发酵虫草菌粉中三种核苷成分的含量测定

目的对发酵虫草菌粉三种核苷成分(尿苷、鸟苷、腺苷)的含量及其聚类比例关系进行研究,旨在为其质量标准提升与新产品开发提供参考。方法采用Waters 2489高效液相色谱仪;色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:A相为甲醇,B相为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液;梯度洗脱;柱温:25℃;检测波长:260 nm;流速:1.0 mL/min;进样量:10μL。结果尿苷、鸟苷、腺苷分别在0.1275~50.9896μg/mL(r=0.9999)、0.1111~44.4595μg/mL(r=0.9999)、0.1351~54.0553μg/mL(r=0.9999)范围内线性关系良好;平均加样回收率(n=6)分别为97.89%(RSD=0.13%)、103.69%(RSD=3.48%)、95.92%(RSD=2.11%)。结论本法操作简便、稳定可靠、灵敏度高、专属性好,可用于发酵虫草菌粉中三种核苷成分含量的准确检测。

在线二维液相色谱法测定发酵虫草菌粉(Cs-4)中6种活性物质

目的:建立发酵虫草菌粉(Cs-4)中尿嘧啶、尿苷、腺苷、腺嘌呤、鸟苷、麦角甾醇6种活性物质的二维液相色谱测定方法。方法:采用二维液相色谱测定法,第一维色谱系统采用亲水相互作用色谱柱,第二维系统采用C18色谱柱。样品经乙腈溶液提取,过滤后进样,5种核苷和碱基在第一维液相系统分离测定,麦角甾醇在第二维液相系统测定。结果:方法中各物质线性范围:尿嘧啶,0.3~30μg·mL-1;尿苷,0.4~40μg·mL-1;腺苷,0.8~80μg·mL-1;腺嘌呤,1.0~100μg·mL-1;鸟苷,2.5~250μg·mL-1;麦角甾醇1.5~150μg·mL-1。方法中各物质加样回收率范围与精密度:尿嘧啶,96.7%~103.4%,1.8%~3.1%;尿苷,98.9%~101.4%,1.7%~2.6%;腺苷,95.9%~104.7%,1.5%~3.5%;腺嘌呤,97.0%~104.0%,1.4%~4.0%;鸟苷,98.2%~101.4%,1.9%~3.1%;麦角甾醇,96.0%~102.0%,2.5%~3.7%。结论:本研究方法显著提高了分析效率,准确度高,可满足药物评价、质量监督等工作的需求;对发展发酵虫草菌粉(Cs-4)等中药复杂成分分离方法,指导药物临床使用具有重要意义。

发酵的冬虫夏草菌粉治疗慢性阻塞性肺疾病和间质性肺疾病随机对照试验的质量评价

目的评价人工冬虫夏草治疗慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)、间质性肺疾病(interstitial lung diseases,ILDs)随机和半随机对照试验的质量。方法计算机检索PubMed、Cochrane Library、中国生物医学文献数据库、中国知网CNKI数据库、万方数据库和维普中文期刊数据库,收集人工冬虫夏草治疗COPD和ILDs的随机对照试验和半随机对照试验。按照Cochrane协作网推荐的评价方法对纳入的研究进行方法学质量评价,按照随机对照试验报告统一标准(consolidated standards of reporting trials,CONSORT)清单进行研究报告质量评价,按照临床指南对纳入研究的疾病诊断标准、干预措施和严重程度评价及结局指标设定进行专业评价。结果检索相关文献,入组126篇文献,其中涉及COPD的研究112篇,涉及间质性肺疾病或矽肺合并COPD的研究14篇。入组文献的研究方法学质量(COPD正确率0%~35.7%;ILDs正确率9.1%~18.2%)和报告质量亟待提高。入选文献在诊断的确认(COPD合理率42.3%;ILDs合理率78.6%)、治疗方案设定(COPD合理率28.8%;ILDs合理率14.3%)和疗效评价指标及治疗终点设计(COPD合理率50%;ILDs合理率64.3%)上也有很大缺陷。结论由于研究质量较差,目前的证据不能证实联合使用发酵的虫草粉对改善COPD和ILDs的疗效有肯定作用,仍需要进一步研究以证实其临床价值。

近5年天然冬虫夏草与发酵虫草菌粉药理研究进展

冬虫夏草是我国传统名贵滋补中药材,具有提高人体免疫力、抗氧化、抗炎、抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤等作用。然而,受诸多因素影响,天然冬虫夏草的产量难以满足人们日益增长的需求。1987年以来,国内相继研发出发酵虫草菌粉。经实验证明具有与天然冬虫夏草相似的有效成分和药理作用,其单方或复方制剂已广泛应用于临床和保健食品中,取得了一定的经济效益和社会效益。本文综述了近5年天然冬虫夏草与发酵虫草菌粉药理研究进展,旨在为其研究与开发提供有价值的参考。

新冠肺炎患者救治及康复中的中药治疗思考

根据近期揭示的新型冠状病毒感染的肺炎的病理改变,基于国家医保政策及中药专业实践,建议临床救治中尽早使用活血化瘀类中药以保护呼吸膜及呼吸道,使用以百令片(胶囊)为代表的虫草菌发酵制剂来抑制细胞因子风暴,以减轻肺纤维化及肾损害。

HPLC-RID测定发酵虫草菌粉(Cs-4)中甘露醇的含量

目的:建立测定发酵虫草菌粉(Cs-4)中甘露醇含量的高效液相色谱-示差折光检测器法(HPLC-RID)。方法:采用Carbomix Ca-NP 5∶8 %色谱柱(7.8 mm × 300 mm,5 μm),以乙腈-水(10∶90)为流动相;流速为0.5 mL/min;柱温为80 ℃;示差折光检测器温度为55 ℃。结果:甘露醇质量浓度在0.099~3.955 mg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 7);方法的精密度、稳定性及重复性良好,RSD均小于2.0 %;平均回收率为96.0 %(RSD=1.67 %)。结论:经方法学验证,本法可用于发酵虫草菌粉(Cs-4)中甘露醇的含量测定,为发酵虫草菌粉(Cs-4)的全面质量控制提供科学依据。

4种市售发酵虫草菌粉胶囊寡糖成分分析

目的:研究4种市售发酵虫草菌粉胶囊中的寡糖成分。方法:首先应用高效薄层色谱(HPTLC)对4种市售发酵虫草菌粉胶囊(百令胶囊、金水宝胶囊、宁心宝胶囊和心肝宝胶囊)寡糖成分进行初步分析,展开剂为正丁醇-异丙醇-乙酸-水(6∶11∶3∶4),显色剂为苯胺-二苯胺-磷酸;再采用HPTLC-MS确定寡糖聚合度,质谱选用正离子模式,质量范围m/z 100~1 500;最后结合淀粉酶酶解-HPTLC分析确定主要糖苷键类型。结果:4种市售发酵虫草菌粉胶囊中,除宁心宝胶囊外,其他3种发酵虫草菌粉胶囊均基本不含寡糖类成分;HPTLC-MS结果显示,宁心宝胶囊样品HPTLC中Rf=0.53、0.48、0.40、0.32、0.27、0.22和0.18处的条带相对分子质量分别约为342、342、504、666、828、991、1 153,分别对应二糖及二糖至七糖;淀粉酶酶解结果提示:宁心宝胶囊中寡糖主要是α-1,4-葡聚寡糖。结论:4种市售发酵虫草菌粉胶囊中,仅宁心宝胶囊含相对多的寡糖类成分,且主要为α-1,4-葡聚寡糖,其产生可能与菌种和/或生产工艺有关。

HPLC-RID测定冬虫夏草及发酵虫草制剂中虫草酸的含量

目的:建立发酵虫草制剂中虫草酸的高效液相色谱含量测定方法。方法:采用正向氨基色谱柱Agilent Zorbax NH2(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水(78∶22)为流动相,流速1.0 m L·min^(-1),柱温30℃,示差折光检测器检测(内部温度35℃)。结果:虫草酸进样量在20.19~100.95μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率(n=6)为98.5%,RSD为0.85%。金水宝胶囊中虫草酸含量为2.29%~3.77%,均值为2.86%;百令胶囊中虫草酸含量为2.42%~5.28%,均值为3.68%;心肝宝胶囊中虫草酸含量为3.78%~5.02%,均值为4.37%;至灵胶囊中虫草酸含量为3.63%~5.12%,均值为4.17%;宁心宝胶囊中虫草酸含量为2.37%~4.08%,均值为3.37%,不同企业的制剂中虫草酸含量差异较大;虫草头孢菌粉系宁心宝胶囊的原料药,此次测定的样品中虫草酸的含量为2.30%~3.27%。可见,这种多厂家生产原料药,多厂家生产制剂的现状导致宁心宝胶囊工艺、原料难统一,标准亟待完善和提高。结论:经方法学验证,本方法可用于测定冬虫夏草及发酵虫草制剂中虫草酸的含量,亦可用于控制药材及制剂的质量。

HPLC柱前衍生化法测定发酵虫草制剂中总氨基酸的含量

目的:建立发酵虫草制剂中总氨基酸的含量测定方法,同时评价各发酵虫草制剂的质量。方法:采用Zorbax C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙酸钠缓冲液(A)-80%乙腈水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱(0~20 min,100%A→97%A;20~24 min,97%A→88%A;24~30 min,88%A→78%A;30~50 min,78%A→68%A;50~50.5 min,68%A→0%A;50.5~60 min,0%A),流速为1.0 m L·min-1,柱温为40℃,检测波长254 nm,运用外标法测定发酵虫草制剂中总氨基酸的含量。结果:各发酵虫草制剂的质量评价,对于独家生产的品种(如金水宝胶囊、百令胶囊和心肝宝胶囊),心肝宝胶囊中总氨基酸含量为199.3~224.9 mg·g^(-1);金水宝胶囊中总氨基酸含量为224.0~281.7 mg·g^(-1);百令胶囊中总氨基酸含量为294.0~346.7 mg·g^(-1),样品各批间一致性较好,可以控制总氨基酸含量结合羟脯氨酸(指标成分)占总氨基酸的含量来控制制剂质量。而对于多厂家生产的发酵虫草制剂(如宁心宝胶囊和至灵胶囊),由于生产工艺的不同和原料来源不同,总氨基酸含量差异较大,宁心宝胶囊中总氨基酸含量为234.9~337.1 mg·g^(-1),至灵胶囊总氨基酸含量为241.1~356.1 mg·g^(-1)。结论:经方法学验证,本文方法可用于测定发酵虫草制剂的氨基酸含量,也可用于评价各发酵虫草制剂的质量。

百令胶囊对Graves病患者自身免疫的调理作用

目的探讨冬虫夏草菌粉(百令胶囊)对Graves病(GD)患者机体免疫状态的调理作用。方法 84例GD患者随机分为对照组(n=42)和治疗组(n=42),对照组根据甲状腺功能水平给予适量甲巯咪唑,治疗组则在相似治疗剂量的基础上加用百令胶囊(2 g/次,3次/d),连续6个月。观察入组时,服药1个月、3个月及6个月后受试者的甲状腺功能(FT3、FT4、TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)水平、抗TSH受体抗体(TR-Ab)水平以及T淋巴细胞亚群(CD3^+,CD4^+,CD8^+及CD4^+/CD8^+)水平。结果 (1)治疗6个月后,两组甲状腺功能均较治疗前下降,差异无统计学意义(P>0.05);(2)治疗组的自身抗体TPO-Ab及TR-Ab水平较治疗前均有下降(P均<0.001);与对照组相比,治疗组抗体滴度显著下降(P均<0.001);(3)疗程可影响TR-Ab的水平,但对TPO-Ab水平无明显作用;(4)治疗6个月后,与对照组相比,治疗组的CD4^+细胞水平下降(P=0.003),CD8^+细胞水平上升(P=0.046),CD4^+/CD8^+比值下降(P=0.027)。结论百令胶囊不仅可以明显改善GD患者体液免疫功能,即降低甲状腺自身抗体TPO-Ab和TR-Ab水平,同时还可以调节细胞免疫水平即T细胞亚群比例,使CD4^+/CD8^+比值下降,从而使GD患者整体自身免疫紊乱状况得到有效改善。

金水宝胶囊中发酵虫草菌粉多糖的指纹图谱研究

目的建立金水宝胶囊发酵虫草菌粉多糖的指纹图谱。方法沸水回流提取金水宝胶囊中的发酵虫草菌粉多糖,经酸水解和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化后采用HPLC法分析,色谱条件为Phenomenex OOG-4252-EO C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.05 mol/L磷酸盐缓冲液梯度洗脱,体积流量1 m L/min,进样量20μL,检测波长250 nm,柱温30℃。结果对组成发酵虫草菌粉多糖的11种单糖成分进行鉴别,并建立了发酵虫草菌粉多糖指纹图谱。通过指纹图谱分析10批金水宝胶囊中各单糖成分,相似度均大于0.999,无显著性差异。结论建立的发酵虫草菌粉多糖指纹图谱操作简单,专属性强,重复性好,能够客观评价金水宝胶囊的质量。

金水宝胶囊生产过程中质量控制方法的建立

目的:完善金水宝胶囊生产过程中的质量控制体系,为该制剂的后续研究与应用提供实验依据。方法:采用高效液相色谱法(HPLC),Ultimate AQ-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),腺苷、鸟苷、尿苷含量测定的色谱条件为流动相甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~14 min,100%~99%B;14~19 min,99%~89%B;19~39 min,89%~85%B),流速0.4 m L·min^-1,柱温30℃,进样量10μL,检测波长260 nm。麦角甾醇含量测定的色谱条件为流动相甲醇-水(98∶2),流速1 m L·min^-1,柱温25℃,进样量10μL,检测波长283 nm。结果:发酵虫草菌粉不同生产阶段样品的指纹图谱中主要色谱峰差异性较小。腺苷、鸟苷、尿苷的线性关系良好(R2均>0.999);三者的加样回收率分别为106.06%,101.25%,105.88%,RSD均<3.0%。于2016-2018年各抽取的20批样品中腺苷、麦角甾醇的含量均符合2015年版《中国药典》的要求,鸟苷、尿苷的质量分别为0.97~1.36,0.67~1.38 mg/粒。结论:市面所售金水宝胶囊质量较为稳定。建立的方法可用于检测金水宝胶囊的质量,且操作简便、稳定可靠,可为发酵虫草菌粉类产品的检测提供参考。

百令胶囊治疗小儿糖尿病肾损伤的效果

目的观察百令胶囊治疗小儿糖尿病肾损伤的临床效果,为改善患儿肾功能及提高治疗总有效率提供帮助。方法选取2018年4月—2020年4月高唐县人民医院收治的糖尿病肾损伤患儿34例作为研究对象,随机分为观察组和对照组各17例,对照组选择常规治疗方案,观察组选择在对照组基础上联合百令胶囊治疗方案,比较两组患儿血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、血清β_(2)-微球蛋白(β_(2)-MG)及转化生长因子-β_(2)(TGF-β1)水平。结果治疗后,观察组患儿SCr、BUN、β_(2)-MG及TGF-β_(2)水平分别为(81.68±8.34)μmol/L、(6.38±1.33)μmol/L、(2.08±0.36)mg/L和(4.62±1.24)μmol/L,均低于对照组的(89.49±8.27)μmol/L、(7.87±1.28)μmol/L、(3.14±0.29)mg/L和(5.64±1.18)μmol/L,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组患儿治疗总有效率为88.24%,高于对照组的76.47%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论百令胶囊可有效改善糖尿病肾损伤患儿的肾功能,提高治疗总有效率,值得在临床上推广应用。