南疆夏河绵羊FecB基因检测及多态性分析

FecB基因是首个在绵羊群体中发现的多胎主效基因,能够有效提高绵羊的繁殖性能。本研究旨在对南疆夏河绵羊群体进行FecB基因检测,为进一步提高种群产羔数、建立高繁殖力核心群体奠定基础。随机选取30只南疆第三师图木舒克市50团的夏河林场体况良好的夏河绵羊母羊,利用PCR-RFLP方法进行基因型检测并测序。结果表明,南疆夏河绵羊群体中存在FecB基因,检测到B+和++2种基因型,未检测到BB型;基因型频率分别为B+(0.100)、++(0.900);等位基因频率分别为B(0.050)、+(0.950)。观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)、有效等位基因数(Ne)以及多态信息含量(PIC)分别为0.100、0.095、1.105及0.090,处于低度多态(PIC<0.25),且符合Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。测序结果显示FecB基因编码区第746位发生A>G错义突变,出现重叠锋。因此,FecB基因可作为南疆夏河绵羊多胎候选基因,对提高南疆夏河绵羊产羔数、扩大该品种规模具有重要意义。

绵羊FecB基因高通量HRM检测方法的建立及准确性评价

为了建立绵羊FecB基因高通量检测HRM方法并对其准确性进行检验,实验首先采用基因组PCR产物直接测序法,分别筛选出BB、B+和++基因型基因组各2份,参照HRM原理分别设计检验引物H1和H2并进行系统检验分析。分析结果发现,使用H1引物扩增效率及特异性良好,但不能分辨BB基因型,而使用H2引物扩增效率及特异性良好,且能够有效识别3种基因型。扩大检验群体发现,使用H2引物的HRM技术重复性良好。以基因组PCR产物直接测序结果为参考标准,检验HRM方法的准确性发现BB基因型检验敏感度为75%,B+和++基因型敏感性分别为96.2%和100%,总体准确率为96.9%,证实该方法能够满足育种实践对检测技术准确性的要求。绵羊FecB基因HRM检验方法的建立为高繁殖性状肉羊育种提供了新的技术工具。

塔什库尔干羊FecB基因非探针法高分辨率熔解曲线分型方法的研究

建立塔什库尔干羊FecB基因非探针法高分辨率熔解曲线分型方法,为塔什库尔干羊多胎类型选育奠定基础。试验选取塔什库尔干羊产双羔(多羔)母羊67只,双羔(多羔)羔羊136只,采集静脉血后,采用非探针法高分辨率熔解曲线对探究塔什库尔干羊FecB基因进行分型的条件。结果表明,115bp扩增引物聚合性以及温度的一致性较好,适合SNP位点的分型,且引物添加量为0.6μL时扩增效率较较好。镁离子浓度在2.4~3.2mmol/L时,扩增曲线和熔解曲线聚合性较好,反应模板浓度在50ng时,扩增曲线、熔解曲线和熔解温度差异曲线较符合塔什库尔干羊FecB基因分型的要求。通过使用优化路线,进行塔什库尔干羊FecB基因分型发现,母羊和羔羊不携带纯合型(BB),携带杂合型(B+)母羊占31.3%,羔羊占25.7%;携带野生型的母羊占68.7%,羔羊占74.3%。。可见,通过建立FecB基因非探针法高分辨率熔解曲线分型方法,筛选较优反应条件,可提高塔什库尔干羊多胎新品系培育的选种效率和选种准确性。

应用Cas9 RNPs进行绵羊FecB基因型检测的可行性研究

为了研究Cas9 RNPs用于绵羊FecB基因分型的可行性,试验以FecB基因BB、B+、++型的绵羊个体为试验动物提取基因组DNA。基于Cas9 RNPs的体外DNA定点内切酶活性,用FecB基因靶位点的特异性引物扩增产物作为底物,利用大肠杆菌共表达纯化获得Cas9 RNPs,对不同FecB基因型目标样本进行酶切检测。结果表明:SDS-PAGE电泳结果显示,在130~180 kD之间有一条与预期大小相符的特异蛋白条带;3种基因型的靶DNA均被切割为185 bp和368 bp两个片段;绵羊FecB++型成纤维细胞Cas9 RNPs电转染的突变检测结果显示,纯化的两个Cas9 RNPs都具有基因组编辑活性。说明本研究获得的Cas9 RNPs在体外和细胞内都具有良好的酶活性,但未能区分绵羊FecB基因型。

FecB基因对绵羊产羔性状的调控机制研究进展

绵羊是我国重要的经济动物之一。FecB基因是在绵羊上首个被发现的多胎主效基因,携带该基因的绵羊可以有效提高排卵率和产羔率,有利于扩大养殖规模,提高经济效益。本文就FecB基因的发现和结构、对绵羊产羔性状的影响以及对产羔性状的调控机制进行综述,以期为绵羊繁殖性能提升的机理研究和育种等工作提供参考和借鉴。

FecB基因对杜寒杂交母羊产羔性能及后代生产性能的影响研究

[目的]探究FecB基因对杜寒杂交母羊产羔性能及后代生产性能的影响。[方法]以杜泊羊(♂)和小尾寒羊(♀)杂交羊横交固定母羊群体为研究对象,检测不同横交固定代次母羊的FecB基因,测定并比较不同FecB基因型母羊的产羔性能及后代生产性能指标。[结果]在杜寒横交固定一代、二代、三代、四代群体中均检测出BB型、B+型、++型3种基因型,横交固定代数越高,群体中纯合型BB基因型频率越高。杜寒横交固定一代、二代、三代BB型母羊的平均产羔数显著(P<0.05)高于相应横交固定代次的B+型母羊,并且随着群体中BB基因型频率的增加,母羊平均产羔数呈升高趋势。杜寒横交固定一代、二代母羊的平均产羔率低于小尾寒羊母羊,而杜寒横交固定三代母羊的平均产羔率高于小尾寒羊母羊以及杜寒横交固定一代、二代母羊。后代初生生产性能方面,BB型杜寒横交固定三代母羊后代的初生重显著(P<0.05)低于B+型杜寒横交固定三代母羊后代,二者的初生体高、体长、胸围差异不显著(P>0.05);后代断奶生产性能方面,BB型杜寒横交固定三代母羊后代的断奶重、体长、胸围与B+型杜寒横交固定三代母羊后代差异不显著(P>0.05),体高显著(P<0.05)低于B+型杜寒横交固定三代母羊后代。[结论]Fec B基因对杜寒杂交母羊产羔性能影响显著,在多羔母羊选择中具有很大的应用价值。

绵羊FecB基因的研究进展

近年来,关于骨形态发生蛋白受体1B基因(bone morphogenetic protein receptor IB,BMPRIB)编码区A746G位点(即FecB位点)的遗传以及生理效应的研究都有了极大的进展。本文阐述了绵羊的产羔性状,基于CNKI和Web of Science数据库分析了近十年国内外关于FecB基因的研究发表情况,总结了FecB基因在不同绵羊品种中的研究进展及影响产羔数的机理,并对FecB基因的检测方法及目前存在的问题进行探讨。旨在为多羔绵羊的培育提供科学依据。

绵羊微卫星OarJL36和FecB基因的多态及连锁分析

【目的】阐明微卫星座位OarJL36与小尾寒羊高繁殖力主效基因FecB之间的连锁关系,为绵羊高繁殖力的标记辅助选择提供依据。【方法】分析与FecB基因最紧密连锁的微卫星座位OarJL36在高繁殖力绵羊品种(小尾寒羊和湖羊)与低繁殖力绵羊品种(特克塞尔和多赛特)中的遗传多态性,探讨该微卫星与小尾寒羊FecB基因的连锁不平衡关系。【结果】高繁殖力小尾寒羊和湖羊在骨形态发生蛋白受体IB(bone morphogenetic protein receptor IB,BMPR-IB)基因编码序列第746位碱基处发生了与Booroola Merino绵羊相同的FecB突变(A746G),低繁殖力特克塞尔和多赛特绵羊则未发生这种突变;小尾寒羊BB、B+、++型频率分别为0.500、0.386和0.114,湖羊BB、B+、++型频率分别为0.800、0.200和0.000;微卫星座位OarJL36在4个绵羊品种463个个体中共检测到10个等位基因和31种基因型,最小等位基因为160bp,最大等位基因为200bp;182bp等位基因在小尾寒羊(n=308)和湖羊(n=60)中处于优势等位基因,频率分别为0.696和0.925,在特克塞尔(n=47)和多赛特绵羊(n=48)中的频率分别为0.085和0.125,在BB型小尾寒羊(n=154)和BB型湖羊(n=48)中该等位基因频率更高,分别为0.916和0.938,而在++型小尾寒羊(n=35)中的频率为0.129;OarJL36在小尾寒羊、湖羊、特克塞尔、多赛特以及BB、B+、++型小尾寒羊和BB、B+型湖羊中的多态信息含量分别为0.475、0.139、0.661、0.768、0.152、0.588、0.843、0.115和0.212;连锁不平衡分析显示小尾寒羊FecB基因B等位基因与OarJL36微卫星座位182bp等位基因之间存在较强的连锁关系,但仍有一定的重组(D′=0.614),而+等位基因与OarJL36微卫星座位上的160、192、196、200bp等位基因完全连锁(D′=1.000)。【结论】OarJL36微卫星座位182bp等位基因与小尾寒羊FecB基因B等位基因之间存在较强的连锁关系,是与小尾寒羊多羔主效基因紧密连锁的一个遗传标记。

绵羊微卫星BMS2508和FecB基因的多态及连锁分析

文章分析与绵羊高繁殖力主效基因FecB紧密连锁的微卫星座位BMS2508在高繁殖力绵羊品种(小尾寒羊)和低繁殖力绵羊品种(特克塞尔、多赛特和中国美利奴)中的遗传多态性,同时探讨该微卫星座位与小尾寒羊FecB基因的连锁不平衡关系。高繁殖力品种小尾寒羊在骨形态发生蛋白受体IB(Bone morphogenetic protein receptor IB,BMPR-IB)基因编码序列第746位碱基处发生了与Booroola Merino绵羊相同的FecB突变(A746G),而在低繁殖力的特克塞尔、多赛特和中国美利奴绵羊中没有检测到该突变;小尾寒羊BB、B+、++的基因型频率分别为0.485、0.398和0.117。微卫星座位BMS2508在4个绵羊品种的438个个体中共检测到8个等位基因和15种基因型,最小等位基因为94 bp,最大等位基因为116 bp;小尾寒羊(n=307)、特克塞尔(n=45)、多赛特(n=46)、中国美利奴(n=40)和BB型(n=149)、B+型(n=122)、++型(n=36)小尾寒羊群体中优势等位基因分别是100 bp、94 bp、94 bp、112 bp、100 bp、100 bp、112 bp,其频率分别为0.453、0.544、0.802、0.475、0.483、0.439、0.389。连锁不平衡分析显示小尾寒羊FecB基因B等位基因与BMS2508微卫星座位100 bp等位基因之间存在一定的连锁不平衡(D′=0.408),而+等位基因与BMS2508微卫星座位110 bp和114b p等位基因均存在一定的连锁不平衡(D′=0.513)。

洼地绵羊FecB基因多态性与其产羔数关系的研究

为了从分子水平上研究洼地绵羊的多羔机制,本研究采用PCR-RFLP方法分析洼地绵羊中FecB基因多态性及其与产羔数的关系。结果表明,洼地绵羊中存在与Booroola羊相同的FecB基因突变,有B/B、B/+、+/+3种基因型,其基因型频率分别为0.29、0.56和0.15;且4乳头个体FecB基因频率高于2乳头个体;3种基因型的平均产羔数分别为2.81±0.42、2.49±0.53和1.96±0.28只。经统计分析,B/B与B/+基因型洼地绵羊的产羔数显著高于+/+基因型(P<0.05),B/B与B/+基因型之间差异不显著(P>0.05),而+/+基因型个体也存在多羔现象。结果提示,FecB基因可能是洼地绵羊多羔性能主效基因之一,但洼地绵羊可能还存在其它影响多羔性能的基因。

FecB基因对杜×寒杂交肉羊产羔数及羔羊生长发育的影响

利用绵羊多胎基因FecB分子检测技术,检测分析杜×寒杂交肉羊基因型及对产羔数和羔羊生长发育的影响。结果表明:在杜×寒杂交F1、F2和F3代类群中,存在BB、B+和++三种基因型,并以B+基因型为主。杜×寒F1代母羊B+基因型频率极显著高于杜×寒F2、F3代母羊(P<0.01),F2代母羊B+基因型频率显著高于F3代母羊(P<0.05)。杜×寒F1、F2、F3代B+基因型繁殖母羊产羔数比同代++基因型母羊分别增加0.54、0.65和0.66只(P<0.01)。杜×寒F1代繁殖母羊平均产羔数(1.67只)显著高于杜×寒F3代(P<0.05),比F2代平均产羔数增加0.28只(P>0.05)。B+基因型母羔初生体重、体尺和3月龄断奶体重极显著小于++基因型母羔(P<0.01),B+基因型公羔初生及3月龄断奶体重、体尺都小于++基因型公羔(P>0.05),表明FecB基因不仅是影响杜×寒杂交肉羊产羔数的主效基因,而且在一定时期内也影响羔羊的生长发育。

FecB基因在甘肃肉用绵羊新品种横交固定群中的检测与分布

采用PCR-RFLP方法检测了FecB基因在甘肃肉用绵羊新品种横交固定群中的多态性,为提高甘肃肉用绵羊新品种繁殖性能提供理论依据.结果表明:在甘肃肉用绵羊新品种横交固定群中检测到2种基因型(B+和++),未检测到BB型,2种基因型频率分别为0.30和0.70,野生型(++型)在群体中是优势基因型.经χ2适合性检验表明,甘肃肉用绵羊新品种横交固定零世代羊群偏离了Hardy-Weinberg平衡(P<0.01),而一世代羊群没有偏离Hardy-Weinberg平衡(P>0.05).说明FecB基因不是甘肃肉用绵羊新品种横交固定群产羔性状的主效基因.

绵羊FecB基因研究进展

Booroo la m erino羊的多胎性能开辟了影响动物繁殖性状主基因研究的新篇章,可为提高羊的繁殖性能从分子水平提供理论指导。作者综述了绵羊F ecB基因的最新研究进展。

滩羊多胎品系选育中的FecB基因的检测及利用

为了达到滩羊多胎品系的辅助选育的目的,试验利用绵羊多胎主效基因Fec B的PCR-RFLP检测方法检测了宁夏灵武、盐池两地滩羊多胎品系基础群湖羊母本及其滩湖杂一代252只个体,检测结果为湖羊母羊公羊169只均为BB型,滩公羊4只均为++型,滩湖杂一代80只为B+基因型,其中BB型66.7%;B+型31.75%;++型1.98%,并确定了每个个体的基因型,通过基因型的判断在选配中选留BB基因型和B+基因型,进一步纯化基因达到滩羊多胎品系选育的目的,可加速育种项目滩羊多胎品系的选育步伐。

绵羊FecB基因分离克隆的研究进展

Fec B基因是一个影响绵羊排卵率的基因。本文就该基因的提出、基因型判定、生理效应以及分离克隆等方面作一综述。

脂质体介导FecB基因转染太行山羊精子的研究

以太行山羊为研究对象,探索精子作为外源基因载体建立转FecB目的基因山羊的可行性,以及脂质体对转染效率的影响。采用共培养与阳离子脂质体介导2种方法转染精子,用原位杂交等技术检测FecB目的基因片段在精子中的存在及存在部位,并对2种方法进行分析。结果表明:太行山羊的精子具有主动捕获外源基因的能力,共培养法精子阳性率为18.3%,脂质体介导精子阳性率为38.7%,脂质体的存在显著提高了精子的转染效率。太行山羊的精子能够被脂质体包被的FecB目的基因片段转染,为精子载体法制备FecB转基因太行山羊提供依据。

绵羊FecB基因的原核表达及其抗体制备

为了进一步研究FecB基因,利用PCR-RFLP技术筛选出FecB基因,PCR扩增FecB基因编码区序列1509bp,利用限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ定向插入原核表达载体pET30a(+),构建原核表达载体pET30a(+)-FecB,诱导表达纯化重组蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,WesternBlot检测重组蛋白的免疫活性,ELISA检测抗体效价。结果表明,成功的构建了绵羊FecB基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达目的蛋白,经过4次免疫后,获得多克隆抗体,ELISA方法检测小鼠抗体免疫效价达到1∶32000,纯化的蛋白具有免疫活性。为研究绵羊FecB基因蛋白的功能提供参考。

绵羊微卫星471U和FecB基因多态性及连锁分析

以高繁殖力(小尾寒羊和湖羊)及低繁殖力(特克塞尔和道塞特)4个绵羊品种为研究对象,分析与绵羊高繁殖力主效基因FecB紧密连锁的微卫星基因座471U在高繁殖力和低繁殖力绵羊品种中多态性,探讨该微卫星基因座与小尾寒羊FecB基因的连锁不平衡关系。结果表明:高繁殖力品种小尾寒羊和湖羊在骨形态发生蛋白受体IB(BMPRIB)基因编码序列第746位碱基处发生了FecB突变(A746G),而在低繁殖力的特克塞尔和道塞特绵羊中未检测到该突变;小尾寒羊BB、B+、的基因型频率分别为0.494、0.392和0.114,湖羊BB、B+的基因型频率分别为0.815和0.185。471U基因座在4个绵羊品种的466只个体中共检测到3个等位基因和5种基因型;小尾寒羊(316只)、湖羊(54只)、特克塞尔(48只)、道塞特(48只)和BB型(156只)、B+型(124只)、型(36只)小尾寒羊以及BB型(44只)、B+型(10只)湖羊群体中优势等位基因大小分别为200、204、200、200、200、200、200、204、204bp,其频率分别为0.767、0.926、1.000、0.625、0.808、0.730、0.722、0.943、0.850。连锁不平衡分析显示,小尾寒羊FecB基因B等位基因与471U基因座200bp等位基因以及+等位基因与471U基因座204bp等位基因均存在一定的连锁不平衡(D′分别为0.430、0.444)。

FecB基因对杜泊羊和湖羊杂交后代产羔率与生长性能的影响

为研究FecB基因在杜泊羊和湖羊杂交后代种群中的多态性及遗传规律,试验以白头杜泊羊为父本,湖羊和杜湖杂交母羊为母本在饲养条件相同的舍饲条件下进行杂交,统计母羊产羔率,测定羔羊初生至6月龄的生长发育数据,并应用PCR-RFLP方法对杂交后代羔羊的FecB基因进行检测,分析其基因型。结果表明:FecB基因有BB、B+和++三种基因型,其中湖羊有2种基因型(BB、B+),杜湖杂交一代、二代有2种基因型(B+、++)。湖羊母羊BB基因型个体的产羔率显著高于B+基因型个体(P<0.05),杜湖杂交一代、二代母羊B+基因型个体的产羔率显著高于++基因型个体(P<0.05);杜湖杂交一代、二代初生羔羊B+基因型个体的体重、体尺均显著低于++基因型个体(P<0.05),而3月龄体重、体尺均低于++基因型个体,但差异均不显著(P>0.05)。说明FecB基因不仅是影响产羔率的主效基因,而且也影响杜湖杂交后代的生长性能。

FecB基因作为小尾寒羊多胎候选基因的研究

试验采用已知繁殖性能的33只小尾寒羊母羊(山东梁山和泰安)、14只蒙古羊母羊(甘肃武威)的血样,提取DNA.用FecB基因作为小尾寒羊多胎候选基因进行研究,利用Australian Sheep Gene Mapping Web Site:AF298885引物(BMPR-IB基因,forced-PCR引物,即:FecB基因引物)进行PCR扩增,对其PCR产物用AvaⅡ酶切进行酶切鉴定基因型.研究结果表明:①小尾寒羊基因型由3种基因型-BB、B+、++组成,其基因型频率分别为0.303 0、0.606 1、0.090 9,突变杂合B+和突变纯合BB为优势基因型、野生型++很低;蒙古羊分别为0、0.071 4、0.928 6;只由两种基因型-++、B+组成,不存在BB型,而且B+频率也很低,未突变野生型-++型为优势基因型.小尾寒羊与蒙古羊在基因型组成上差异均极显著(P＜0.01),这两个品种的多胎表型一致.②小尾寒羊B和+基因频率分别为0.606 1和0.393 9,突变基因B(FecB)为主导基因,蒙古羊分别为0.035 7、0.964 2,蒙古羊以未突变+为主导基因.因此,证明FecB基因是小尾寒羊多胎重要的分子标记,但FecB基因是否是小尾寒羊多胎基因需进一步深入系统研究.③小尾寒羊品种内BB和B+基因型均为多胎表型,通过对小尾寒羊3种基因型第1、2胎次平均产羔数统计发现BB型>B+型>++型,但在研究中发现具有多胎表型而基因型是野生型++的3只小尾寒羊,因此有待进一步研究.