参芪蛭龙汤对膜性肾病模型小鼠肾组织中FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA表达的影响

目的 探讨参芪蛭龙汤对膜性肾病(MN)模型小鼠肾组织中FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA表达的影响。方法 60只SPF级ICR小鼠,6周龄,体重(23±4)g,雌雄各半,按照随机数字表法分为空白组(10只)和造模组(50只)。造模组小鼠注射阳离子化牛血清白蛋白,复制MN小鼠模型。取其中造模成功的40只小鼠按照随机数字表法分为模型组,参芪蛭龙汤高、低剂量组(24、12 g/kg)和雷公藤多苷片组(14 mg/kg),每组10只。给药4周后,处死小鼠。HE、Masson染色观察肾脏组织病理变化;免疫荧光法观察肾组织中FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA蛋白荧光强度;Western blot检测肾脏组织内FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA蛋白表达;RT-PCR检测肾脏组织中FcγRⅠ、FcγRⅡB、FcγRⅢA mRNA表达。结果 HE染色显示空白组小鼠上皮细胞、基底膜、肾小管及肾间质形态结构均未见明显异常。模型组小鼠肾小球体积增大,肾小球毛细血管袢扩张,血细胞溢出,肾小球系膜增厚,肾小囊腔增大,局部肾小囊腔壁上皮严重破损。与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组小鼠可见肾小球体积减小,基底膜增厚减轻,肾小囊壁上皮未破损或局部破损。Masson染色显示空白组小鼠肾小球基底膜正常。模型组小鼠上皮下大量嗜复红蛋白沉积,可见基底膜基质反应,肾小管空泡样脂肪变性,肾间质淋巴大量增生。与模型组比较,各给药组小鼠病变减轻,以参芪蛭龙汤高剂量组改善更加明显。与空白组比较,模型组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白荧光增强,FcγRⅡB蛋白荧光减弱(P<0.05);与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白荧光减弱(P<0.05),参芪蛭龙汤高、低剂量组FcγRⅡB蛋白荧光增强(P<0.05);与参芪蛭龙汤低剂量组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白荧光减弱,FcγRⅡB蛋白荧光增强(P<0.05)。与空白组比较,模型组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白表达升高,FcγRⅡB蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白表达降低,参芪蛭龙汤高、低剂量组FcγRⅡB蛋白表达升高(P<0.05);与参芪蛭龙汤低剂量组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅡB蛋白表达升高,FcγRⅢA蛋白表达降低(P<0.05)。与空白组比较,模型组FcγRⅠ、FcγRⅢA mRNA表达升高,FcγRⅡB mRNA表达降低(P<0.05);与模型组比较,参芪蛭龙汤高、低剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢAmRNA表达降低,FcγRⅡB mRNA表达升高(P<0.05);与参芪蛭龙汤低剂量组比较,参芪蛭龙汤高剂量组FcγRⅠ、FcγRⅢA mRNA表达降低,FcγRⅡB mRNA表达升高(P<0.05)。结论 参芪蛭龙汤对MN小鼠的治疗作用与改善肾组织病理改变,减少FcγRⅠ、FcγRⅢA蛋白的表达,增加FcγRⅡB蛋白表达有关,其中高浓度的参芪蛭龙汤效果更好。

PRRSV感染PAM中猪FcγRⅢ介导的免疫抑制反应

目的：为研究猪FcγRⅢ介导猪繁殖与呼吸综合征病毒（ Porcine reproductive and respiratory syndrome virus ， PRRSV）的免疫抑制反应。方法：本研究将含有200个TCID50的PRRSV、脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）（100 ng/ml）和纯化鼠抗猪FcγRⅢIgG（550μg/ml）分别处理猪肺泡巨噬细胞（ Pulmonary alveolar macrophages cell ，PAM），同时用纯化鼠抗猪FcγRⅢIgG处理PAM细胞后接种PRRSV，并设PAM细胞对照组。各组分别培养12、24、36、48、60、72 h后收集细胞及上清，用已经建立的绝对荧光定量PCR方法检测接毒组不同时间段的PRRSV复制水平，并用相对荧光定量PCR方法检测各组PAM细胞中IFN-α、TNF-α的mRNA转录水平。结果：PRRSV在感染PAM细胞后12～24 h期间可促进IFN-αmRNA转录水平，36～72 h期间抑制IFN-αmRNA转录水平，之后IFN-α的mRNA转录水平恢复正常；TNF-αmRNA转录水平在感染后12～72 h均略微上调。 LPS处理PAM细胞后，IFN-α、TNF-αmRNA转录水平均上调。用纯化鼠抗猪FcγRⅢIgG处理猪PAM细胞后，选择性激活猪PAM细胞表面FcγRⅢ，IFN-α、TNF-αmRNA转录水平显著下调，用PRRSV感染选择性激活猪PAM细胞表面FcγRⅢ后显著抑制抗病毒因子IFN-α、TNF-αmRNA转录水平。结论：FcγRⅢ的选择性激活抑制了宿主细胞的抗病毒因子水平及在PRRSV感染过程中的天然抗病毒免疫反应。

FcγRⅢB基因多态性分布与Ⅱ型肝素诱导血小板减少症易感性关系的研究

目的:研究FcγRⅢB基因多态性与Ⅱ型肝素诱导血小板减少症(HIT)易感性的相关关系。方法:分析30例HIT患者和60例对照者(使用肝素的非HIT患者)FcγRⅢB的基因型,比较各组间基因型分布及等位基因频率的差异。结果:FcγRⅢB-NA2/NA2在HIT组中的表达明显高于对照组,NA2等位基因频率在HIT组中的表达明显高于对照组。结论:FcγRⅢB-NA2/NA2可能是Ⅱ型HIT发病的一个易感因素。

健康及血液肿瘤儿童中FcγRⅢa基因多态性分布

由于FcγRⅢa的基因多态性可导致NK细胞上Fcγ受体(Fcγ receptor,FcγR)与抗肿瘤单克隆抗体(mono-clonal antibody,MAb)Fc段结合的亲和力不同,从而影响NK细胞以抗体依赖细胞介导的细胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)对肿瘤细胞的杀伤能力。本研究通过巢式PCR(nest-PCR)扩增43例健康儿童及20例血液肿瘤患儿的FcγRⅢa基因,NlaⅢ酶切PCR扩增产物,酶切后产物经15%PAGE电泳分离DNA片段,银染显色鉴定FcγRⅢa基因多态性;检测健康儿童及血液肿瘤患儿中FcγRⅢa的基因多态性的分布,了解血液肿瘤患儿对MAb可能的疗效反应。结果表明:两组均以FcγRⅢa-158V/F型最多,而FcγRⅢa-158V/V型次之,FcγRⅢa-158F/F型最少,FcγRⅢa的不同基因型及等位基因频率在健康儿童及血液肿瘤患儿中的分布比例基本一致,无明显差异,两组基因型及等位基因频率卡方检验的P值分别为0.809及0.875,均大于0.05。结论:FcγRⅢa-158基因多态性以FcγRⅢa-158V/F型为主,而FcγRⅢa-158V/V型次之;在健康儿童及血液肿瘤患儿中分布无明显差异。

FcγRⅢB基因多态性与汉族人群慢性牙周炎关系的研究

目的探讨FcγRⅢB基因多态性与慢性牙周炎敏感性的关系。方法收集63例重度慢性牙周炎患者、103例轻中度慢性牙周炎患者及80名健康对照者的颊黏膜拭子,提取DNA,采用等位基因特异性引物PCR(PASA)法测定FcγRⅢB基因多态性,比较各组间基因型分布的差异。结果FcγRⅢB基因型分布及等位基因频率在3组间差异无显著性。结论研究未显示FcγRⅢB基因型与慢性牙周炎相关。

FcγRⅢ在乙型肝炎病毒胎盘感染中作用的研究

目的研究FCγRⅢ在乙型肝炎病毒胎盘感染中的作用。方法收集早孕、中孕,足月胎盘各15例,进行免疫荧光检测FcγRⅢ的表达情况;并随机选取经免疫组化PV-9000法检测为HBsAg(+)的足月胎盘15例,进行免疫荧光双标检测HBsAg/FcγRⅢ的分布。结果早孕绒毛组织未见FcγRⅢ表达,中孕胎盘有11例表达,其中最早的为孕17w,足月胎盘均有明显表达;HBsAg/FcγRⅢ在胎盘屏障各层细胞上可分布于同一部位。结论孕17w后胎盘组织开始表达FCγRⅢ,使胎盘具有转运IgG的功能:HBV可能是以免疫复合物的形式经由滋养细胞表面FCγRⅢ的介导而感染胎盘的。

小鼠FcγRⅢ原核表达、纯化及鉴定

目的:制备纯化重组蛋白mFcγRⅢ,并鉴定其生物学活性。方法:从克隆载体mRⅢ-T中扩增mFcγRⅢ胞外区,构建原核表达载体pETmRⅢ,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE和Westernblot对重组表达蛋白进行鉴定;表达产物通过包涵体纯化后用稀释方法复性;ELISA检测复性蛋白活性。结果:成功构建了重组表达质粒pETmRⅢ,纯化和复性了重组蛋白mFcγRⅢ;复性的重组蛋白mFcγRⅢ具有较强的体外活性。结论:原核重组蛋白mFcγRⅢ复性后具有较强的体外结合配体特性,为探索重组蛋白治疗自身免疫病奠定了基础。

猪FcγRⅢ和γ链共转染Marc-145细胞系的建立

为了建立稳定表达猪FcγRⅢ(Porcine Fc gamma receptorⅢ,poFcγRⅢ)的Marc-145细胞系,从PAM细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅢ和γ链的cDNA,并构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅢ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300 mg/L)和G418(400 mg/L)共筛选获得稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系;运用RT-PCR、玫瑰花环试验和流式细胞术对细胞系进行了鉴定。结果表明,成功构建了猪FcγRⅢ和γ链真核表达载体,建立了稳定表达猪FcγRⅢ的细胞系,表达于转染细胞表面的猪FcγRⅢ受体分子能与猪IgG特异结合。

FcγRⅡA-R131-FcγRⅢB-NA2复合基因型与汉族人群慢性牙周炎关系的研究

目的探讨FcγRⅡA-R131-FcγRⅢB-NA2复合基因型与慢性牙周炎敏感性的关系。方法收集63例重度慢性牙周炎(CP)患者、103例轻中度慢性牙周炎患者及80名健康对照者的颊粘膜拭子,提取DNA,采用序列特异性引物PCR(PCR-SSP)法及等位基因特异性引物PCR(PASA)法测定FcγRⅡA和FcγRⅢB的基因多态性,比较FcγRⅡA-R131-FcγRⅢB-NA2复合基因型在各组间分布的差异。结果FcγRⅡA-R131-FcγRⅢB-NA2复合基因型在重度CP组与健康对照组之间的分布有显著性差异(P<0.0125),而在轻中度CP组与对照组、重度CP组与轻中度CP组之间分布无显著性差异(P>0.0125)。结论FcγRⅡA-R131-FcγRⅢB-NA2复合基因型与慢性牙周炎的严重程度相关,提示其可能与汉族人群慢性牙周炎的敏感性相关。

中国人(汉族)MG患者FcγRⅢB基因多态性分析

目的探讨FcγRⅢB基因多态性在中国(汉族)重症肌无力(myastheniagravis,MG)患者中的分布特征与其免疫治疗疗效的关系。方法选取70例MG患者和40例中青年卒中患者的全血,提取DNA后运用基因序列特异性PCR扩增技术(PCRSSP)测定FcγRⅢB基因多态性的表达,比较基因型和等位基因在不同临床特点亚组以及不同疗效亚组的分布。结果MG患者基因型及等位基因分布频率与对照组间差异无显著性(P>005)。I型MG患者NA1纯合子的分布频率较高(P=00617)。MG患者激素治疗有效组基因型和激素治疗无效组比较差异有显著性(P<001),MG患者激素治疗有效组基因型和对照组间差异也有显著性(P<001),MG患者激素治疗有效组的NA1纯合子分布频率高于对照组。结论MG患者NA1纯合子与激素疗效较好相关,且该基因型在轻型MG患者中表达高可能是其疗效较好的原因,亦可能是MG的一个保护性因子。

猪FcγRⅢ双抗体夹心ELISA方法的建立及其在PRRSV感染猪中的初步应用

利用自行制备的FcγRⅢ多克隆抗体作为捕获抗体,鼠源抗FcγRⅢ特异性单克隆抗体作为示踪抗体,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠Ig G作为检测系统,建立了检测可溶性FcγRⅢ(s FcγRⅢ)水平的双抗体夹心ELISA方法。利用建立的该ELISA方法对感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)血清进行检测,结果显示,猪感染PRRSV后,血清中s FcγRⅢ的水平明显增高,因此s FcγRⅢ的水平可能作为PRRSV感染的预警标志。该研究结果为进一步阐释FcγRⅢ在PRRSV感染中发挥的作用奠定了基础。

FcγRⅡa和FcγRⅢa基因多态性与西妥昔单抗治疗转移性结直肠癌疗效相关性的Meta分析

目的系统评价FcγRⅡa和FcγRⅢa基因多态性与西妥昔单抗为基础的药物在治疗转移性结直肠癌疗效的相关性。方法通过检索数据库,纳入2016年2月前所有符合纳入标准的有关FcγRⅡa和(或)FcγRⅢa基因多态性与西妥昔单抗在转移性结直肠癌中疗效的研究,采用Stata 11.0软件进行Meta分析,用比值比及95%可信区间评价效应强度。结果共12篇文章符合纳入标准,累计1 016个病例。Meta分析的合并结果显示,FcγRⅡa和FcγRⅢa基因多态性与西妥昔单抗为基础的药物治疗在转移性结直肠癌患者的疗效无相关性。亚组分析结果显示,FcγRⅡa-H131R位点的突变型可增加西妥昔单抗在KRAS突变的转移性结直肠癌患者的疗效(RR vs.HH:比值比2.395,95%可信区间1.522~3.771,I^2=0.000;R vs.H:比值比2.072,95%可信区间1.617~2.654,I^2=0.457;HR+RR vs.HH:比值比3.067,95%可信区间1.582~5.944,I^2=0.692;HR vs.HH:比值比11.222,95%可信区间1.324~95.106,I^2=0.769);FcγRⅢa-V158F的突变型可增加亚洲人群对西妥昔单抗的疗效(FF vs.VF+VV:比值比1.534,95%可信区间1.138~2.069,I^2=0.000;FF/VF:比值比1.398,95%可信区间1.040~1.879,I^2=0.000)。结论 FcγRⅡa和FcγRⅢa基因多态性与西妥昔单抗为基础的药物治疗在转移性结直肠癌中的疗效相关性可能存在种族差异和基因与基因的交互作用,需更多大样本高质量研究加以揭示。

湖南汉族系统性红斑狼疮患者FcγRⅢa—158V/F多态性研究

目的探讨中国湖南汉族SLE患者与FcγRⅢa—158V/F多态性的相关性。方法SLE患者65例,其中狼疮肾炎患者38例,采用多聚酶链反应(PCR)和限制性片段长度多态性分析法(RFLP)检测FcγRⅢa—158V/F基因型,并与60例正常人进行比较。结果①与对照组相比,SLE患者FcγRⅢa—158F/F纯合子基因型显著增高(OR=2.23,χ2=4.69,P=0.03)。②与对照组相比,狼疮肾炎患者Fc-γRⅢa—158F/F纯合子基因型和FcγRⅢa—158F等位基因频率均显著增高(OR=2.67,χ2=5.36,P=0.02;OR=2.00,χ2=4.91,P=0.03)。结论SLE患者FcγRⅢa—158F/F纯合子基因型显著增高,狼疮肾炎患者FcγRⅢa—158F/F纯合子基因型和FcγRⅢa—158F等位基因频率均显著增高,提示FcγRⅢa多态性与SLE相关,FcγRⅢa—158F等位基因可能是狼疮肾炎的危险因素。

FcγRⅢB基因、G2m(23)因子与侵袭性牙周炎的研究

目的 探讨中性多形核白细胞 (polymorphonuclearneutrophils ,PMNs)表面FcγRⅢb受体遗传多态性及人类免疫球蛋白G重链遗传标记因子 G2m(2 3)因子与侵袭性牙周炎的关系。方法 侵袭性牙周炎患者 2 1例 ,健康对照 2 6名 ,提取静脉血基因组DNA及血清 ,分别用PCR和免疫斑点的方法测定FcγRⅢb基因型和G2m(2 3)因子。结果 侵袭性牙周炎患者FcγRⅢBNA1 /NA1基因型检出率高于健康对照 (P <0 0 5) ;侵袭性牙周炎患者中FcγRⅢb基因型为NA1 /NA1 ,并且G2m(2 3)阳性的个体比率比健康对照组高 (P <0 0 5) ;G2m(2 3)因子在侵袭性牙周炎患者与健康对照组中的分布差异无显著性。结论 FcγRⅢBNA1 /NA1基因可能是中国人侵袭性牙周炎的易感基因 ;FcγRⅢb基因型为NA1 /NA1 ,G2m(2 3)

FcγRⅢA-158V／F基因多态性与成人原发免疫性血小板减少症的相关性研究

原发免疫性血小板减少症（ITP）是一种以血小板减少及出血倾向为主要临床表现的出血性疾病。

特发性血小板减少性紫癜患者FcγRⅢA-158V/F基因多态性研究

特发性血小板减少性紫癜（ITP）是一种自身免疫性疾病，主要由于患者体内的自身抗体（主要是IgG型）的Fab段与血小板特异抗原结合，抗体Fc段与Fcγ／受体（FcγR）结合后，导致血小板被单核-巨噬系统大量吞噬，血小板数目减少，引起出血症状。因此，FcγR的功能是该疾病过程的中心。本研究欲分析FcγRⅢA-158V／F基因多态性与ITP的关系，以期从分子水平探索ITP发病的机制。

猪FcγRⅢ的原核表达及多克隆抗体的制备

目的:构建猪FcγRIII基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备鼠抗猪FcγRIII抗血清。方法:从质粒pTG19-T-FcγRIII中用PCR方法克隆到编码完整猪FcγRIII蛋白分子的基因片段,将其插入到原核表达载体pET-32a中,构建了猪FcγRIII原核表达载体pET-FcγRIII,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,经尿素洗涤纯化后,以纯化后的融合蛋白FcγRIII-His为抗原免疫小鼠,获得抗血清。Western blotting、ELISA法鉴定获得的抗血清,ELISA结果显示抗体效价为1∶16000,具有高度特异性,免疫印迹结果显示制备的多抗可以与重组猪FcγRIII蛋白特异性结合。结果:成功构建猪FcγRIII原核表达载体,纯化到融合蛋白FcγRIII-His,用纯化的融合蛋白免疫小鼠制备了多克隆抗体,Western blotting、ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论:成功获得了猪FcγRIII多克隆抗体,为进一步研究猪FcγRIII蛋白的功能奠定了基础。

FcγRⅢA多态性与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤的疗效观察

目的探索中国弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）病人FcFcγRⅢA-158V／F多态性与利妥昔单抗疗效的关系。方法入组病人均为经病理诊断，CD20（＋）的初治弥漫大B细胞淋巴瘤，所有病人均接受利妥昔单抗联合CHOP（环磷酰胺＋阿霉素＋长春地辛＋泼尼松）方案化疗，用PCR方法检测其FcγRⅢA表型。前瞻性观察6个疗程后初治疗效，分析不同FcγRⅢA表型的缓解率。结果共入组34例DLBCL病人，其FcγRⅢA表型VV型11例，FF型5例，VF型18例。接受平均6个疗程（4～8疗程）利妥昔单抗联合化疗后，近期缓解率为79％。其中VV型有效9例（82％），FF型3例（60％）有效；VF型15例（83％）有效，差异有统计学意义（P=0．04）。结论DLBCL病人FcγRⅢA表型以VF型最多见，其次为VV型和FF型。表达VV、VF型病人对利妥昔单抗联合化疗的近期疗效明显优于FF型。