FcεR1α基因多态性与过敏性鼻炎的关系分析

目的分析免疫球蛋白(Ig)E高亲和力受体α段(FcεR1α)基因rs2427827位点的单核苷酸多态性(SNP)分布情况,并探讨其与过敏性鼻炎(AR)的关系。方法采取病例对照研究方法,选择2019年1月至2020年7月于该院耳鼻咽喉头颈外科就诊并确诊为AR的151例患者为AR组,选取同期健康体检志愿者108例为对照组。采集所有受试者外周抗凝血3 mL并提取血液DNA,采用Mass ARRAY iPLEX GOLD分型技术检测两组FcεR1α基因rs2427827位点多态性;采用Logistic回归分析影响AR易感性的相关因素。结果AR组FcεR1α基因rs2427827位点CC基因型频率为66.2%,尽管高于对照组的65.7%,但是差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析结果显示,突变杂合基因型TC(P=0.226,OR=2.15,95%CI:0.63~7.85)与突变纯合基因型CC(P=0.262,OR=1.97,95%CI:0.61~6.90)均与AR的发病无关。突变等位基因型C与野生等位基因型T进行比较,发现没有增加AR的患病风险,差异无统计学意义(P=0.603,OR=1.12,95%CI:0.72~1.75)。结论FcεR1α基因多态性与AR无明显相关性,但由于样本条件的限制,有必要扩大样本量和样本选择范围,以便进一步研究。

敲除FcεR1加重小鼠非酒精性脂肪肝病

目的探讨Ig E高亲和力受体FcεR1在高脂饮食(HFD)诱导的小鼠非酒精性脂肪肝病(NAFLD)中的作用。方法选取野生型(WT)雄鼠和Ig E高亲和力受体FcεR1敲除(FcεR1-/-)雄鼠各10只,均给予HFD诱导NAFLD模型,每周固定时间称取小鼠体质量。12周后处死小鼠,称取小鼠体质量,收取血及肝组织并检测肝功能相关指标。结果 FcεR1-/-小鼠与WT小鼠相比,体质量增加的同时(P<0.05),肝脏体重比增高(P<0.05),血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(CHOL)及肝组织TG均升高(P<0.01),肝组织Ⅲ型胶原(collagenⅢ)mRNA表达升高(P<0.01),NAFLD症状严重。结论 Ig E高亲和力受体FcεR1可能具有保护NAFLD诱导肝损伤的作用,其机制可能是通过降低体质量和改善脂质代谢实现的。

变应性鼻炎IgE高亲和力可溶型Fc段受体1α(sFcε1α)蛋白的制备及血清中相应抗体的检测

目的构建人可溶型Fc段受体1α(s FcεR1α)的原核表达载体,诱导表达并纯化重组FcεR1α胞外区段蛋白,检测其与血清中Ig E的结合力及相应抗体的含量。方法应用巢式PCR技术获得人FcεR1α胞外区段基因,构建原核表达载体p ETs Fcε1α,最佳诱导条件表达出s FcεR1α,采用亚胺二乙酸His标签纯化树脂纯化并进行Western blot法鉴定。ELISA检测人s FcεR1α与血清中Ig E的结合力及血清中s FcεR1α总量、s FcεR1α-Ig E及抗FcεR1α自身抗体的含量。结果扩增出人FcεR1α胞外区段基因,大小为600 bp左右。p ET-s FcεR1α经PCR、双酶切、测序鉴定正确。诱导表达、纯化出人s FcεR1α,相对分子质量(Mr)大小约为42 000。Western blot法鉴定为人s FcεR1α。人s FcεR1α可以与人血清中Ig E结合。变应性鼻炎(AR)患者血清中s FcεR1α总量、s FcεR1α-Ig E含量均低于正常人,抗FcεR1α抗体含量高于正常人。结论获得人s FcεR1α,s FcεR1α与人血清中Ig E有较强的结合力,AR患者血清中s FcεR1α总量、s FcεR1α-Ig E含量均低于正常人,抗FcεR1α抗体含量高于正常人。

树鼩IgE高亲和力受体α亚基的原核表达、抗体制备及鉴定

目的:原核表达树鼩IgE高亲和力受体α亚基(FcεR1α)并制备抗体,为研究树鼩过敏反应动物模型奠定基础。方法:提取树鼩肝脏及脾脏组织RNA,用巢式PCR法扩增树鼩FcεR1α基因,连接至pMD-19T载体后进行DNA测序,将测序正确的目的片段与表达载体pET30a(+)连接,构建重组表达质粒,转入表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化;将纯化的蛋白作为免疫原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;Western印迹检测多克隆抗体的特异性,ELISA检测多克隆抗体的效价。结果:调取了树鼩FCεRIα基因,并将该序列去信号肽的胞外结构(第26～213氨基酸)构建到pET30a(+)载体上,通过IPTG诱导表达并纯化了FCεRIα蛋白,蛋白纯度在90%以上。ELISA效价检测结果表明免疫动物制备的多克隆抗体效价为100 000,且该抗体能够检测到真核细胞表达的树鼩IgE FCεRIα蛋白。结论:在大肠杆菌中表达并纯化获得树鼩FcεRIα,免疫动物制备了多克隆抗体。