猫白血病C亚类病毒受体1的反义RNA1靶向抑制微小RNA-515-5p表达对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨猫白血病C亚类病毒受体1的反义RNA1(feline leukemia virus subgroup C virus receptor 1 antisense RNA 1,FLVCR1-AS1)对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法以人永生化鼻咽上皮细胞NP69(简称NP69细胞)为对照,实时荧光定量PCR(realtime fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)法检测鼻咽癌细胞系(5-8F、C666-1、6-10B)中FLVCR1-AS1和微小RNA(microRNA,miR)-515-5p表达。将C666-1细胞分为si-NC组、si-FLVCR1-AS1组、miR-NC组、miR-515-5p组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-NC组和si-FLVCR1-AS1+anti-miR-515-5p组,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,划痕实验和Transwell检测分别检测细胞迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验验证FLVCR1-AS1和miR-515-5p调控关系。结果鼻咽癌细胞系(5-8F、C666-1、6-10B)中FLVCR1-AS1表达高于NP69细胞(2.26±0.11、4.19±0.24、3.54±0.18 vs 1.00±0.00,P<0.05),而miR-515-5p表达低于NP69细胞(0.86±0.09、0.20±0.03、0.47±0.05 vs 1.00±0.00,P<0.05)。与si-NC组比较,si-FLVCR1-AS1组C666-1细胞光密度(optical density,OD)值(0.59±0.03 vs 1.34±0.08)、克隆数[(55.67±1.70)个vs(114.67±3.30)个]、迁移距离[(75.34±3.09)μm vs(186.29±9.29)μm]、侵袭数[(69.33±3.68)个vs(149.67±6.80)个]降低(P均<0.05)。与miR-NC组比较,miR-515-5p组C666-1细胞OD值(0.51±0.04 vs 1.36±0.07)、克隆数[(46.67±1.25)个vs(115.67±4.11)个]、迁移距离[(65.89±1.96)μm vs(186.49±8.33)μm]、侵袭数[(58.33±2.05)个vs(150.00±6.98)个]降低(P均<0.05)。FLVCR1-AS1可靶向负调控miR-515-5p。与si-FLVCR1-AS1+anti-miR-NC组比较,si-FLVCR1-AS1+anti-miR-515-5p组C666-1细胞OD值(1.16±0.06 vs 0.59±0.04)、克隆数[(106.00±3.56)个vs(55.33±2.49)个]、迁移距离[(164.06±7.40)μm vs(75.48±2.62)μm]、侵袭数[(134.67±5.31)个vs(69.00±2.94)个]升高(P均<0.05)。结论 FLVCR1-AS1可能靶向下调miR-515-5p促进鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭。

FLVCR1-AS1靶向miR-877-5p对宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨猫白血病病毒C亚类受体1反义RNA1(FLVCR1-AS1)对宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法收集2016年12月至2018年11月在海南医学院第二附属医院行手术治疗的35例宫颈癌患者的癌组织和癌旁组织。体外培养SiHa细胞,按不同转染分为si-NC组、小干扰RNA(si)-FLVCR1-AS1组、miR-NC组、微小RNA(miR)-877-5p组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-NC组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-877-5p组,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western Blot法检测细胞中Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达,RT-qPCR检测FLVCR1-AS1和miR-877-5p表达。双荧光素酶报告基因实验验证FLVCR1-AS1和miR-877-5p的调控关系。结果宫颈癌组织中FLVCR1-AS1表达量高于癌旁组织(3.82±0.23 vs 1.00±0.08,t=68.510,P<0.01);而miR-877-5p表达量低于癌旁组织(0.32±0.03 vs 1.00±0.05,t=68.993,P<0.01)。经转染后,si-FLVCR1-AS1组SiHa细胞中FLVCR1-AS1表达较si-NC组显著下调(P<0.01),且其OD值、迁移数、侵袭数及Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白的表达量均低于si-NC组(P<0.01)。miR-877-5p组SiHa细胞中miR-877-5p表达较miR-NC组显著上调(P<0.01),且其OD值、迁移数、侵袭数及Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达量均低于miR-NC组(P<0.01)。与miR-877-5p抑制剂共转染后,si-FLVCR1-AS1+anti-miR-877-5p组SiHa细胞OD值、迁移数、侵袭数及Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达量均高于si-FLVCR1-AS1+anti-miR-NC组(P<0.01)。结论 FLVCR1-AS1可能通过靶向抑制miR-877-5p的表达促进宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移和侵袭。

秦皮乙素对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨秦皮乙素对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能的分子机制。方法将SiHa细胞分为对照组、不同剂量秦皮乙素组、si-NC组、si-猫白血病C亚类病毒受体1反义RNA1(FLVCR1)-AS1组、秦皮乙素高剂量+pcDNA组、秦皮乙素高剂量+pcDNA-FLVCR1-AS1组。秦皮乙素低、中、高剂量组分别给予1 mmol/L、2 mmol/L、4 mmol/L的秦皮乙素处理细胞;si-NC组、si-FLVCR1-AS1组分别给予si-NC、si-FLVCR1-AS1转染细胞;秦皮乙素高剂量+pcDNA组、秦皮乙素高剂量+pcDNA-FLVCR1-AS1组分别给予pcDNA、pcDNA-FLVCR1-AS1转染细胞后,再给予4 mmol/L的秦皮乙素处理细胞。采用流式细胞仪检测细胞周期,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖情况,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法检测上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)及神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)表达水平,实时荧光定量PCR检测FLVCR1-AS1 mRNA表达水平。结果与对照组比较,秦皮乙素中、高剂量组SiHa细胞中G_(0)/G_(1)期细胞比例升高,S期细胞比例、细胞吸光度值降低,迁移和侵袭细胞数减少,E-cadherin蛋白相对表达水平升高,N-cadherin蛋白及FLVCR1-AS1 mRNA相对表达水平降低(均P<0.05)。与si-NC组比较,si-FLVCR1-AS1组SiHa细胞中G_(0)/G_(1)期细胞比例升高,S期细胞比例、细胞吸光度值降低,迁移和侵袭细胞数减少,E-cadherin蛋白相对表达水平升高,N-cadherin蛋白相对表达水平降低(均P<0.05)。与秦皮乙素高剂量+pcDNA组比较,秦皮乙素高剂量+pcDNA-FLVCR1-AS1组G_(0)/G_(1)期细胞比例降低,S期细胞比例、细胞吸光度值升高,迁移和侵袭细胞数增加,E-cadherin蛋白相对表达水平降低,N-cadherin蛋白相对表达水平升高(均P<0.05)。结论秦皮乙素可能通过下调FLVCR1-AS1基因的表达水平抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭。