“通督调神”电针预处理介导miR-124-3p/GSK-3β/Cyp-D信号通路对脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质线粒体通透性转换孔的影响及机制探讨

背景缺血性脑卒中发病率、死亡率、致残率均较高,溶栓后的再灌注损伤对患者影响较大,针刺是治疗本病的特色疗法,但作用机制尚不明确。目的探讨“通督调神”电针预处理对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠miR-124-3p/糖原合成酶激酶β(GSK-3β)/亲环素D(Cyp-D)信号通路及线粒体膜通透性转换孔(MPTP)的影响,探讨其防治CIRI的可能机制。方法2022年6—8月,将100只清洁级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、抑制剂组和电针+激动剂组,每组20只。造模前干预7 d,电针组、电针+激动剂组选取通督调神穴组:百会、风府、大椎穴进行电针干预,1次/d,连续7 d;造模前24 h电针+激动剂组和抑制剂组分别侧脑室注射miR-124激动剂和抑制剂(5 nmol)。除假手术组,余组采用改良线栓法制备大鼠右侧脑缺血再灌注模型;造模成功后,取大鼠右侧脑皮质,采用改良神经功能损伤评分量表(mNSS)、TTC染色观察各组大鼠神经功能损伤程度,TUNEL染色以及透射电镜观察神经细胞损伤情况;免疫荧光染色、Western blotting、实时荧光定量PCR检测各组大鼠脑皮质GSK-3β、p-GSK-3β、Cyp-D、细胞色素C(Cyt-C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达;流式细胞检测MPTP开放程度,MPTP阳性细胞率越高,代表MPTP开放程度越大。结果除假手术组,各组大鼠均造模成功。与假手术组比较,模型组大鼠mNSS评分及相对脑梗死体积均增加,线粒体结构破坏严重,细胞凋亡指数升高,p-GSK-3β、Cyp-D阳性表达分别减弱和增强,miR-124-3p及Cyp-D、Cyt-C、Caspase-3 mRNA表达增高,p-GSK-3β/GSK-3β值降低,Cyp-D、Cyt-C、Caspase-3蛋白相对表达量增高,MPTP开放程度增加(P<0.05)。与模型组比较,电针组、抑制剂组mNSS评分及相对脑梗死体积均降低,线粒体结构破坏减轻,p-GSK-3β/GSK-3β增加,Caspase-3蛋白相对表达量降低;电针+激动剂组GSK-3βmRNA表达增高(P<0.05);电针组、抑制剂组、电针+激动剂组细胞凋亡指数降低,p-GSK-3β、Cyp-D阳性表达分别减弱和增强,miR-124-3p及Cyp-D、Cyt-C、Caspase-3 mRNA表达降低,Cyp-D、Cyt-C蛋白相对表达量降低,MPTP开放程度降低(P<0.05)。与电针组比较,抑制剂组p-GSK-3β阳性表达增强,Cyp-D阳性表达减弱,miR-124-3p及Cyp-D、Cyt-C、Caspase-3 mRNA表达降低,GSK-3βmRNA表达增高,Cyp-D、Cyt-C蛋白相对表达量降低,MPTP开放程度降低(P<0.05);电针+激动剂组细胞凋亡指数增高,p-GSK-3β阳性表达减弱,Cyp-D阳性表达增强,miR-124-3p、Cyt-C、Caspase-3 mRNA表达增高,Cyp-D、Cyt-C蛋白相对表达量增高,MPTP开放程度增加(P<0.05)。结论“通督调神”电针预处理可减轻CIRI大鼠神经损伤,其机制可能与介导miR-124-3p/GSK-3β/Cyp-D信号通路、抑制MPTP开放进而减轻细胞损伤相关。这一研究结果从机制上进一步验证了“通督调神”针法治疗CIRI的疗效,同时为中医“治未病”提供新的科学依据,促进临床应用。

电针刺激改善焦虑大鼠行为学及对脑源性神经营养因子表达、下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响

目的观察电针百会、风府穴对焦虑模型大鼠行为学及脑源性神经营养因子(Brain-derived neuro⁃trophic factor,BDNF)、促肾上腺皮质释放激素(Corticotropin releasing hormone,CRH)、皮质醇(Cortisol,CORT)表达的影响,探讨针刺治疗焦虑障碍效应及作用机制。方法将30只SPF级SD雄性大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、电针组,每组各10只。采用慢性不可预见性应激刺激法制备焦虑大鼠模型。电针组取“百会”“风府”穴进行电针操作,隔日1次,20 min/次,造模与干预共计15 d。15 d后,采用高架十字迷宫实验(Elevated plus maze,EPM)和自发活动旷场实验(Open field test,OFT)测试大鼠行为学变化,HE染色法观察大鼠海马形态,免疫组化法观察海马组织内BDNF蛋白表达,酶联免疫吸附法检测血清BDNF、CRH与CORT的含量。结果与正常组比较,模型组大鼠进入开臂次数百分比(The percentage of open arm entry,OE%)、开臂停留时间百分比(The per⁃centage of open arm time,OT%)明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),水平得分、垂直得分明显下降,差异有统计学意义(P<0.01),血清BDNF、CRH、CORT含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),海马神经元数量和BDNF蛋白阳性明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,电针组OE%、OT%值明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),水平得分、垂直得分明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),海马神经元数量和BDNF蛋白阳性含量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),血清BDNF、CRH、CORT含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论电针可改善焦虑大鼠的焦虑样行为症状,其抗焦虑的机制可能与上调海马BDNF水平,抑制血清中BDNF、CORT、CRH的表达,使下丘脑-垂体-肾上腺(Hypothalamic–pituitary–adrenal,HPA)轴亢进受抑有关。

电针联合人脐带间充质干细胞移植对缺血性脑损伤大鼠血脑屏障及腺苷A2A受体、GSK-3β/β-catenin表达的影响

【目的】观察电针百会、风府、双侧肾俞穴联合人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)移植对缺血性脑损伤大鼠的脑保护作用及机制。【方法】将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、移植组、联合组,每组10只。除正常组,其他各组大鼠建立脑缺血再灌注损伤模型。在造模结束24 h后,移植组大鼠给予0.5 m L 2×10^(6)个hUC-MSCs细胞悬液一次性尾静脉植入,联合组在移植组治疗基础上,给予电针百会穴、风府穴、双侧肾俞穴,每次30 min,每日1次,连续针刺3周。治疗结束后,苏木素-伊红(HE)染色法观察海马组织病理形态,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法观察脑组织细胞凋亡情况,免疫荧光法检测脑组织腺苷A2A受体(ADORA2A)表达,免疫组织化学法检测脑组织糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达,Western Blot法检测脑组织跨膜蛋白闭锁蛋白(Occludin)、胞质附着蛋白(ZO-1)表达。【结果】与正常组比较,模型组脑组织细胞凋亡率升高,脑组织ADORA2A阳性表达率及GSK-3β蛋白表达水平升高,Occludin、ZO-1、β-catenin蛋白表达水平降低(P<0.05),HE染色结果显示,模型组海马组织结构明显异常;与模型组比较,移植组和联合组大鼠脑组织细胞凋亡率降低,脑组织ADORA2A阳性表达率及GSK-3β蛋白表达水平降低,Occludin、ZO-1、β-catenin蛋白表达水平升高(P<0.05),海马组织病理程度明显减轻;与移植组比较,联合组脑组织细胞凋亡率降低,脑组织ADORA2A阳性表达率及GSK-3β蛋白表达水平降低,Occludin、ZO-1、β-catenin蛋白表达水平升高(P<0.05)。【结论】电针百会、风府、双侧肾俞穴联合hUC-MSCs可改善缺血性脑损伤大鼠血脑屏障,抑制脑组织ADORA2A、GSK-3β表达,提高β-catenin表达,抑制脑组织细胞凋亡,起到脑保护作用,且作用效果优于单纯hUC-MSCs移植。

风府穴治疗中风后吞咽障碍应用探析

为探究风府穴与中风后吞咽障碍治疗的相关性,该文从理论研究及临床应用研究两方面对近年来有关报道进行综述,以分析风府穴治疗吞咽障碍的机制及临床应用情况。理论研究表明,风府穴因其“位归督脉,入脑主咽”,总属“气街四海”,可“调髓行气”“祛风散邪”“通利咽喉”;现代医学则认为其解剖位置独特,通过干预风府穴可激活吞咽相关神经调控系统,改善脑部供血供氧,抑制神经炎症反应,从多方面挽救受损脑组织,进而促进吞咽功能恢复。临床研究显示,对风府穴实施不同的干预措施,如普通针刺、深刺、低频电针、刺络放血及艾灸等,均能获取良好的疗效。综上可知,风府穴对于中风后吞咽障碍的疗效确切,可推广应用。

《针灸大成》风池穴配伍及应用研究

总结《针灸大成》有关风池穴的记载,了解其定位、穴性、刺法灸法,总结分析其临床应用,其治疗作用广泛,以头风、头痛、眩晕等神经系统疾病为主,与他穴配合使用治疗伤寒、咳嗽等肺系疾病及眼科疾病较多。配穴所属经络以阳经为主,五输穴使用较多,配合使用最多的穴位主要有合谷、风府。发现穴位的主治作用主要根据位置及穴性,风池的作用以局部病变及与风邪相关疾病为主。

应用CT测量风府针刺深度的研究

目的:研究风府穴在CT定位下针刺安全深度,为针灸临床提供安全进针的参考数据。方法:将41例成年志愿者按罗氏指数分为瘦人组、适中人组和胖人组3型,应用CT断层技术测量风府穴的针刺深度。结果:不同体型的人直刺安全深度不同,风府瘦人组为(27.73±3.45)mm,适中人组(30.78±2.90)mm,胖人组(33.39±4.27)mm。结论:不同体形人风府穴的针刺安全深度数据可以参考安全深度≤危险深度×75%计算。

针刺百会、风府穴对缺血性卒中恢复期患者大脑中动脉血流动力学影响的研究

目的探究针刺百会、风府穴对缺血性卒中恢复期患者大脑中动脉(MCA)血流动力学的影响,并观察不同性别患者间的差异。方法选取缺血性卒中恢复期患者30例作为混合组,其中男15例作为男性组、女15例作为女性组。应用经颅多普勒检测技术(TCD)记录所有患者在针刺百会、风府穴前、针刺后、行针时、出针时和出针后双侧大脑中动脉的血流动力学参数并进行分析。结果混合组和男性组行针时、出针时双侧MCA的舒张末期最大血流速度(Vd)、平均血流速度(Vm)均显著高于针刺前(P均<0.05),搏动指数(PI)均显著低于针刺前(P均<0.05);女性组行针时、出针时、出针后双侧MCA的Vd、Vm均显著高于针刺前(P均<0.05),PI均显著低于针刺前(P均<0.05)。结论针刺百会、风府穴可增加缺血性卒中恢复期患者双侧MCA血流速度,增加血管弹性和顺应性,改善脑血流动力学,在针刺后遗效应上女性患者要优于男性。

电针对阿尔茨海默病模型大鼠海马区BDNF TrkB的影响

目的:观察电针对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马区BDNF、TrkB的影响,探讨针刺风府穴治疗AD的作用机理。方法:选取Wistar大鼠,随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组,以双侧海马注射微量Aβ25-35制备AD动物模型,电针组选取风府穴行电针治疗,以Morris水迷宫评价大鼠学习记忆能力,免疫组化法观察海马区BDNF、TrkB的表达。结果:与正常组比较,模型组学习记忆能力减退,海马区BDNF、TrkB的表达明显减少(P<0.01);经电针治疗后,学习记忆能力增强,BDNF、TrkB的表达较模型组增加。结论:针刺风府穴可显著改善AD模型大鼠的学习记忆能力,增加海马区BDNF、TrkB的表达。

针刺风池、风府穴对缺血性脑卒中患者血浆内皮素的影响

目的观察针刺风池、风府穴配合常规针刺对缺血性脑卒中的血浆内皮素-1(ET-1)的影响。方法将100例缺血性脑卒中患者随机分为治疗组和对照组,每组50例。治疗组采用针刺风池、风府穴配合常规针刺治疗,对照组采用常规针刺治疗。比较两组治疗前后血浆ET-1含量及日常生活能力积分(ADL)的变化情况。结果两组患者治疗后血浆ET-1含量、ADL均较同组治疗前显著降低(均P<0.01),但治疗组对血浆ET-1、ADL等指标的改善明显优于对照组(均P<0.01)。结论针刺风池、风府穴配合常规针刺对缺血性脑卒中患者有较好的治疗作用,其作用机制可能是通过调节血浆中ET-1的含量。

电针对局灶性脑缺血模型大鼠皮层BDNF、TrkB的影响

目的:观察电针对不同时间点局灶性脑缺血模型大鼠缺血区皮层BDNF、TrkB的影响。方法:采用线栓改良法复制大脑中动脉缺血模型(MCAO),采用免疫组化SABC法观察缺血皮层BDNF、TrkB表达情况。结果:BDNF、TrkB阳性神经元主要分布在梗死灶周围皮质区。假手术组大鼠相应区域可见少量阳性神经元表达,且强度较弱;模型组各时间点梗死周围皮质BDNF、TrkB阳性神经元比假手术组明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);电针组各时间点梗死周围皮质BDNF、TrkB比相同时间点模型组显著增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:电针风府穴可以增加急性脑缺血后缺血周围皮质BDNF、TrkB阳性神经元,对缺血性脑损伤起修复和保护作用。

应用MRI测量哑门和风府针刺危险深度的研究

目的通过MRI正中矢状面T1wI，测量不同年龄段及不同体型患者哑门（GVl5）和风府（GVl6）针刺危险深度，并对其分布特点进行分析。方法选取2012年6～12月在海南医学院附属医院放射科检查的不同年龄段患者98例，根据罗氏指数再将各年龄组分为3型：瘦长型、适中型与肥胖型，所有图像取正中矢状位，根据临床操作习惯和实际可行性进行危险深度测量。结果在不同年龄组的瘦长型患者中，GV15和GV16的针刺深度均差异无统计学意义；在适中型患者中，18～〈45岁组与45～60岁组比较，GV15和GV16的针刺深度差异有统计学意义（P=0．029，P=0．018）；在肥胖型患者中，45～60岁组与其他组比较，GV15和GV16的针刺深度差异有统计学意义（P〈0．05）。结论GVl5和GVl6的危险深度与年龄并无相关性，但是与罗氏指数存在正相关，即随着罗氏指数的增加，GV15和GV16的危险深度也随之增加。

风府穴刺络放血治疗脑梗死后口腔期吞咽障碍疗效观察

目的:对观察风府刺血疗法改善脑卒中后口腔期吞咽障碍的临床疗效,为临床脑卒中后吞咽障碍患者提供一种新方法。方法:将符合脑卒中诊断标准并伴有口腔期吞咽障碍的68例脑卒中患者,采用随机单盲平行对照和患者自身前后对照的研究方法分为治疗组与对照组,每组34例,两组按洼田饮水试验进行评估,两组给予相同的背景治疗,治疗组在对照组基础治疗上加用风府刺血疗法,每周2次,4周为1个疗程,1个疗程结束后再按洼田饮水试验进行评估,比较两组治疗方法对脑卒中口腔期吞咽障碍影响的差异。结果:治疗组和对照组的吞咽障碍在治疗后均有明显改善,组间比较有明显差异(P<0.05)。结论:风府刺血法可以提高脑卒中后口腔期吞咽障碍疗效。

针刺“风府”穴对大鼠脑内神经肽胆囊收缩素基因表达的影响

手法针刺大鼠“风府”（天门）穴，用ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ方法对针刺不同时限的生理状态大鼠脑内神经肽胆囊收缩素（ＣｈｏｌｅｃｙｓｔｏｋｉｎｉｎＣＣＫ）的基因在转录水平的表达情况进行比较研究。结果表明针刺即刻ＣＣＫ信息核糖核酸（ｍＲＮＡ）表达开始增加，３小时其浓度急剧升高．６小时已回落，２４小时几近平复。提示针刺后３～６小时是ＣＣＫ基因表达的高峰时期，手法针刺诱发的脑内ＣＣＫｍＲＮＡ的表达没有观察到累积迭加和持续促进的结果，并且与捉抓引起的应激反应有本质区别。

以风府、哑门为主穴针刺治疗小儿痉挛型脑瘫疗效观察

目的观察以风府、哑门为主穴针刺治疗小儿痉挛型脑瘫的临床疗效。方法选取小儿痉挛型脑瘫患者60例随机分为治疗组与对照组,每组30例。分别采用以风府、哑门为主穴针刺治疗和西医常规治疗加康复训练,3个疗程后观察各组治疗前后发育商DQ分值及肢体痉挛状态改变情况。结果根据疗效判定标准,治疗组显效7例,有效22例,无效1例,总有效率为96.7%;对照组显效3例,有效21例,无效6例,总有效率为80.0%;发育商DQ分值两组均有提高,治疗组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。肢体痉挛状态改变两组均有改善,治疗组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组生存质量优于对照组。结论显示以风府、哑门为主穴针刺治疗小儿痉挛型脑瘫疗效确实。

风府穴解剖结构的三维重建研究

目的 :利用三维重建软件在断面图像的基础上 ,在计算机上进行人体的重建和切割 ,从多层面显示穴位所处的各种解剖结构。方法 :将制作的风府穴断面标本拍摄成图像输入计算机 ,利用软件进行重建和切割。结果 :得到经风府穴的矢状、冠状、横断和斜切面。结论 :实体图像经软件重建和切割后 ,图像结构清晰 ,色彩鲜明 。

针药结合干预大鼠局灶性脑缺血组织ATP酶活性及能量代谢的研究

目的探讨针药结合干预大鼠局灶性脑缺血组织ATP酶活性及能量代谢的研究。方法将大鼠大脑中动脉阻塞(M CAO)持续脑缺血模型为研究对象,实验设假手术组、模型组、血塞通组、针刺组、针药组,观察术后4、24、72 h的神经功能缺损评分,比较各组的脑梗死体积,用分光光度法检测钠钾离子泵(Na+,K+-ATPase)、钙离子泵(Ca2+-ATPase)、镁离子泵(M g2+-ATPase)的活性,用高效液相色谱法检测三磷酸腺苷(ATP)、总腺苷酸(TAN)的含量。结果①各治疗组梗死灶体积明显小于模型组(P<0.01);针药组梗死灶体积明显小于血塞通组、针刺组(P<0.01)。②除假手术组外,各组动物从4h至72h神经功能缺损评分均有所降低,其中针药组神经功能缺损评分较针刺组低(P<0.01)。③假手术组、治疗组Na+,K+-ATPase,Mg2+-ATPase,Ca2+-ATPase活性均较模型组高(P<0.05);针刺组与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05),针药组、血塞通组与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05)。④模型组、血塞通组、针刺组ATP均较假手术组低(P<0.01),针药组ATP值比假手术组低,但差异无统计学意义(P>0.05),与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);针药组ATP较血塞通组、针刺组高(P<0.05)。模型组、血塞通组TAN较假手术组和针药组低(P<0.05)。结论血塞通组、针刺组、针药组均能改善急性脑缺血大鼠神经功能。针药组优于针刺组和血塞通组。

风府穴对针刺治疗假性球麻痹效果的影响

目的 观察风府穴是否能增加治疗假性球麻痹的效果。方法 60例脑卒中合并假性球麻痹患者被随机均匀分成两组。对照组治以风池、廉泉、通里,治疗组则在上方基础上加针风府。结果 治疗组 30例,治愈 13例 ( 43. 3% ),总有效率93. 3%;对照组 30例,治愈 7例(23. 3% ),总有效率73. 3%。治疗组疗效明显优于对照组 (P<0. 05)。结论 加用风府穴对针刺治疗假性球麻痹可明显增加疗效。

调跷脉治疗上睑下垂40例

目的:比较调跷脉针刺法与常规针刺法治疗上睑下垂的临床疗效。方法:将80例上睑下垂患者随机分为调跷脉治疗组和常规对照组,每组各40例。调跷脉治疗组采用调跷脉针刺法治疗,取风府、照海、申脉、跗阳、交信;常规对照组采用常规针刺治疗,取风池、攒竹、丝竹空、阳白、三阴交等穴,两组均治疗10次为1个疗程,共治疗3个疗程。结果:调跷脉治疗组和常规对照组有效率分别为92.5%和70%,调跷脉治疗组明显优于常规对照组(P<0.01);治疗后两组患者睑裂均增宽,但调跷脉治疗组为优(P<0.05)。结论:调跷脉治疗上睑下垂疗效肯定,值得进一步研究和临床推广。

风府、哑门穴位针刺安全深度的磁共振成像和尸体对照研究

目的通过对风府、哑门穴位采用MRI和尸体断层解剖测量出针刺危险深度,计算出安全深度,为临床医生针灸操作提供安全参考指标。方法 1.选取健康成年男性志愿者,筛选出研究对象30人;2.用同身寸法取穴定位和标记,穴位进针点用医用胶布贴上鱼肝油;3.在MRI断面上测量体表鱼肝油影像至危险点解剖结构的直线距离;4.筛选10例适中体型男性尸体,体表穴位定位,低温冷冻后用高速带锯切割,在断面上用游标卡尺测量穴位体表至危险点解剖结构的直线距离;5.用T检验进行统计学分析。结果直刺风府、哑门穴的危险深度和安全深度MRI组与尸体组比较,P<0.05,差异有统计学意义。结论适中体型男性直刺以下穴位的平均安全深度的最大值为:风府36mm,哑门36mm。

南秦岭东江口岩体中丰富金矿矿床特征与成因浅析

陕西省宁陕县丰富金矿产于南秦岭构造带东江口岩体内,为一中型规模金矿床,赋矿围岩为黑云母二长花岗岩。矿床形成于印支-燕山期秦岭造山过程中由碰撞向伸展构造体制转变的后碰撞构造环境,成矿时代限定为200Ma左右的燕山早期,矿床类型为硫化物石英脉型和破碎带蚀变岩型。金的赋存状态有包裹金、裂隙金及晶隙金三种,以裂隙金和晶隙金为主,具有多期成矿特征。围绕主岩浆期后超浅成-浅成侵入的中基性岩脉、岩枝、岩株呈环状展布的缓倾斜断裂是主要的控矿和赋矿构造,成矿作用与主岩浆期后火山-次火山作用或隐蔽爆破作用引发的热液作用有关。