小麦Fe超氧歧化酶基因的原核表达分析

采用RT-PCR技术分离小麦Fe超氧歧化酶基因(FeSOD)的ORF全长cDNA,然后构建其原核表达载体,并对其表达的诱导时间、IPTG浓度、温度进行优化,以期获得较大量的重组蛋白。结果表明:实验获得了小麦FeSOD基因的ORF全长(600bp),ORF全长与原核表达载体pET-Dute1相连接构建了原核表达载体pET-FeSOD,将pET-FeSOD导入宿主菌Rosetta(DE3)中,经SDS-PAGE电泳结果显示,可以高效表达融合蛋白且表达的蛋白均主要以包涵体的形式存在;重组质粒表达出25.8kD的融合蛋白,除去载体pET-Duet1自身表达的3.0kD蛋白后,与FeSOD编码的约为22.8kD蛋白的大小一致;对诱导表达条件的优化结果显示,融合蛋白pET-FeSOD最佳的诱导表达条件为:0.5mmol/L的IPTG浓度,37℃诱导5h。该研究结果为进一步深入研究该基因的特性与功能奠定了基础。