病毒量感染永生化小鼠骨髓来源的巨噬细胞(iBMDM),荧光显微镜观察细胞中GFP的表达,并用流式细胞术检测FcγRⅡB基因在细胞中的表达;ELISA检测FcγRⅡB蛋白对脂多糖(LPS)刺激后iBMDM细胞分泌IL-10的影响。结果表明:重组腺病毒质粒pHBAd-MCMV-GFP-FcγRⅡB构建成功;在HEK293细胞中成功包装和扩增了重组腺病毒和空载体腺病毒,滴度分别为1×1010和2×1010 pfu·mL-1;腺病毒感染iBMDM细胞72 h后,约60%的细胞表达GFP;流式细胞术结果显示,FcγRIIB膜蛋白在iBMDM细胞上高表达;ELISA结果显示,FcγRⅡB提高LPS刺激后iBMDM细胞上清液中IL-10含量。这一研究提示FcγRⅡB能抑制巨噬细胞炎症反应。