重庆地区FcγRⅡB基因多态性与Graves病的相关性研究

目的了解重庆地区汉族人群FcγRⅡB基因多态性位点rs17416919(703A>T,204Tyr>Phe)的基因型分布,探讨该基因多态性与Graves病(GD)的相关性以及其基因型与甲状腺自身抗体、发病年龄、家族史和眼征的关系。方法选取重庆地区562例GD患者列入病例组,以260例正常人作为对照。采用聚合酶链反应-限制片段长度多态性分析方法(PCR-RFLP),对FcγRⅡB基因外显子4区单核苷酸多态性(SNP)位点rs17416919(703A>T,204Tyr>Phe)进行基因分型,对受试者进行甲状腺功能和自身抗体的检测。对rs17416919位点不同基因型与GD及其发病年龄、甲状腺自身抗体、家族史、甲状腺肿和突眼体征进行相关性分析。结果FcγRⅡB多态性位点rs17416919的三种基因型TT、AT、AA频率在病例组分别为0.7%、22.1%、77.2%,在对照组分别为0.4%、20.4%、79.2%,经非条件Logistic回归校正年龄和性别因素后计算,在共显性、显性和隐性3种模式下比较,两组差异均无统计学意义(P>0.05)。病例组和对照组等位基因频率分布差异亦无统计学意义(χ2=0.480,P>0.05)。除甲状腺疾病家族史(χ2=5.349,P<0.05)外,余甲状腺自身抗体、发病年龄和眼征在TT+AT和TT基因型之间相比,其差异均无统计学意义(P>0.05)。结论重庆地区汉族人群FcγRⅡB基因多态性位点rs17416919(703A>T,204Tyr>Phe)与GD遗传易感性无相关性。

鸡免疫球蛋白G Fc(IgG Fc)片段的分离纯化及其抗血清的制备 Ⅱ.豚鼠抗鸡IgG Fc片段血清的制备

经硫酸铵盐析、DEAE 32-纤维素和Sephadex G 200柱色谱法分离得到纯化的鸡血清IgG。然后用木瓜蛋白酶水解IgG,再经DEAE 32-纤维素柱色谱纯化制得IgG Fc片段,并以IgG Fc片段免疫豚鼠制备豚鼠抗鸡IgG Fc血清。

重组Exendin-4-胰高血糖素样肽1/IgG4（Fc）融合蛋白的表达和活性研究

目的 构建表达长效胰高血糖素样肽1 （glucagon-1ike peptide 1,GLP-1）受体激动剂重组Exendin-4-GLP-1/IgG4 （Fc）融合蛋白的质粒载体,并研究该融合蛋白的活性.方法 将编码Exendin-4-GLP-1/IgG4（Fc）的重组基因插入表达载体pOptiVECTM-TOPO（R）来构建重组质粒Exendin-4-GLP-1/IgG4（Fc）-pOptiVECTM-TOPO（R）.将构建的重组质粒转染CHO/DG44细胞并收获表达产物后,分别用亲和层析法和免疫印迹法对表达产物进行纯化和检测.通过胰岛素释放实验确认重组融合蛋白对INS-1细胞胰岛素分泌的影响,同时在CD1小鼠中研究该融合蛋白对血糖的调节作用.结果 转染重组质粒的CHO/DG44细胞可成功表达Exendin-4-GLP-1/IgG4 （Fc）.蛋白质印迹法检测显示,纯化的表达产物的相对分子质量（Mr）与预期相符（重组融合蛋白单体和二聚体的Mr分别约为35 000和70 000）.胰岛素释放实验表明,在葡萄糖浓度恒定的情况下INS-1细胞分泌的胰岛素量随重组融合蛋白浓度的升高而增加.CD1小鼠实验显示,重组融合蛋白对链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠的血糖具有调节作用,Exendin-4-GLP-1/IgG4（Fc）处理的糖尿病小鼠的血糖明显低于对照糖尿病小鼠（F=3 194,P＜0.01）.结论 Exendin-4-GLP-1/IgG4（Fc）具有天然GLP-1的活性,可作为GLP-1受体激动剂用于2型糖尿病的治疗.