慢性粒细胞白血病患者FcεRⅠγ链基因表达上调

目的:在慢性粒细胞白血病病人(CML),CD3ζ链表达明显下降,分析与CD3ζ存在互补关系的FcεRⅠγ基因在CML患者中表达水平,以了解T细胞免疫中TCR信号转导的变化情况。方法:利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR法测定CML患者和健康人各20例的外周血单个核细胞(PBMCs)的FcεRⅠγ基因表达水平,以β2微球蛋白基因(β2MG)作为内参照,采用相对定量公式:2-ΔCt×100%,计算FcεRⅠγ链的相对mRNA表达量。结果:CML患者PBMCs中FcεRⅠγ基因表达水平明显高于健康对照组(P<0.001)。FcεRⅠγ表达水平变化与病人外周血CD3+T细胞比例无相关性。结论:CML病人中FcεRⅠγ表达上升,提示FcεRⅠγ可能在一定程度调节CD3ζ链缺陷所带来的T细胞免疫异常。

抑制IgE与肥大细胞FcεRⅠ受体结合防治变应性疾病的研究进展

变应性疾病是全世界影响最广泛的慢性疾病之一,肥大细胞是Ⅰ型变态反应最主要的终末效应细胞,IgE与其肥大细胞表面高亲和力受体FcεRⅠ的结合是启动肥大细胞级联反应释放炎性介质的关键步骤。阻断或抑制肥大细胞膜上IgEFcεRⅠ的交联,从而影响肥大细胞活化已成为变应性疾病防治的有效策略和研究热点。文章从阻断IgE抗体、IgE-FcεRⅠ结合以及FcεRⅠ受体三个方面就靶向肥大细胞上IgE和FcεRⅠ防治变应性疾病的策略及相关机制进行综述。

过敏煎通过IgE/FcεRⅠ途径抑制肥大细胞脱颗粒改善特应性皮炎的作用机制

目的通过体内外实验,研究过敏煎改善特应性皮炎的作用机制。方法采用2,4-二硝基氯苯(2,4-dimethyl sulfoxide,DNCB)反复刺激皮肤建立特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)模型,给予氯雷他定片及过敏煎低、中、高剂量(1.32、2.64、5.28 g/kg)进行干预,ELISA法检测血清总IgE、IL-4、IL-13水平,IHC法测定皮损组织中IL-4、IL-13的表达水平。体外运用anti-DNP-IgE/DNP-HSA诱导RBL-2H3细胞复制脱颗粒模型,MTS法检测过敏煎对RBL-2H3活力,通过ELISA法检测细胞上清中β-hex酶释放率,Histamine、LTB4、IL-4、IL-13水平,RT-PCR法检测细胞Histamine、IL-4、IL-13mRNA表达,Western blotting法检测p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38/p-38蛋白表达。结果与模型组比较,过敏煎各剂量组显著减轻AD小鼠血清总IgE、IL-4、IL-13水平(P<0.05,P<0.01),减轻AD小鼠皮损组织中IL-4、IL-13表达。明显下调RBL-2H3细胞脱颗粒后β-Hex酶释放率(P<0.05,P<0.01)和Histamine、LTB4、IL-4、IL-13水平(P<0.05,P<0.01),显著减少细胞Histamine、IL-4、IL-13mRNA表达(P<0.01)和p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38/p38蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论过敏煎通过调控Th2型反应和血清中总IgE水平改善特应性皮炎,其作用机制可能是通过IgE/FcεRⅠ途径抑制肥大细胞脱颗粒。

人郎罕细胞上的FcεRⅠ

人郎罕细胞能表达ＩｇＥ的高亲和性受体一ＦｃεＲＩ，这一新发现使人们对此受体的功能有了新的认识，同时也为进一步研究郎罕细胞和其他抗原提呈细胞在特应性疾病的发生中所起的病理生理作用提供了新的方向。

FcεRⅠ受体α亚基的重组表达、单克隆抗体的制备及特异性鉴定

目的通过基因重组的方法表达IgE高亲和力受体FcεRⅠα亚基,并用重组蛋白制备单克隆抗体。方法用RT-PCR的方法从过敏性疾病病人外周血嗜碱性粒细胞调取FcεRⅠα蛋白基因,经T-A克隆、亚克隆至pET28a(+)原核表达载体,将重组质粒转化到大肠杆菌BL-21-STAR(DE3),IPTG诱导表达FcεRⅠα亚基蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白;并用其免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗FcεRⅠα亚基单克隆抗体,用细胞免疫荧光法对单克隆抗体的特异性进行鉴定。结果成功调取了人IgE高亲和力受体FcεRⅠα亚基的基因,且测序正确;构建原核表达质粒FcεRⅠα-pET28a(+);成功建立4株稳定分泌抗FcεRⅠα亚基的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为G101、C22、G113、G42。通过细胞免疫荧光实验证实,4株单克隆抗体均能特异性结合人嗜碱性粒细胞表面的FcεRⅠα亚基。结论成功利用基因重组技术制备了FcεRⅠα亚基蛋白,制备了4株效价高、特异性好的抗FcεRⅠα亚基单克隆抗体,为FcεRⅠα亚基及其抗体在过敏性疾病中的生物学功能研究奠定了基础。

CpG ODN对哮喘小鼠肺组织FcεRⅠ、FcγRⅡb表达的影响

目的观察CpG ODN对哮喘小鼠肺组织FcεRⅠ、FcγRⅡb表达的影响,探讨其诱导免疫耐受的相关机制。方法将48只清洁级雄性Balb/c小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松(DXM)治疗组(C组)、CpG ODN治疗组(D组),每组12只。以卵白蛋白(OVA)作用建立小鼠哮喘模型。收集支气管肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)计数细胞总数并分类,取肺组织作病理,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织中FcεRⅠ、FcγRⅡb mRNA的表达。结果 (1)电镜观察肺组织超微结构:B组显示支气管及血管周围有较多炎性细胞浸润,肺泡隔内嗜酸粒细胞浸润,C组和D组与B组相比明显减轻。(2)BALF中炎症细胞表达变化:与B组相比,C组、D组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)绝对值以及EOS占细胞总数的百分比(EOS%)均显著减少(P<0.01)。(3)RT-PCR结果:C组、D组FcεRⅠmRNA表达均显著低于B组(P<0.01),C组、D组FcγRⅡb mRNA表达均显著高于B组(P<0.01)。(4)相关分析:小鼠肺组织FcεRⅠ和FcγRⅡb表达呈显著负相关(P<0.01,n=40)。结论 CpG ODN能降低哮喘小鼠肺组织FcεRⅠ的表达,增加FcγRⅡb的表达,具有改善气道炎症和诱导免疫耐受的作用。

人FcεRIα亚基细胞外区的原核表达及其和IgE结合的机制

应用两种不同的表达系统对FceR I α亚基的细胞外区进行克隆和表达,表达产物经纯化后用免疫斑点杂交法检测其与IgE结合的能力,探索IgE与其高亲和力受体FceR I α亚基的细胞外区结合的机制。结果两种体系均成功表达出FceRI α亚基的细胞外区,pBAD/gⅢA表达的FceR I α亚基的细胞外区能与IgE结合,而PQE30表达的FeaR I α亚基的细胞外区不能与IgE结合。提示FccR I α亚基的细胞外区已足够和IgE结合,无需β、γ亚基的存在,其所具有的一定的空间构型和二硫键的形成在与IgE结合时是必需的,而糖基化位点在与IgE的结合时是非必需的。

慢性自发性荨麻疹患者血清免疫指标检测分析

目的探讨自身抗体、免疫球蛋白、补体等在慢性自发性荨麻疹(chronic spontaneous urticaria,CSU)致病机制中的作用。方法收集临床CSU病例90例,同时设立正常对照组62例进行比较。抽取患者及对照组静脉血5ml,留取血清检测:抗IgE抗体、抗FcεRⅠ抗体、总IgE、IgA、IgM、IgG、C3、C4、抗甲状腺过氧化物酶抗体(antithyroid peroxidase autoantibody,anti-TPOAb)、抗甲状腺球蛋白抗体(anti-thyroglobulin antibodies,TGAb),分析检测结果。结果 90例CSU中,23例抗IgE抗体为阳性,占25.56%(23/90),9例抗FcεRⅠ抗体为阳性,占10.00%(9/90)。CSU组抗IgE抗体为(45.67±36.31)μg/ml、抗FcεRⅠ为(577.93±360.78)μg/ml,浓度明显高于正常对照组[分别为(27.16±12.59)μg/ml、(388.97±200.19)μg/ml],差异均有统计学意义;CSU组总IgE为(109.57±74.09)IU/ml、C4为(0.31±0.11)g/L,浓度高于正常对照组[分别为(70.29±27.91)IU/ml、(0.27±0.07)g/L],差异均有统计学意义;TPOAb、TGAb、IgA、IgM、IgG、C3与正常对照组比较,差异均无统计学意义。结论 CSU患者抗IgE抗体、抗FcεRⅠ抗体异常增高,并存在IgE介导的变态反应和补体激活机制。

慢性荨麻疹患者外周血中CD8^+CD28^-T细胞检测结果分析

目的:探讨CD8^+CD28^-T细胞在慢性荨麻疹患者致病机制中的作用。方法:收集临床慢性荨麻疹(CU)病例83例,同时设立对照组64例进行比较。应用ELISA法检测研究对象血清中抗Ig E抗体、抗FcεRⅠ抗体浓度,流式细胞仪检测外周血中CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD8^+CD28^-、CD4^+CD25^+T细胞比例,分析检测结果。结果:83名CU中,23例抗Ig E抗体为阳性,占27.7%(27/83);31例抗FcεRⅠ抗体为阳性,占37.3%(31/83)。CU患者外周血CD8^+T细胞比例、CD8^+CD28^-T细胞比例低于正常对照组(P<0.05),CD4^+/CD8^+比值、CD4^+CD25^+T细胞比例均高于对照组(P<0.05)。结论:CU患者机体外周血CD8^+CD28^-T细胞、CD4^+CD25^+T细胞比例与对照组相比存在差异,CD8^+CD28^-T细胞比例降低也可能是CU致病机制之一。

IgE在湿疹发病中的作用机制

免疫球蛋白E(IgE)在湿疹等许多自身过敏性疾病的发病机制中扮演重要角色。研究发现,IgE主要通过其在肥大细胞、嗜碱性细胞等细胞上的高亲和力受体FcεRⅠ及低亲和力受体FcεRⅡ(CD23)发挥作用,此外还能通过半乳糖凝集素-3信号通路活化肥大细胞和嗜碱性细胞,最终导致自身免疫性疾病的发生。本文对近期相关文献进行综述,对IgE在湿疹等自身免疫相关性疾病中发挥的作用和可能发病机制进行分析,以期为日后药物研发和临床工作提供指导。