Randomized Double-blind Placebo-controlled Clinical Trial andAssessment of Fermentation Product of Cordyceps Sinensis (Cs-4) inEnhancing Aerobic Capacity and Respiratory Function ofThe Healthy Elderly Volunteers

Objective:Cordyceps sinensis (CS) is a popular natural Chinese herbal medicine for invigoration, health preservation and reducing fatigue. Its natural substance has been prepared as a fermentation product of a specific strain of Cordyceps sinensis (Cs-4). Our objective was to assess the effect of Cs-4 on the exercise capacity of the healthy elderly people in a randomized, double-blind, placebo-controlled trial. Methods:Thirty-seven healthy, elderly Chinese subjects were randomly assigned to receive either Cs-4 (3 g/ day) or identical placebo capsules. Their exercise performance was tested before and after 6 weeks of treatment with a symptom-limited, incremental work rate protocol on a cycle ergometer. Maximum oxygen uptake (VO2max) was measured using a metabolic chart. Anaerobic thresholds (VO26) were identified by two observers using plots of both VCO2 vs VO2 and VE/VO2 vs time. Results: After taking Cs-4 for 6 weeks, VO2max (1 88±0.13 to 2.00±0 14 L/min; P=0.050) and VO2(1.15±0.07 to 1.30±0.09 L/min; P = 0.012) were significantly increased, whereas after placebo application they were unchanged. Conclusion: These findings support the belief held in China that Cs-4 could improve oxygen uptake or aerobic capacity and ventilation function and resistance to fatigue of elderly people in exercise.

冬虫夏草(Cordyceps sinensis)菌丝体固体发酵粉化学成分的分析

本研究对一种冬虫夏草(Cordycepssinensis)菌丝体固体发酵粉的化学成份进行了分析,包括粗成份,生物活性成份,脂肪酸,氨基酸,金属元素等。冬虫夏草菌丝体固体发酵粉中3′-脱氧腺苷含量40.81μg/g、腺苷含量745.4μg/g;甘露醇的含量为165.8mg/g,多糖含量为157.3mg/g;谷氨酸,天门冬氨酸,苯丙氨酸是三大类主要氨基酸;不饱和脂肪酸是优势脂肪酸,以亚油酸,油酸为主。和文献记录的结果相比,虫草发酵粉中3′-脱氧腺苷,甘露醇的含量明显高于冬虫夏草子实体中相应成份的含量;各种氨基酸的含量和水平与冬虫夏草子实体中相应氨基酸的含量和水平相当;虫草发酵粉中的其它化学成份和冬虫夏草子实体中相应成份基本一致。

在线二维液相色谱法测定发酵虫草菌粉(Cs-4)中6种活性物质

目的:建立发酵虫草菌粉(Cs-4)中尿嘧啶、尿苷、腺苷、腺嘌呤、鸟苷、麦角甾醇6种活性物质的二维液相色谱测定方法。方法:采用二维液相色谱测定法,第一维色谱系统采用亲水相互作用色谱柱,第二维系统采用C18色谱柱。样品经乙腈溶液提取,过滤后进样,5种核苷和碱基在第一维液相系统分离测定,麦角甾醇在第二维液相系统测定。结果:方法中各物质线性范围:尿嘧啶,0.3~30μg·mL-1;尿苷,0.4~40μg·mL-1;腺苷,0.8~80μg·mL-1;腺嘌呤,1.0~100μg·mL-1;鸟苷,2.5~250μg·mL-1;麦角甾醇1.5~150μg·mL-1。方法中各物质加样回收率范围与精密度:尿嘧啶,96.7%~103.4%,1.8%~3.1%;尿苷,98.9%~101.4%,1.7%~2.6%;腺苷,95.9%~104.7%,1.5%~3.5%;腺嘌呤,97.0%~104.0%,1.4%~4.0%;鸟苷,98.2%~101.4%,1.9%~3.1%;麦角甾醇,96.0%~102.0%,2.5%~3.7%。结论:本研究方法显著提高了分析效率,准确度高,可满足药物评价、质量监督等工作的需求;对发展发酵虫草菌粉(Cs-4)等中药复杂成分分离方法,指导药物临床使用具有重要意义。

HPLC-RID测定发酵虫草菌粉(Cs-4)中甘露醇的含量

目的:建立测定发酵虫草菌粉(Cs-4)中甘露醇含量的高效液相色谱-示差折光检测器法(HPLC-RID)。方法:采用Carbomix Ca-NP 5∶8 %色谱柱(7.8 mm × 300 mm,5 μm),以乙腈-水(10∶90)为流动相;流速为0.5 mL/min;柱温为80 ℃;示差折光检测器温度为55 ℃。结果:甘露醇质量浓度在0.099~3.955 mg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 7);方法的精密度、稳定性及重复性良好,RSD均小于2.0 %;平均回收率为96.0 %(RSD=1.67 %)。结论:经方法学验证,本法可用于发酵虫草菌粉(Cs-4)中甘露醇的含量测定,为发酵虫草菌粉(Cs-4)的全面质量控制提供科学依据。

一种含有发酵虫草菌粉CS-4超微粉的片剂工艺研究

目的:研究一种含有发酵虫草菌粉CS-4超微粉的片剂制备工艺。方法:采用湿法制粒压片,并对发酵虫草菌粉CS-4超微粉的粒径分布和电镜扫描进行分析,以混合粉末的高温高湿实验现象为评价指标对各类辅料进行筛选;以混合颗粒的出片力、崩解时间、硬度、脆碎度、抗张强度为考察指标优选粘合剂和润滑剂,再进行体外释放度考察,确定最佳处方,并与市售的金水宝片进行体外释药对比研究。结果:优选的最佳处方为发酵虫草菌粉CS-4超微粉:微晶纤维素:蔗糖:氢氧化铝为25∶3∶5∶5,10%浓度的明胶溶液用量为5%,润滑剂用量为1%。结论:该工艺处方合理,片剂成形性好,质量稳定,可有效解决发酵虫草菌粉CS-4超微粉压片成形性差的问题,适合规模化生产应用。

快速消解-电感耦合等离子体质谱法测定虫草菌粉中9种元素

建立了一种快速消解-电感耦合等离子体质谱法测定发酵虫草菌粉中钾、镁、钙、锰、锌、铅、镉、铝、砷9种元素的含量。采用纯硝酸快速消解发酵虫草菌粉标准物质样品后,冷却,定容后利用电感耦合等离子体质谱法进行测定。结果表明,以锗、铟、铋元素作为内标,9种元素的质量浓度在0~50 mg/L范围内与吸光度具有较好的线性关系,线性相关系数均不小于0.998,检出限为0.010~0.038 mg/kg,定量限为0.042~0.125 mg/kg。对发酵虫草菌粉样品进行测定,9种元素加标回收率为96.8%~109.3%,测定结果的相对标准偏差为1.03%~6.98%(n=6)。该方法可用于大批量发酵虫草菌粉检测钾、镁、钙、锰、锌、铅、镉、铝、砷含量。

发酵虫草菌粉对DEN致大鼠肝损伤的保护作用及TGF-β1/Smads通路的影响

目的:探讨发酵虫草菌粉(fermented cordyceps sinensis powder,CS)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导大鼠肝损伤的保护作用及对TGF-β1/Smads通路的影响。方法:无特定病原体(SPF级)健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠48只,体质量(180±20) g,随机分为4组:对照组、模型组、CS治疗组与CS溶媒组,每组12只。模型组:灌胃给予10 mg/kg DEN每周5次共8周,构建慢性肝损伤模型;对照组:灌胃给予与模型组相同体积的生理盐水; CS治疗组:在建模4周后灌胃给予80 mg/kg CS每周5次共8周; CS溶媒组:灌胃给予与CS组相同体积的5%甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液。实验结束后,麻醉,脊椎脱臼法处死大鼠,收集血液,紫外分光光度法检测各组大鼠血清中AST、ALT以反映肝功能; H&E染色观察肝组织形态变化,Masson染色观察胶原沉积情况;改良Nycodenz法分离各组大鼠原代肝星状细胞(HSC),RT-qPCR检测肝组织与HSC中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子(TGF)-β1、Smad3、Smad7 mRNA的表达水平; Western blot检测肝组织Smad3与Smad7蛋白表达水平。结果:与对照组相比,模型组大鼠血清中AST、ALT含量显著升高,H&E染色结果显示肝脏组织形态显著改变,Masson染色结果显示胶原沉积增多;与模型组相比,CS治疗四周能显著降低肝损伤大鼠血清中升高的AST、ALT水平,改善其肝脏病理损伤程度,减少肝脏中胶原沉积。RT-qPCR结果显示,CS可减少肝损伤大鼠组织及HSC中α-SMA、TGF-β1 mRNA表达水平,增加Smad7mRNA表达水平; CS溶媒组各项检测指标均与模型组无差异;此外,Western blot结果显示,CS可下调肝损伤大鼠肝组织Smad3蛋白的表达,上调Smad7。结论:CS可显著改善DEN诱导的大鼠肝损伤,该作用可能与CS上调Smad7,并抑制TGF-β1/Smads通路有关。

响应面分析法优化发酵虫草菌粉多糖的提取工艺

【目的】采用响应面分析法优化发酵虫草菌粉多糖的提取工艺。【方法】在单因素实验的基础上选取因素与水平,根据中心组合实验Box-Behnken设计原理采用3因素3水平的响应面分析法设计实验。【结果】各因素对多糖提取率的影响次序为:提取温度>提取时间>料液比;通过经典分析确定了发酵虫草菌粉最佳提取工艺为:提取温度为95℃,料液比为1∶21,提取时间为73 min。在这样的环境下发酵虫草菌粉多糖提取率理论值为4.31%,实际提取率为(4.20±0.1)%。【结论】响应面分析法用于优化发酵虫草菌粉多糖的提取工艺可行,建立的数学模型与实验数据相符。

用高效液相色谱法柱前衍生化测定发酵虫草菌粉氨基酸成分

采用高效液相色谱法对经2,4-二硝基氟苯衍生化后的氨基酸有效分离,外标法测定了发酵虫草菌粉中各种氨基酸含量,结果表明该法操作简便、结果良好;发酵虫草菌粉含有丰富的氨基酸,氨基酸总量高达37％。

发酵虫草菌粉抗大鼠肝纤维化作用及机理研究

目的探讨发酵虫草菌粉抗大鼠肝纤维化作用及作用机理。方法将30只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组和虫草组,采用40%四氯化碳(CCl4)每周2次皮下注射6周制作大鼠肝纤维化模型,经灌胃给药6周后,在麻醉状态下采血,检测大鼠血清肝功能和肝纤维化指标、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)。结果与模型组比较,虫草组肝脏纤维化程度明显减轻,谷丙转氨酶(ALT)降低和白蛋白(ALB)升高作用明显(P<0.05),同时非常显著改善肝纤维化指标、MMP-1及TIMP-1(P<0.01)。结论发酵虫草菌粉具有抗肝纤维化作用且与升高MMP-1及降低TIMP-1有关。

发酵虫草菌粉(Cs-4)对糖尿病肾脏疾病大鼠肾功能的保护作用及初步机制

目的:探讨发酵虫草菌粉(Cs-4)对糖尿病肾脏疾病大鼠肾功能的保护作用及初步机制。方法:采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(40 mg·kg^(-1))的方法复制糖尿病肾脏疾病大鼠模型。将所有模型大鼠随机分为模型组、Cs-4低(300 mg·kg^(-1))、中(600 mg·kg^(-1))、高剂量组(1200 mg·kg^(-1))及阳性药组(厄贝沙坦,mg·kg^(-1)),同时设正常组(给予普通饲料)和高糖高脂组(给予高糖高脂饲料),并均给予腹腔注射相同剂量的柠檬酸缓冲液。各组大鼠每天灌胃(ig)给药1次,连续8周。实验结束收集24 h内尿液,测定大鼠空腹血糖。收集大鼠血清、肾脏,以试剂盒法检测大鼠血清尿素氮、血肌酐、超氧化物歧化酶、丙二醛、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、白介素6、白介素8、肿瘤坏死因子α、超敏c反应蛋白、游离脂肪酸、糖化血清蛋白、单核细胞趋化蛋白1、转化生长因子β1及尿液尿肌酐、尿蛋白、尿微量白蛋白含量,以苏木精-伊红染色观察大鼠肾组织病理形态学变化。结果:与模型组相比,Cs-4各剂量组在不同程度上可降低肾重、肾重/体重、空腹血糖、尿素氮、血肌酐、尿蛋白、尿微量白蛋白、总胆固醇、低密度脂蛋白、丙二醛、白介素6、白介素8、肿瘤坏死因子α、超敏c反应蛋白、游离脂肪酸、糖化血清蛋白、单核细胞趋化蛋白1、转化生长因子β1水平,增加体重,提高尿肌酐、内生肌酐清除率、高密度脂蛋白、超氧化物歧化酶水平(P<0.05,P<0.01),且Cs-4高剂量组作用更显著,在不同程度上能改善肾组织形态损伤。结论:Cs-4对糖尿病肾脏疾病大鼠肾功能损害具有一定的保护作用,其机制可能与降低血糖、调节血脂、改善氧化应激及炎症水平、抑制肾脏纤维化程度有关。

近5年天然冬虫夏草与发酵虫草菌粉药理研究进展

冬虫夏草是我国传统名贵滋补中药材,具有提高人体免疫力、抗氧化、抗炎、抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤等作用。然而,受诸多因素影响,天然冬虫夏草的产量难以满足人们日益增长的需求。1987年以来,国内相继研发出发酵虫草菌粉。经实验证明具有与天然冬虫夏草相似的有效成分和药理作用,其单方或复方制剂已广泛应用于临床和保健食品中,取得了一定的经济效益和社会效益。本文综述了近5年天然冬虫夏草与发酵虫草菌粉药理研究进展,旨在为其研究与开发提供有价值的参考。

功能肽、发酵虫草菌粉和多酚枣粉对断奶仔猪饲料中常规替抗组分的替代效果研究

试验旨在研究在日粮中添加功能肽、发酵虫草菌粉和多酚枣粉替代常规替抗组分对断奶仔猪生长性能、抗氧化和免疫功能的影响。选取672头体况良好、断奶日龄和体重相近的“杜×长×大”三元杂交仔猪,随机分为4组,每组6个重复,每个重复28头仔猪。对照组仔猪饲喂常规替抗成分的基础日粮(商品粮),试验组分别使用1 kg/t功能肽、3 kg/t发酵虫草菌粉和2 kg/t多酚枣粉替代基础日粮的常规替抗成分。结果显示:与对照组相比,功能肽组、发酵虫草菌粉组和多酚枣粉组仔猪的末重均具有增加趋势(P=0.05);多酚枣粉组仔猪的平均日增重显著高于其他组(P<0.05);虫草菌粉组仔猪的料重比显著低于功能肽组(P<0.05);多酚枣粉组仔猪的死淘率和腹泻率高于其他组。虫草菌粉组和多酚枣粉组仔猪血清超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于功能肽组(P<0.05)。研究表明,日粮中使用功能肽、虫草菌粉和多酚枣粉替代常规替抗组分能够提升断奶仔猪的生长性能;虫草菌粉和多酚枣粉能够提升仔猪免疫力。

虫草蝙蝠蛾拟青霉（C1501）发酵菌粉、灵芝提取物及葛根提取物对化学性肝损伤的辅助保护作用

目的:观察虫草蝙蝠蛾拟青霉(C1501)发酵菌粉、灵芝提取物及葛根提取物(简称CGP)对急性肝损伤小鼠谷丙转氨酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate Aminotransferase,AST)、肝细胞变性及坏死程度的影响。方法:采用CCl4诱导小鼠急性化学性肝损伤模型,将动物随机分成5组,分别是空白对照组,模型对照组,CGP实验设计按人体推荐量的5倍、10倍和30倍,即每日337.5 mg/(kg·bw),675 mg/(kg·bw)和2 025 mg/(kg·bw)为低、中、高剂量组,检测血清ALT、AST值,并取肝脏作病理切片,观察肝脏的病理损伤情况。结果:以337.5、675、2 025 mg/kg BW剂量的CGP灌胃给予小鼠36天,并以四氯化碳造成急性肝损伤模型,CGP提取物675 mg/(kg·bw)、2 025 mg/(kg·bw)剂量组的ALT、AST均低于模型对照组,差异具有统计学意义(*P<0.05)。337.5 mg/(kg·bw)、675 mg/(kg·bw)、2 025 mg/(kg·bw)三个剂量组的肝细胞气球样变与模型对照组比较,差异具有统计学意义(**P<0.01);2 025 mg/(kg·bw)剂量组肝细胞水样变程度低于模型对照组,差异具有统计学意义(**P<0.01);675 mg/(kg·bw)、2 025 mg/(kg·bw)剂量组的肝细胞坏死程度低于模型对照组,差异具有统计学意义(*P<0.05)。结论:虫草蝙蝠蛾拟青霉(C1501)发酵菌粉、灵芝提取物及葛根提取物(CGP)对化学性肝损伤有辅助保护功能。

虫草联合复方ɑ-酮酸对维持性血液透析患者营养状况的影响

目的探讨发酵虫草菌粉联合复方ɑ-酮酸及低蛋白饮食对维持血透析患者营养状况影响的观察。方法观察60例血液透析患者治疗前后营养指标(BMI、握力、ALB、Hb、PA、TG、CHO、CRP)、血生化指标(Scr、血钙、血磷、血钾)。结果两组治疗前后ALB、Hb、PA、TG、CHO、CRP、血钙、血磷均较治疗前好转,其中治疗组ALB、PA明显优于对照组。结论发酵虫草菌粉联合复方ɑ-酮酸及低蛋白饮食能改善维持性血液透析患者营养状况、血脂代谢、钙磷代谢及微炎症状态。

HPLC法测定发酵冬虫夏草菌丝粉中麦角甾醇的含量

通过样品处理及检测条件优化,建立发酵冬虫夏草菌丝粉麦角甾醇的HPLC检测方法。结果表明,采用C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-水(98∶2)为流动相,检测波长280 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温为35℃,进样量为20μL,麦角甾醇浓度为10.36~103.6μg·mL^-1时,浓度与峰面积呈线性关系;加标回收率为98.5%,相对标准偏差为0.79%。

发酵冬虫夏草菌粉对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨发酵冬虫夏草菌粉对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响。方法 24只SD大鼠均分为糖尿病(A)组、治疗(B)组和对照(C)组,A、B组饲喂高糖高脂饲料8周并注射链脲佐菌素30mg/kg建立糖尿病大鼠模型,C组饲喂普通饲料作对照。B组成模后予发酵冬虫夏草菌粉200mg·kg-1·d-1灌胃8周,A、C组予等体积无菌水灌胃。计算三组内生肌酐清除率(CCr)、24-h尿白蛋白排泄率(UAER),流式细胞术检测肾脏细胞凋亡率,免疫组化法检测肾组织Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与C组相比,A、B组CCr降低,24-h UAER、肾脏细胞凋亡率和肾组织Bcl-2和Bax表达升高(P<0.05或P<0.01)。与A组相比,B组CCr和肾小管上皮细胞Bcl-2表达升高,24-h UAER、肾脏细胞凋亡率和肾小管上皮细胞Bax表达降低(P<0.05)。结论发酵冬虫夏草菌粉能抑制糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡,与影响Bcl-2/Bax基因表达有关。

发酵虫草菌粉类产品质量标准研究进展

随着冬虫夏草资源的日益稀缺,从中分离提取的药用菌株经人工液体深层发酵加工得到的菌粉,即发酵虫草菌粉,已逐渐成为其替代品。现代药理学证明,发酵虫草菌粉与冬虫夏草有效成分类似,具有相似的药理作用。目前,市场上发酵虫草菌粉类产品众多,主要有金水宝胶囊、百令胶囊、心肝宝胶囊、至灵胶囊、宁心宝胶囊五大品种。其中,仅金水宝胶囊和百令胶囊被收载入2015年版《中国药典》,质量标准相对较为全面,而其他产品的质量标准则较为粗放。对于发酵虫草菌粉类产品,目前尚无统一对其产品质量进行全面控制的方法。因此,完善并统一发酵虫草菌粉类产品的质量标准是提升其产品质量标准及保证其产品安全、优质、高效的关键。文章全面综述了发酵虫草菌粉类产品的化学成分及质量标准研究进展,分析了现有发酵虫草菌粉类产品质量标准的不足,提出了建立一个更为科学合理的质量标准新模式以综合评价其质量方法的建议,旨在为发酵虫草菌粉类产品的质量标准提升及规范化生产提供参考。