猫过敏原Fel d 1研究进展

全球有相当一部分人群因对猫过敏而受到影响,患者症状小到鼻炎,大到哮喘,甚至呼吸障碍,对过敏患者的生活造成严重影响。Fel d 1是目前公认的主要猫过敏原,是一种分泌型球蛋白,主要产生于猫的皮脂腺和唾液腺,在猫梳理毛发的过程中分布到猫毛上,并最终散播到空气中。为解决人类对猫过敏这一难题,相关研究人员尝试从多条途径减少Fel d 1的分泌或控制其传播,以达到缓解或消除猫过敏患者的过敏反应,如通过清洁猫毛、清洁室内环境、培育低过敏性猫、为猫注射疫苗等方法来实现。本文就猫过敏原的研究进展和对猫过敏的管理控制以及治疗措施进行综述。

猫重组变应原Fel d 1与乙肝病毒核心抗原融合基因的原核表达

为将猫重组变应原Fel d 1蛋白展示在乙肝病毒核心抗原(HBcAg)病毒样颗粒的表面,本试验将编码Fel d 1蛋白的两个基因chain1和chain2拼接在一起形成重组Fel d 1(rFel d 1),然后插入到HBcAg的c/e1loop区,取代HBcAg c/e1loop区的D78与E83之间的氨基酸。经密码子优化后进行全基因合成,成功构建了pET28aHBcAg-rFel d 1原核表达载体,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,进行原核诱导表达与Ni-NTA亲和层析纯化,并进行SDS-PAGE电泳、Western blotting和透射电镜检测。结果显示,本试验成功表达了HBcAg-r Fel d 1融合蛋白,并利用镍柱纯化得到了较纯的HBcAg-rFel d 1融合蛋白,进一步利用负染法透射电子显微镜检测到HBcAgrFel d 1融合蛋白呈现病毒样颗粒结构。HBcAg-rFel d 1融合蛋白能自发形成病毒样颗粒结构,为猫过敏症的预防与治疗性疫苗的开发奠定基础。

子宫珠蛋白与猫主要过敏原Fel d 1之间关系的生物信息学分析

目的:分析人子宫珠蛋白与猫主要过敏原Fel d 1之间关系。方法 :运用ClustalW 1.83和MEGA5.1 Beta3软件比较人分泌球蛋白家族序列及猫过敏原Fel d 1两个亚基P30438和P30440之间的进化树形图;采用在线软件平台NetMHCII 2.2比较分析P30438与子宫珠蛋白典型序列P11684之间抗原性差异;利用Swiss-Model程序模拟并比较P11684、P30438和P30440的三级结构。结果 :分泌球蛋白家族充斥着大量冗余数据,经逐步聚类收缩至13个代表性序列进一步分析发现,整个分泌球蛋白家族划分成两个大家族三个亚家族,而子宫珠蛋白典型序列与猫主要过敏原Fel d 1的一个亚基P30438之亲缘关系最近,两者均具有与HLA高亲和力结合位点,而且三级结构相似。结论:子宫珠蛋白具有潜在的过敏原性。

猫主要过敏原Fel d 1的二级结构及B细胞抗原表位预测

目的预测猫主要过敏原Fel d 1的二级结构和B细胞抗原表位。方法以Fel d 1肽链Ⅰ和肽链Ⅱ的氨基酸序列为基础，通过DNASIar Protean软件，采用Chou—Fasman方法预测蛋白质的二级结构；用Kyte—Doolillle法预测亲水性；用Karplus—Sehulz方法预测柔韧性；用Emini方法预测表面可及性；用Jaineson—Wolf方法预测抗原性指数。结果对Fel d 1的二级结构和B细胞抗原表位预测的结果表明，第15～21、48～57、103～111、138～143、151～161区段是潜在的B细胞抗原表位。结论本研究有助于确定Fel d 1的B细胞优势抗原表位，为Fel d

猫主要过敏原Fel d1的T细胞抗原表位分析及三维结构模拟

目的:预测猫主要过敏原Fel d 1与MHCⅠ、MHCⅡ类分子的结合力获得T细胞优势抗原表位,并模拟Fel d 1的三维结构,为猫主要过敏原的改造及其临床研究等提供依据。方法:从Uniprot数据库中得到猫主要过敏原Fel d 1的氨基酸序列,通过在线软件NetMHCⅡ2.2对Fel d 1氨基酸序列进行MHCⅡ抗原表位分析,使用软件SYFPEITHI分析MHCⅠ的抗原表位,再通过在线软件Swiss-Model预测Fel d 1的三维结构,以Ramachandran图评估三维结构的稳定性。结果:运用生物学软件分析得到Fel d 1上两个高值MHCⅡ抗原表位区域分别为22～43、80～95,MHCⅠ抗原表位优势区为17～30、56～84、91～103。Ramachandran图显示Fel d 1的空间构象稳定。结论:本研究有助于确定Fel d 1的T细胞优势抗原表位及其三维结构模型,为Fel d 1抗原性改造提供理论依据,及将来的临床研究奠定基础。