貉IgG克隆及Fc活性多肽功能分析

为获得貉IgG抗体序列,分析其活性多肽功能,从而为貉源疾病治疗研究奠定免疫学基础。本研究通过RTPCR成功克隆貉IgG保守区基因,借助3′RACE以及overlap-PCR技术成功获得其IgG全长。运用在线软件分析其Fc区功能位点,人工合成IgG-Fc区多肽NTVSITCLVK(N10K),PSVYVLPPSQ(P10Q)及阴性对照多肽MSTAVSKCAT(NC)。多肽在不同浓度下与小鼠外周血淋巴细胞共培养18h检测上清液中细胞因子含量(TNF-α,IL-1β,IL-6),发现在质量浓度为10mg/L时,多肽N10K可以刺激淋巴细胞分泌更多的TNF-α(271.95ng/L),IL-1β(27.42ng/L),而多肽P10Q可以促进淋巴细胞产生较多的IL-6(35.51ng/L)。本研究成功克隆貉IgG重链核酸序列,初步确定貉IgG-Fc区多肽P10Q及N10K对外周血淋巴细胞的体外免疫诱导活性,同时为今后貉源疾病预防及治疗奠定基础,为研究DNA疫苗、Fc生物佐剂、多肽疫苗及单克隆抗体制备提供了试验依据。