蜜环菌多糖的分离纯化及PMP衍生化HPLC分析

目的:对蜜环菌发酵液进行多糖的提取、分离纯化,得到均一多糖,对其进行单糖组分分析。方法:分离纯化采用分步醇沉和葡聚糖凝胶(Sephadex G-200)色谱法;纯度鉴定及分子量测定采用高效液相色谱法;单糖组成采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生HPLC法测定。结果:获得两种均一多糖(AMFP-Ⅰ、AMFP-Ⅱ),峰位分子量分别为812 939D、596217D,重均分子量(MW)分别为995 098D、872 640D,分布宽度(Mw/Mn)分别为1.268 93、1.235 20;测定单糖组成为甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖。结论:两种多糖分子量分布及单糖组成均不同,AMFP-Ⅰ主要由半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖组成,AMFP-Ⅱ主要由半乳糖醛酸、半乳糖、木糖组成。

HPLC法测定丙酸菌发酵液中游离氨基酸的含量

建立了一种利用反相高效液相色谱法检测18种氨基酸的方法。以2,4-二硝基氟苯(DNFB)为柱前衍生剂,使用TIANHE Kromasil C18(4.6mm×250mm,5μm)反相色谱柱,采用二元梯度洗脱,流动相A相为0.05mM醋酸钠缓冲液(pH5.3),B相为乙腈-水(v/v=1∶1)。在该条件下,各氨基酸线性回归方程相关系数均大于0.9991,18种氨基酸的加样回收率均在95%103%范围内,该法快速、可靠,并将其应用于丙酸菌发酵液中的氨基酸检测。

HPLC法测定苹果树腐烂病菌发酵液中的有机酸和葡萄糖

建立了一种用高效液相色谱（HPLC）检测苹果树腐烂病菌发酵液中有机酸和葡萄糖的方法。采用Atlantis C18色谱柱（150mm×4．6mm，3．5μm），以5g／LNH4H2PO4（用磷酸调pH=2．5）溶液为流动相，流速为0．6mL／min，柱温30℃，应用紫外检测器检测有机酸，示差检测器来分析葡萄糖。在此色谱条件下，葡萄糖和有机酸能很好地被分离检出，平均回收率为96．2％-102．2％，精密度RSD（n=5）为0．26％-0．75％，每一样品的分析时间不超过15min。该方法能够简便、快速测定苹果树腐烂病菌发酵体系中有机酸及葡萄糖的含量。

HPLC法定量分析微生物法制备液中产物γ-氨基丁酸和底物L-谷氨酸

建立一种测定微生物法制备液中γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）和L-谷氨酸（L-glutamic,L-Glu）的高效液相色谱法.样品经10％三氯乙酸溶液预处理后,用4 mmol/L氯甲酰芴甲酯进行柱前衍生.采用Phenomenex C18色谱柱（4.6 mm＆#215;250 mm,5 μm）,以A[50 mmol/L乙酸钠溶液（pH 4.8）-甲醇-乙腈-四氢呋喃（82∶8.5∶8.5∶1,V/V）]：B[50 mmol/L乙酸钠溶液（pH 4.8）-甲醇-乙腈-四氢呋喃（22∶38.5∶38.5∶1,V/V）]=30∶70为流动相,流速1.0 mL/min,柱温40℃洗脱,检测波长265 nm.该方法稳定、灵敏、测定周期短、重复性好.在GABA和L-Glu质量浓度为20～400 μg/mL范围内有良好的线性关系.与常用衍生剂邻苯二甲醛相比,衍生产物的稳定性更好,且无需梯度洗脱.

UPLC法和HPLC法对比检测乳酸菌发酵液中的γ-氨基丁酸

采用超高效液相色谱(UPLC)与高效液相色谱(HPLC)邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生-紫外检测法对比分析乳酸菌发酵液中γ-氨基丁酸(GABA)含量,建立GABA质量浓度与吸光度值的线性回归方程。2种方法测得的GABA在质量浓度100.0~1000.0 mg/mL范围内均有良好的线性关系(相关系数R2>0.998)。UPLC法和HPLC法精密度试验结果相对标准偏差(RSD)均<1.5%,UPLC法的平均相对标准偏差(MRSD)为0.529%,平均回收率为99.59%;HPLC法的平均相对标准偏差为1.175%,平均回收率为98.06%。结果表明2种检测方法均可准确定量分析乳酸菌发酵液中GABA含量,二者相比较,UPLC法更快捷,更适合大量样品检测。

RP-HPLC法测定发酵液中麦考酚酸的含量

目的:建立发酵液中麦考酚酸含量的反相高效液相色谱分析方法。方法:发酵液样品用甲醇提取后进样。采用 Sino-Chrom ODS-BP(5μm,200 mm×4.6 mm)色谱柱,以甲醇-10 mmol·L^(-1)醋酸铵(67:33)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长220 nm,艾瑞昔布为内标,测定了63株菌发酵液样品中麦考酚酸的含量。结果:发酵液中麦考酚酸含量在0.30～6.00mg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=0.9997,n=6),平均回收率为102.4%(n=9)。结论:本测定方法准确、简便,重复性好,为筛选发酵法合成麦考酚酸的高产菌株提供了可靠依据。

柠檬酸发酵液中有机酸含量HPLC法测定

为同时测定柠檬酸发酵液中12种有机酸的含量,文章采用高效液相色谱建立了流动相为0.1%磷酸溶液∶乙腈=96.5%∶3.5%,流速为0.5 mL/min,柱温为25℃,检测波长为210 nm,进样量为10μL的高效液相色谱法(HPLC)。利用该方法测得的各有机酸的相对标准偏差为0.32%~4.16%,加标回收率为96.22%~105.00%。该方法简便快速、准确度高。

HPLC分析庆大霉素发酵液C组份条件的探讨

系统考察了HPLC分析庆大霉素发酵液C组份中各种因素的影响．如不同型号的ODS柱，不同的流动相配比，用甲酸代替冰醋酸以及不同的发酵液前处理方法等。在上述研究基础上建立的在Waters－Nova－PakC184μm3．9×150mm柱上，以庚烷磺酸钠浓度（5．0g／L）甲醇：水：甲酸＝74：21：5为流动相系统，在20min内即可完成样品分析，且C1峰与相邻杂质峰获得了良好分离。本法首次采用甲酸取代药典规定的流动相中的冰醋酸，使庆大霉素发酵液组份C1峰与相邻杂质峰的分离效果显著，为今后庆大霉素发酵液的质量控制及其质量标准的改进，提供了新的有效途径。

衍生化-液相色谱-串联质谱法同时测定益生菌发酵液中3种短链脂肪酸和乳酸含量

建立一种结合柱前衍生技术液相色谱-三重四级杆质谱联用同时测定益生菌发酵液中乙酸、丙酸、丁酸和乳酸含量的方法。在吡啶作为催化试剂和碳二亚胺盐酸盐做偶联试剂条件下,目标物与3-硝基苯肼缩合反应生成3-硝基苯腙,优化确定衍生反应的温度、时间以及试剂用量;采用BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)液相色谱柱,以甲酸水-甲醇异丙醇为流动相,5 min内较好的分离了3种短链脂肪酸和乳酸;采用ESI离子源,多反应监测负离子模式采集质谱信号,以丁酸-D7为内标进行定量。最佳反应条件为30 mmol/L EDC作为偶联试剂和50 mmol/L 3-NPH·HCl作为衍生试剂,40℃反应30 min;4种目标物在各自的浓度线性范围内线性关系良好(R^(2)>0.999),方法检出限为0.5~2 mg/kg,加标回收率在81.8%~105.3%之间,重复性测试相对标准偏差1.3%~5.1%。该方法灵敏度高,结果可靠,操作简便,适用于各类益生菌发酵液中3种短链脂肪酸和乳酸的同时快速测定。

反相高效液相色谱法测定发酵液中乳酸的含量

本文采用反相高效液相色谱法实现了对发酵液中可能存在的5种有机酸(乳酸、乙酸、苹果酸、琥珀酸、富马酸)的分离并对乳酸定量分析效果进行研究。结果表明该方法对乳酸含量的测定具有快速,简便、灵敏、重现性好的特点,可用于发酵企业的质量控制与产品检测。

高效液相色谱法同时测定生物质乳酸发酵液中有机酸及糖类化合物

建立了高效液相色谱(HPLC)同时测定生物质乳酸发酵液中有机酸及糖类的分析方法。使用Bio-RadAminex HPX-87H色谱柱,以5 mmol/L的H2SO4为流动相,在柱温55℃,流速0.6 mL/min条件下,采用示差折光检测器进行检测。结果表明,该方法可在17 min内实现发酵液中各种有机酸和糖类化合物等的完全分离与定量,6种有机酸和3种糖类化合物在0.15～5.19 g/L范围内的线性关系良好,回归方程的线性相关系数在0.999 8以上。将该法用于米根霉发酵液的检测,两个水平的加标回收率为96.91%～103.11%,相对标准偏差(n=6)为0.81%～4.61%。该法适用于微生物发酵液中多种有机酸和糖类的快速、高效分离和定量测定。

柱前衍生-反相高效液相色谱法测定不同方法煮制的猪肉及其汤汁中的游离氨基酸

建立了反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离检测用不同方法煮制的猪肉及其汤汁中17种游离氨基酸的方法。样品经6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生后,采用Nova-PakTM C18色谱柱分离,以AccQ.Tag Eluent A稀释液、乙腈和超纯水为流动相,梯度洗脱,检测波长为248 nm,在47 min内实现了17种氨基酸衍生物的基线分离。各氨基酸在1～100μmol/L(胱氨酸在0.5～50μmol/L)范围内呈现出良好的线性关系,相应的线性相关系数(r2)均大于0.99;17种氨基酸的检出限(以信噪比为3计)为0.29～0.96μmol/L;在汤汁中的加标回收率为86.5%～101.0%。该方法前处理过程简单,分离效果好,是检测肉及其汤汁中氨基酸的有效手段,可应用于肉制品的质量评定和工艺优化。

高效液相色谱-串联质谱法直接定量分析植物酵素中多种氨基酸成分

利用高效液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法直接分析植物酵素中多种未衍生化的氨基酸。样品用甲醇稀释5倍,超声提取30 min,离心10 min（速度为10 000 r/min）,取上清液分析。采用色谱柱Venusil ASB C18（250mm×4.6 mm,5μm）分离,以甲醇-乙酸-水混合溶液为流动相体系进行梯度洗脱,流速为0.5 mL/min,质谱喷雾电压为3 kV,离子源温度为150℃,去溶剂温度350℃,去溶剂气体流速为800 L/h。碰撞气氩气的流速保持压力为0.17 Pa。以被测物的提取离子流图峰面积进行定量,该分析方法的线性范围为0.5~200μmol/L（r2〉0.99）,回收率为86%~110%,可对植物酵素中16种氨基酸成分进行定量分析。该方法操作简便快速、准确可靠,还适用于食品、药品及天然产物中多种氨基酸成分的定量分析。

分子蒸馏法分离发酵液中的乳酸

以预处理后乳酸发酵液为对象,用分子蒸馏法来进行乳酸的分离提纯,在pH值为2、温度为80℃、进料速率为150～180 mL/h、真空度在20～80 Pa下得到了纯度为96%、耐热15 min的乳酸,同时分析了乳酸的其它几项指标并做了乳酸产品及标准品的质谱图对比。分析的指标中,完全达到GB 2023—80对乳酸的质量规定,并且乳酸产品与标准品的质谱图吻合很好。

高效液相色谱法测定发酵液中有机酸的优化研究

通过高效液相色谱图的分离效果、各个有机酸的线性相关关系、回收率及与常规方法作对比,确定SPE固相萃取柱、C 18色谱柱,研究流动相种类、浓度及pH,检测条件的流速、温度、紫外检测波长的最优条件,以建立高效液相色谱法测定发酵液中7种有机酸的方法。结果表明:在通过SPE固相萃取柱和Tiank C 18色谱柱进行分离后,选定了流动相为0.02 mol/L H 3 PO 4(pH 2.7),流速为0.425 mL/min,在紫外检测波长210 nm处,优化了测定条件。该方法回收率为83%,相对标准偏差(RSD)<0.04%,有机酸的线性相关系数R 2>0.994,可以实现7种有机酸的分离和准确定量。

天然冬虫夏草 冬虫夏草菌丝及发酵液游离氨基酸的种类及含量测定

目的对天然冬虫夏草、冬虫夏草菌丝及发酵液样品进行24种游离氨基酸的分析;进一步了解三者游离氨基酸的种类和含量,为它们的应用研究提供可用的信息及参考。方法采用安捷伦1200 HPLC,C18反相柱梯度分离,邻苯二甲醛-芴甲酯(OPA-FMOC)柱前自动衍生化,利用已知浓度氨基酸标准品进行外标法定量,根据已知浓度氨基酸标准品的峰面积与样品峰面积之比计算出游离氨基酸的含量。结果分析结果表明在24种游离氨基酸的测定中,天然冬虫夏草含有19种,冬虫夏草菌丝含22种,发酵液含23种,三者所缺少的游离氨基酸种类互不相同。三者游离氨基酸的含量有着明显差别和变化,其原因是由于天然冬虫夏草是在野外天然生长,冬虫夏草菌丝和发酵液是人工发酵培养,处于不同的温度和环境条件的原故。结论天然冬虫夏草,冬虫夏草菌丝及发酵液的游离氨基酸的种类和含量并不等同,建议临床配合使用。

高效液相色谱法测定发酵液中的武夷菌素

建立应用高效液相色谱法测定发酵液中武夷菌素含量方法。色谱柱ZORBAX SB-AQ(4.6mm×250mm i.d.,5μm);柱温25℃;流动相为1.4g/L三氯乙酸水溶液,流速1mL/min;检测波长254nm。将色谱峰面积与武夷菌素质量浓度进行线性回归,表明在0.2～1.6g/L质量浓度范围内线性关系良好,变异系数为0.43%～2.08%,回收率为96.59%～100.57%。

高效液相色谱法测定谷氨酸棒杆菌发酵液中17种氨基酸

[目的]建立一种简单高效、可同时检测发酵液中17种氨基酸的方法,并利用此方法对发酵液中的氨基酸进行定量分析。[方法]以2,4-二硝基氟苯为衍生试剂,使用Phenomenex Gemini NX C18(250.0 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温30℃,流动相A为0.05 mmol/L乙酸钠溶液,流动相B为乙腈-水(1∶1,V/V),梯度洗脱,检测波长为360 nm。[结果]17种氨基酸在0.01~2.00 g/L线性相关良好,各相关系数在0.990以上,各氨基酸的加样回收率为87.4%~105.1%。采用该方法对发酵液中的氨基酸进行分析,有10种氨基酸积累,其中谷氨酸、瓜氨酸、精氨酸积累量较大。[结论]该研究建立了一种简单高效、可同时检测发酵液中17种氨基酸的方法,为精氨酸进一步代谢改造提供理论依据。

高效液相色谱法测定发酵液中夫西地酸的含量

建立了快速检测发酵液中夫西地酸含量的高效液相色谱分析方法,采用Angilent Extend-C18色谱柱,用磷酸盐缓冲液—乙腈(30:70)作流动相,流速为1.2 m L·min-1,检测波长为214 nm,柱温为30℃。夫西地酸浓度在10μg^2 000μg·m L-1范围内,夫西地酸峰面积与质量浓度线性良好,相关系数为0.999 1;按标准加入法做回收率,平均回收率达到99.56%;精密度RSD为1.13%。该方法具有分析时间短、操作简便、结果准确,重现性好等特点,特别适用于大量的菌种筛选,提炼、纯化过程的在线监测。

利用高效液相色谱法同时测定土曲霉发酵液中衣康酸及残糖

建立了高效液相色谱（HPLC）快速测定土曲霉发酵液中衣康酸及残糖的分析方法.使用TOSOH TskgeloApak-A色谱柱,以0.75 mmol/L H2SO4为流动相,在柱温45℃,流速1.0 mL/min的条件下,采用示差折光检测器进行检测.结果表明,该方法在20 min内可实现发酵液中衣康酸和葡萄糖的完全分离与定量.衣康酸在0 ～ 10.056 g/L范围内的线性关系良好,相关系数为0.999 9,相对标准偏差（n=6）为0.33％,加标回收率100.88％ ～ 102.74％.葡萄糖在0～6.016 g/L范围内的线性关系良好,相关系数为0.9999,相对标准偏差（n=6）为0.12％,加标回收率101.26％～ 103.12％.该法适用于土黄霉发酵液中衣康酸和葡萄糖的快速、高效分离和定量测定.